脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗肥胖药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗肥胖药物中的应用，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体由如下方法制备而成：(1)将剥离的脂肪组织分散于消化液中，以产生细胞悬浮液；(2)离心细胞悬浮液，以形成细胞沉淀，分离沉淀，洗涤，得到含有脂肪来源间充质干细胞的血管基质成分；(3)在体外培养体系中对ADSC进行扩增培养，收集扩增培养后的上清液进行浓缩，向浓缩后的上清液中加入外泌体提取试剂，即提取得到脂肪来源间充质干细胞外泌体。本发明专利技术的脂肪来源间充质干细胞外泌体可以促进白色脂肪米色化，以实现产热驱动的能量消耗，从而抵抗肥胖的发生发展。

Application of adipose derived mesenchymal stem cell extracellular body in preparing medicine for treating obesity

The present invention discloses adipose derived mesenchymal stem cells exosomes in preparation for the application of obesity drugs, the adipose derived mesenchymal stem cells by the exosome preparation method is as follows: (1) and will be stripped of adipose tissue dispersed in the digestive juice, to produce a cell suspension; (2) centrifugal suspension cells to form a cell separation precipitation, precipitation, washing, contain adipose derived mesenchymal stem cells in the vascular matrix; (3) in the training of the ADSC system were amplified in vitro, collect the supernatant after amplification by concentrating, adding to the concentrated supernatant after extracting reagent exosomes, which is extracted from adipose derived mesenchymal stem cells exosomes. The adipose derived mesenchymal stem cells of the present invention can promote white fat to be colored so as to achieve energy expenditure driven by heat production, thereby resisting the occurrence and development of obesity.

