一种高效促使脂肪干细胞增殖的方法及其试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种高效促使脂肪干细胞增殖的方法，其中，所述方法包括通过使用明胶包被的细胞培养板或培养皿和明胶包被的细胞培养瓶，在重组人表皮生长因子、重组人血小板衍生生长因子、重组人碱性成纤维生长因子、胰岛素、转铁蛋白和胎牛血清等联合培养下，从脂肪中高效促使脂肪干细胞增殖生长，15天内50mL脂肪来源的细胞可培养获取10

Method and kit for efficiently promoting proliferation of adipose derived stem cells

The present invention provides a method for efficiently, promote fat stem cell proliferation, the method includes using gelatin coated cell culture plates or Petri dishes and gelatin coated cell culture bottle, the recombinant human epidermal growth factor, recombinant human platelet derived growth factor, recombinant human basic fibroblast growth into co culture factor, insulin, transferrin and fetal bovine serum, from the fat, promote fat stem cell proliferation and growth, within 15 days of 50mL adipose derived cells can be grown for 10

【技术实现步骤摘要】
一种高效促使脂肪干细胞增殖的方法及其试剂盒
本专利技术涉及一种高效促使脂肪干细胞增殖的方法以及通过所述方法获得的高效促使脂肪干细胞增殖的试剂盒。特别地，本专利技术涉及采用明胶包被的细胞培养板或培养皿和明胶包被的细胞培养瓶，在重组人表皮生长因子、重组人血小板衍生生长因子、重组人碱性成纤维生长因子、胰岛素、转铁蛋白和胎牛血清等联合培养下，从脂肪中高效促使脂肪干细胞增殖生长。本专利技术获得的脂肪干细胞可用于医学美容，包括皮肤除皱、祛斑和丰胸等领域。
技术介绍
由于生物技术的快速发展，医学美容和化妆品均应用到生物技术进行开发产品，特别是近年来，将细胞技术应用美容行业中，并成为大家所逐渐认可的领域。如从皮肤中培养的成纤维细胞和脂肪中获取的脂肪干细胞等，都已经在医学美容上进行临床研究和应用，对皮肤皱纹、斑痕和丰胸等直接注射，使得这些细胞能在皮肤中分化生长，对皮肤起着填充和修复功能。脂肪干细胞是目前研究热点的一种成体干细胞，该细胞增殖能力比较好，体外培养能保持稳定的生长增殖活性，且具有多项分化潜能，也已被应用到美容治疗中。但通常脂肪干细胞在体外培养增殖时，生长速度慢，达到108以上细胞数需要20天本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效促使脂肪干细胞增殖的方法，其特征在于，所述方法包括通过使用明胶包被的细胞培养板或培养皿和明胶包被的细胞培养瓶，在重组人表皮生长因子、重组人血小板衍生生长因子、重组人碱性成纤维生长因子、胰岛素、转铁蛋白和胎牛血清的联合培养下，从脂肪中高效促使脂肪干细胞增殖生长；其中，所述脂肪干细胞来自于50mL脂肪中，15天内可培养获取10

【技术特征摘要】
1.一种高效促使脂肪干细胞增殖的方法，其特征在于，所述方法包括通过使用明胶包被的细胞培养板或培养皿和明胶包被的细胞培养瓶，在重组人表皮生长因子、重组人血小板衍生生长因子、重组人碱性成纤维生长因子、胰岛素、转铁蛋白和胎牛血清的联合培养下，从脂肪中高效促使脂肪干细胞增殖生长；其中，所述脂肪干细胞来自于50mL脂肪中，15天内可培养获取109以上的脂肪干细胞，脂肪干细胞经流式细胞仪检测，高表达CD90+为≥90％、CD73+为≥90％和CD105+为≥90％，低表达CD34+为≤5％、HLA-DR+为≤5％和CD14+为≤5％；制备得到的脂肪干细胞可在体积百分比为40％的脂肪干细胞培养液、体积百分比为10％的二甲基亚砜和体积百分比为50％的胎牛血清组成的冻存液中储存在-196℃液氮罐中；优选该脂肪干细胞复苏后，仍高表达CD90、CD73和CD105，低表达CD34、HLA-DR和CD14。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述明胶包被的细胞培养板、培养皿或细胞培养瓶，为使用质量体积比为1-20％的明胶在4℃冰箱过夜或37℃孵育1小时后4℃冰箱过夜，在细胞培养容器中进行包被；包被后吸除明胶液，在生物安全柜或超净台中通风干燥，干燥后保存在4℃冰箱备用。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞因子使用浓度为1-200ng/mL重组人表皮生长因子、1-200ng/mL重组人血小板衍生生长因子、1-200ng/m重组人碱性成纤维生长因子、1-500ng/mL胰岛素、1-500ng/mL转铁蛋白和/或1-20％胎牛血清。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述细胞因子使用浓度，优选地为5-50ng/mL重组人表皮生长因子、5-50ng/mL重组人血小板衍生生长因子、5-50ng/m重组人碱性成纤维生长因子、10-100ng/mL胰岛素、10-100ng/mL转铁蛋白和/或2-10％胎牛血清。5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，脂肪组织50mL，用生理盐水反复冲洗5次，尽量吸除脂肪中油及血细胞；使用1∶1的质量体积比为0.25％的胰酶和质量体积比为0.1％的I型胶原酶20-50mL，在37℃培养箱中消化60分钟，每隔15分钟用漩涡振荡仪振荡2分钟；消化后1500rpm离心10分钟，吸弃上层油脂后加入生理盐水重悬，用100μm细胞筛过滤；细胞悬液1000rpm离心10分钟，细胞沉淀用生理盐水重悬洗涤2次后加入细胞培养液重悬，苔盘兰染色计数后按1-10×106细胞/ml加入到明胶包被的细胞培养板或培养皿中培养，于37℃，5％CO2培养箱中培养24-72小时；培养24-72小时后用5ml移液管吸弃培养液，加入细胞培养液进行换液，细胞培养板或培养皿继续放置37℃，5％CO2培养箱中继续培养；当脂肪干细胞生长融合达到80％以上时进行消化扩瓶，将培养液吸除，取pH值为7.4的1×PBS洗涤一次后加入0.5ml0.25％胰酶到培养瓶中，消化2-3分钟后加入200μl胎牛血清终止消化，再加入生理盐水，用5mL移液管吹打，吸至15ml离心管中，再用生理盐水洗涤一次，加入到同一个15mL离心管中，1000转每分钟离心10分钟收集脂肪干细胞；离心后用1mL新鲜培养液重悬，计数，用5mL移液管加入10mL新鲜的细胞培养液，加入到1瓶胶原包...

【专利技术属性】
技术研发人员：宗玺，王锦杰，
申请(专利权)人：泰州市数康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32