一种毒素蛋白的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种毒素蛋白的纯化方法，其包括如下步骤：(1)将含有能特异降解抗毒素蛋白的蛋白酶的假交替单胞菌SCSIO 6842的菌体破碎得到全细胞裂解液；(2)将毒素基因和抗毒素基因扩增并克隆到表达载体中诱导其表达，得到毒素蛋白和抗毒素蛋白的复合物；(3)对毒素蛋白和抗毒素蛋白复合物进行纯化；(4)将步骤(1)所得全细胞裂解液与步骤(3)所得复合物混合处理，从而分离毒素蛋白并纯化、脱盐，得到毒素蛋白。本发明专利技术纯化方法具有蛋白活性高、操作简单、成本低等优点，具有良好的应用前景。本发明专利技术还公开了一种假交替单胞菌SCSIO 6842，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为中国.北京，保藏号为CGMCC 1.15540，保藏日为2016年2月23日。

Purification method of toxin protein

The invention discloses a method for purifying a protein toxin, which comprises the following steps: (1) will contain specific degradation of antitoxin protein protease Pseudoalteromonas SCSIO 6842 was broken by whole cell lysates; (2) the toxin gene and anti toxin gene amplification and cloning expression the carrier induced the expression, to obtain the complex toxin and antitoxin protein; (3) the toxin and antitoxin protein complexes were purified; (4) the step (1) of the whole cell lysates and step (3) to handle the complex mixture, resulting in the separation and purification of toxin protein, desalination get, toxin. The purification method of the invention has the advantages of high protein activity, simple operation, low cost, and the like, and has good application prospect. The invention also discloses a Pseudoalteromonas SCSIO 6842, preserved in general microbial center Chinese microbe preservation management committee, Beijing. China address for the preservation, preservation number is CGMCC 1.15540, preserved on February 23, 2016.

【技术实现步骤摘要】
一种毒素蛋白的纯化方法
本专利技术属于蛋白质提取纯化领域，更具体地说，涉及一种高效且可维持蛋白活性的毒素蛋白的纯化方法。
技术介绍
毒素-抗毒素系统广泛存在于环境微生物和病原微生物的基因组中，在肠道益生菌中也有发现，且毒素-抗毒素系统在可移动遗传元件中出现的频率高于基因组的其它位置，这引起了国际微生物学界的高度关注。毒素-抗毒素系统是由一个稳定的毒素蛋白和一个不稳定的抗毒素组成。毒素-抗毒素系统最早发现存在于低拷贝的质粒上，并在维持质粒稳定性中起着关键作用，目前已有实验结果证实成对存在可以有效调控质粒的稳定性。此外，近年的研究还发现毒素-抗毒素系统还具有重要的生理学功能如基因组的稳定，细菌生物被膜的形成，细菌持续性感染(persistedcellformation)，控制生长以及细胞的程序性死亡等相关联，因此毒素-抗毒素的研究越来越被重视，越来越被关注。特别是在不同的抗生素、高温和营养匮乏等压力条件刺激下，毒素-抗毒素系统会被激活，而毒素-抗毒素系统被激活的机制是抗毒素蛋白很不稳定并且很容易在压力条件被激活的各种蛋白酶所降解，从而释放出毒素蛋白，游离的毒素蛋白再行使它的功能。毒素蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种假交替单胞菌SCSIO 6842，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为中国.北京，保藏号为CGMCC 1.15540，保藏日为2016年2月23日。

【技术特征摘要】
1.一种假交替单胞菌SCSIO6842，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为中国.北京，保藏号为CGMCC1.15540，保藏日为2016年2月23日。2.一种毒素蛋白的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将含有能特异性降解抗毒素蛋白的蛋白酶的假交替单胞菌SCSIO6842的菌体破碎得到全细胞裂解液；(2)将毒素基因和抗毒素基因扩增并克隆到表达载体中，诱导表达载体同时表达毒素蛋白和抗毒素蛋白，得到毒素蛋白和抗毒素蛋白的复合物；(3)对毒素蛋白和抗毒素蛋白复合物进行纯化；(4)将步骤(1)所得全细胞裂解液与步骤(3)所得复合物混合静置反应，使毒素蛋白分离出来并进行纯化、脱盐，得到毒素...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓雪，李百元，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44