【技术实现步骤摘要】
脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗肥胖药物中的应用
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗肥胖药物中的应用。
技术介绍
肥胖是指由于能量过剩导致脂肪在体内的过度堆积所致的慢性疾病。肥胖可分为单纯性肥胖和继发性肥胖，通常意义上的肥胖指的是单纯性肥胖，主要是由于能量摄入大于消耗，导致多余能量在体内以脂肪形式过度聚集而成。继发性肥胖是伴随某些疾病发生的，如垂体性肥胖。目前采用体重指数(bodymassindex,BMI)作为判定肥胖的标准，BMI≥25为超重，≥30视为肥胖。近年来，由于饮食结构和生活方式的改变，无论在发达国家还是发展中国家，肥胖的发病率急剧上升。据2014年世界卫生组织最新统计，中国的超重人群已超过34％。随着肥胖发生率的增加，肥胖引发Ⅱ型糖尿病、心血管疾病甚至癌症等慢性疾病的发病率也逐年增加。因此，肥胖是当今世界范围内一个重要的公共健康问题，针对肥胖的干预策略是防治肥胖相关疾病的重要措施。机体内脂肪组织可分为以贮存能量为主的白色脂肪组织(肥胖主要累及部位)和以产热方式消耗能量为主的棕色脂肪组织；而白色脂肪组织中出现表达棕色脂肪特异性解偶联蛋白(UCP1)的米色脂肪组织，即白色脂肪米色化，可促进机体以产热方式消耗能量，有效抵抗肥胖的发生发展。脂肪来源间充质干细胞(ADSC)存在于脂肪组织血管基质成分(SVF)中，具有自我更新和多向分化潜能。ADSC在体外可被诱导分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和内皮细胞等不同的组织细胞，是目前组织修复和再生领域的研究重点和热点。脂肪来源间充质干细胞外泌体可以携带具有生物学活性的蛋白质和RNA多种物质等，并将有效成分及信息高效传递至受体细胞，在细胞间的信息交流中起重要作用。目前对于脂肪来源间充质干细胞的研究主要涉及在肾脏、眼底疾病中的用途(CN102048756A)、在治疗勃起功能障碍的用途(CN105902568A)、在制备肝纤维化治疗制剂的用途(CN103436555A)、在制备治疗骨性关节炎制剂的用途(CN105748519A)、在制备肝癌化疗增敏制剂中的用途(CN103451152A)等，但迄今还未有关于脂肪来源间充质干细胞及其外泌体在治疗肥胖方面的报道。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的提供脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗肥胖药物中的应用。本专利技术研究发现，脂肪来源间充质干细胞外泌体可以在不影响小鼠摄食量的基础上，通过诱导白色脂肪米色化抑制小鼠的体重增加，达到治疗肥胖的作用，由此提出了下述的
技术实现思路
：本专利技术的第一方面，提供脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗肥胖药物中的应用。本专利技术中，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体由如下方法制备而成：(1)将剥离的脂肪组织分散于消化液中，以产生细胞悬浮液；(2)离心细胞悬浮液，以形成细胞沉淀，分离沉淀，洗涤，得到含有脂肪来源间充质干细胞(ADSC)的血管基质成分(SVF)；(3)在体外培养体系中对ADSC进行扩增培养，收集扩增培养后的上清液，浓缩，向浓缩后的上清液中加入外泌体提取试剂，即提取得到脂肪来源间充质干细胞外泌体。优选的，步骤(1)中，所述消化液是由KRB缓冲液和Ⅰ型胶原酶组成；更优选的，KRB缓冲液和Ⅰ型胶原酶的组成比例为1ml：2mg。优选的，步骤(2)中，离心转速为2000rpm，离心时间为5分钟。优选的，步骤(3)中，扩增培养的条件为：用不含外泌体的10％胎牛血清的DMEM培养基(含有bFGF)培养ADSC。优选的，步骤(3)中，所述外泌体提取试剂为Exoquick-TCTM外泌体提取试剂。本专利技术中，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体具有TSG101、CD9、CD63和HSP90标志。优选的，本专利技术中，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体来源于小鼠附睾处脂肪组织。本专利技术的第二方面，提供包含上述脂肪来源间充质干细胞外泌体的组合物在制备治疗肥胖药物中的应用。本专利技术的第三方面，提供脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备促进白色脂肪米色化的生物制剂中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术首次提出了脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗肥胖药物中的新用途。本专利技术研究发现，ADSC来源外泌体可以促进白色脂肪米色化，以实现产热驱动的能量消耗，从而抵抗肥胖的发生发展，本专利技术的ADSC来源外泌体可以在不影响能量摄入的基础上抑制体重增加，达到治疗肥胖的作用，从而可作为用于肥胖治疗的新的生物制剂。此外，本专利技术还提供了上述脂肪来源间充质干细胞外泌体的制备方法，操作简单可行。附图说明构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。图1：脂肪来源间充质干细胞外泌体的透射电镜图；图中，白色标尺为150nm。图2：外泌体标志western-blot的鉴定结果。图3：体重曲线的变化。图4：外泌体干预治疗结束后体重的统计图。图5：外泌体干预治疗时摄食量的统计图。图6：外泌体干预治疗结束后各个部位脂肪的照片。图7：脂肪重量的统计图。图8：白色脂肪米色化中UCP1的表达；图中A：小鼠附睾处脂肪组织中UCP1的表达；图中B：下肢皮下脂肪组织中UCP1的表达。图9：肝脏重量的统计图。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。术语说明：肥胖：由于能量过剩导致脂肪在体内的过度堆积所致的慢性疾病。ADSC(adipose-derivedmesenchymalstemcell)：脂肪来源间充质干细胞，存在于脂肪组织的血管基质成分中，是脂肪组织中的脂肪细胞前体，具有自我更新和多向分化潜能。外泌体(exosome)：是细胞分泌外排的一类囊泡结构，直径约为30-120nm，内含多种蛋白和RNA物质，可通过旁分泌或者内分泌方式作用于相应的组织或细胞，是介导细胞间信息传递的一个重要介质。正如
技术介绍
所介绍的，现有技术中还未有关于脂肪来源间充质干细胞及其外泌体在治疗肥胖的报道。基于此，本专利技术提出了一种脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗肥胖药物中的应用。在本申请的一种实施方案中，通过建立饮食诱导高脂肥胖模型，进行ADSC来源外泌体干预，分别检测外泌体干预后小鼠的体重、摄食量、不同部位脂肪组织的重量变化、小鼠附睾处脂肪组织以及下肢皮下脂肪组织中UCP1的表达以及小鼠肝脏的重量。综上，通过上述研究发现：ADSC来源外泌体能减轻饮食诱导肥胖小鼠的体重，以及各个部位的脂肪重量，起到治疗肥胖的作用。为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。本专利技术实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。实施例1：ADSC的提取与分离⑴脂肪组织的分离：选本文档来自技高网...

【技术保护点】
脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗肥胖药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗肥胖药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体由如下方法制备而成：(1)将剥离的脂肪组织分散于消化液中，以产生细胞悬浮液；(2)离心细胞悬浮液，以形成细胞沉淀，分离沉淀，洗涤，得到含有脂肪来源间充质干细胞的血管基质成分；(3)在体外培养体系中对ADSC进行扩增培养，收集扩增培养后的上清液，浓缩，向浓缩后的上清液中加入外泌体提取试剂，即提取得到脂肪来源间充质干细胞外泌体。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述消化液是由KRB缓冲液和Ⅰ型胶原酶组成；优选的，KRB缓冲液和Ⅰ型胶原酶的组成比例为1ml：2mg。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，离心转速为20...

【专利技术属性】
技术研发人员：王群，赵汇，张利宁，郭春，朱法良，潘真真，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37