本发明专利技术公开了一种间充质干细胞分泌的外泌小体治疗心肌梗死的新用途，建立分离足够量外泌小体的方法及全面分析外泌小体的体系，规范外泌小体治疗心肌梗死的疗程、疗效及评估体系。利用干细胞分泌的外泌小体治疗心脏病的创新方案，不但解决了干细胞治疗带来的致癌及免疫排斥的危害，而且与干细胞治疗相比具有便于保存、定量以及移植简单的优点。外泌小体的治疗方案将为社会提供治疗心血管疾病的新途径，并节省大量基金。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及间充质干细胞分泌的外泌小体治疗心肌梗死的新用途，属于医药
技术介绍
心肌梗死是一种严重危害人类健康的心血管疾病，随着我国人民生活水平的不断提高，生活节奏的不断加快，缺血性心肌梗死的发病率也在不断上升。缺血性心肌梗死会导致心肌细胞坏死和瘢痕形成，进而影响心脏的功能。虽然目前通过冠状动脉介入术和冠状动脉搭桥术等方法，能够改善患者症状，但却不能替换已坏死的心肌细胞。心脏移植虽能彻底改善心脏状态，但因供体来源稀缺、免疫排斥以及昂贵的治疗费用等因素，在临床上很难广泛应用。移植干细胞治疗心肌梗死，因其各方面的优势有望成为治疗心肌梗死的一个治疗手段。干细胞是一种具有多分化潜能和自我复制功能的早期未分化细胞，在特定条件下它可以分化成不同的功能细胞，形成多种组织和器官。特别是，骨髓间充质干细胞(BMSCs)，它存在骨髓基质系统中，对造血系统起支持诱导作用，具有高度增殖和自我更新能力，在一定条件下也可以诱导分化成特异的组织细胞，修复受损的组织或器官。可研究表明，基于干细胞的心血管疾病治疗方案虽能够在一定程度上缓解病情，但治疗效果并不理想。这主要是由于人们对干细胞的作用机制仍缺乏认识。另外干细胞移植有很多副作用包括导致心律失常，并具有致癌性及免疫排斥。以往认为干细胞的治疗效果依赖于其分化潜能，但最新研究成果表明移植的干细胞主要是通过旁分泌作用而发挥其治疗作用，比如干细胞分泌物能刺激心肌祖细胞的细胞周期再进入(cell cyclereentry)。最近，本申请提出了无细胞的干细胞治疗(stem cell therapy without stemcells)，也就是移植的不是干细胞，而是利用干细胞分泌的外泌小体(exosome)治疗心肌梗死的设想。本专利技术就是用间充质干细胞分泌的exosome治疗心肌梗死的方案。外泌小体是细胞内来源的一群直径在30 - 100 nm之间的纳米级颗粒，通过细胞内的多泡体(MVB)与细胞膜融合而释放到细胞外。通常B细胞、T细胞、树突细胞、内皮细胞、成纤维细胞、间充质干细胞和肿瘤细胞等多种不同细胞类型的细胞都可以分泌外泌小体。外泌小体成分除了脂质、蛋白质外，还包括microRNA，IncRNA，circRNA等一些非编码RNA。通过蛋白组学及表达谱分析发现外泌小体中的蛋白组成及所含的RNA分子较为复杂，不同细胞来源的外泌小体其组成成分也不尽相同，这说明了外泌小体的功能的特异性。研究表明血液中外泌小体的特异性蛋白的表达可以做胃癌、胰腺癌等多种疾病的诊断标志。研究还发现，相对传统的干细胞治疗，干细胞来源的外泌小体，可以利用携带的干细胞特异的miRNAs分子和蛋白分子，刺激靶细胞向心脏保护和再生方向发生转化。除此之外，外泌小体还具有稳定性高、应用方便、定量精准等优点，因此本专利技术将BMSC来源的外泌小体应用于心肌梗死的治疗之中。
技术实现思路
针对现有干细胞移植的副作用，本专利技术采用了无细胞的干细胞治疗，也就是移植的不是干细胞，而是利用干细胞分泌的外泌小体治疗心脏病。本专利技术的目的是为临床提供更具特异性、更安全和更易操作的治疗心肌梗死方案。本专利技术提供了间充质干细胞分泌的外泌小体治疗心肌梗死的新用途。具体生物学实验研究结论包括以下方面: 一种骨髓间充质干细胞分泌的外泌小体在制备治疗心肌梗死药物中的应用。所述的骨髓间充质干细胞分泌的外泌小体在制备治疗心肌梗死药物中的应用，其特征在于:所用的外泌小体是来源于健康的骨髓间充质干细胞分泌的。所述的骨髓间充质干细胞分泌的外泌小体在制备治疗心肌梗死药物中的应用，其特征在于:所述心肌梗死为因缺血导致的心肌细胞的坏死。所述的骨髓间充质干细胞分泌的外泌小体在制备治疗心肌梗死药物中的应用，其特征在于:将骨髓间充质干细胞分泌的外泌小体溶解在磷酸盐缓冲液中制成浓度为lrng/mL的针剂使用。有益效果:本专利技术提供了间充质干细胞分泌的外泌小体治疗心肌梗死的新用途，建立分离足够量外泌小体的方法及全面分析外泌小体的体系，规范外泌小体治疗心肌梗死的疗程、疗效及评估体系。利用干细胞分泌的外泌小体治疗心脏病的创新方案，不但解决了干细胞治疗带来的致癌及免疫排斥的危害，而且与干细胞治疗相比具有便于保存、定量以及移植简单的优点。外泌小体的治疗方案将为社会提供治疗心血管疾病的新途径，并节省大量基金。【具体实施方式】以下所列实施例，仅为帮助本领域技术人员更全面理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1大鼠BMSC exosome的分离鉴定实例1所使用的主要材料和来源分别如下: BMSC培养试剂DMEM:F12培养基(hyclone公司，美国)、胎牛血清(BI公司，以色列)、胰蛋白酶(Sigma公司，美国)、二氧化碳培养箱(Thermol公司，美国)、倒置显微镜(ZEISS公司，德国)，超净工作台(安泰公司，苏州)，台式离心机(Thermol公司，美国)，超速离心机、超速离心管(Beckman公司，美国)；BCA蛋白定量试剂盒(Takara公司，日本)、辣根过氧化物酶(HRP)标记的IgG 二抗(杭州联科生物公司，杭州)，ECL化学发光底物(BI公司，以色列)、0.22um无菌滤膜(Millipore公司，美国)；透射电子显微镜(FEI Tecnai 12，Philips公司)、FACS检测的微球(Lifetechnology公司，美国)，PE标记的(D63抗体(b1legend公司，美国)。1.大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的获得 a)选择2-3周龄的雄性SD大鼠，颈椎脱白法处死大鼠，将大鼠浸泡在75%酒精中5min_10min 消毒； b)在无菌条件下取大鼠的双下肢浸泡于DMEM/F12无血清基础培养基中，用剪刀和镊子去除股骨及胫骨上的肌肉； c)用1ml注射器吸取添加青、链霉素的DMEM/F12无血清基础培养基，慢慢冲出骨髓，每个骨头冲洗2遍，(不可冲洗次数过多，冲的次数过多可能会冲出来更多的杂细胞)； d)待骨髓全部冲出，lOOOrpm，离心5min，弃上清，加入新鲜的DMEM/F12+10%FBS的培养基，反复吹打，将冲出的骨髓制成单细胞悬液，按照1.5 X 105/cm2的密度将细胞悬液接种于培养皿中； e)48h后换液并去除未贴壁的细胞，以后每两天换液一次，待培养皿中的集落之间互相融合细胞密度达80%左右时进行传代，用0.125%胰酶37°C消化lminl5s，收集细胞1:2传代，此时标记为P1代； f)待细胞传代至P2代或者P3代时，取一部分细胞，用当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种骨髓间充质干细胞分泌的外泌小体在制备治疗心肌梗死药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李杨欣，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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