纳米香菇多糖及其注射剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种纳米香菇多糖的制备工艺及其注射剂的制备方法。纳米香菇多糖注射剂是以香菇子实体为原料，采用微波萃取、超音速射流技术先制备纳米香菇，提取纳米香菇多糖，再制成注射液或加赋形剂冻干制成粉针剂。与现有的同类香菇多糖制剂相比，纳米香菇多糖注射剂具有提取工艺先进科学，流程简单，水溶性好，收率和纯度更高的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种，特别是涉及一种治疗癌症、病毒性肝炎的，属于医药领域。
技术介绍
目前市售的香菇多糖注射液是由香菇子实体提取的香菇多糖水针剂，收载于卫生部新药转正标准(第八册)，香菇多糖是国际上公认的疗效较好的生物反应调节剂，该剂是继手术、放疗和化疗三大治疗手段之后的第四种治疗肿瘤的办法，它通过增强机体的抗肿瘤免疫防御反应或改变机体对肿瘤细胞的生物学效应而产生机体或细胞介导的抗肿瘤效果，发挥间接的抗肿瘤作用。临床主要用于胃癌、肺癌、肠癌及癌性胸腹水等恶性肿瘤的治疗，另外对提高肝炎及艾滋病人的免疫功能均有较好的作用。但香菇多糖提取工艺十分复杂，日本味之素、森下制药株式会社提取香菇多糖的工艺流程共有24步，而且过程中需用十六烷基三甲基铵、氯仿、丁醇、甲醇、丙醇等有机溶剂，国内厂家也基本上仿效日本，工艺流程复杂，消耗溶剂较多，提取工艺不科学，多糖得率低，故成本大而影响了广泛应用，产品质量控制难度大，杂蛋白含量高而影响纯化。例如中国专利CN 1153179A介绍了一种“香菇多糖新的分离纯化方法”，该方法为将香菇热水提取浓缩，乙醇沉淀，沉淀物溶介后透析，乙醇沉淀所得粗品DEAE-纤维素吸附，不同浓度碱液洗脱，糖反应阳性的洗脱液合并酸中和，超过滤，未透过部分浓缩，冻干得香菇多糖。由于过程中使用了乙醚作为洗涤剂，无法保证有机溶剂无残留，增加了该药的毒性，而且乙醚易燃烧，对生产车间的防爆要求极高；该法所得香菇多糖收率低，成本高。另一篇中国专利CN 1160538A介绍了“香菇多糖注射液及其制备方法”，将香菇多糖溶于NaOH溶液中，再用柠檬酸调节pH值，说明此香菇多糖原料溶解性差，且碱液中增加了氧化多糖的可能性；采用了高温消毒(120℃)，易导致多糖分解。鉴于现有的香菇多糖制剂存在上述缺点，开发一种提取工艺更先进科学，收率高、含量高、纯度高的香菇多糖及新型注射剂型是必要的。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种提取水溶性好，收率和纯度高的纳米香菇多糖的制备方法；本专利技术的另一目的在于提供一种纳米香菇多糖注射剂的制备方法。本专利技术目的是通过下述技术方案实现的。纳米香菇多糖是由如下步骤制备而成A.将香菇子实体置于提取罐中，加水并导入微波萃取，使其以20～80亿次/秒的速度作极性变化运动，其微波萃取的温度为50～70℃，时间5～10小时；将萃取液在40～60℃温度下减压浓缩8～16小时；将减压浓缩液置于喷雾干燥塔中，用超音速射流技术，在40～60℃温度、0.05～1.0Mpa压力下，以超音速瞬间射流干燥，速度为500～1000米/秒，得纳米香菇；B.取纳米香菇，采用20～40倍的水回流2～4小时，在2000～4000转/分的转速下离心10～30分钟，取上清液，加热浓缩至稀糖浆状为止；冷却后，加入2～5倍体积在4℃下预冷的95％乙醇，边加边搅拌至混合均匀，冷藏24小时，离心除去乙醇，收集沉淀，减压干燥，得纳米香菇多糖粗品；C.将纳米香菇多糖粗品溶于35℃恒温的蒸馏水中，趁热过滤，边搅拌边加入蛋白酶，保温2～4小时后升温至80℃，维持10分钟，过滤；滤液用2M NaOH溶液调pH7.4，加热至沸，加入活性炭，保温15分钟，过滤；滤液调pH7，过阴离子柱，收集流出液；调pH至中性，过阳离子柱，收集流出液；最后过凝胶柱，收集流出液；向流出液中加入95％乙醇，使混合液含醇量达70％，静置12-24小时，过滤，洗涤，低温干燥，得纳米香菇多糖。取上述本专利技术纳米香菇多糖，加入常规辅料，按药剂学常规工艺和步骤，可制备成注射制剂；所述注射制剂可以是注射液、大输液、冻干粉针、注射用片剂、混悬型注射剂等。纳米香菇多糖注射液的制备本专利技术所述的纳米香菇多糖注射液的制备方法是先按上述纳米香菇多糖的制备方法制备纳米香菇多糖，即用香菇子实体以微波萃取、超音速射流技术制备纳米香菇，纳米香菇经提取精制得纳米香菇多糖，然后取纳米香菇多糖用适量注射用水溶解，并调节PH值至6～8，滤过，分装，灭菌，即得。纳米香菇多糖冻干粉针剂的制备本专利技术所述的纳米香菇多糖冻干粉针剂的制备方法是先按上述纳米香菇多糖的制备方法制备纳米香菇多糖，即用香菇子实体以微波萃取、超音速射流技术制备纳米香菇，纳米香菇经提取精制得纳米香菇多糖，然后取纳米香菇多糖用适量注射用水溶解，加赋形剂制得有效成分混合液，再将有效成分混合液经冷冻干燥制成冻干粉针剂型。其中所述冻干粉针剂所用有效成分的制作工艺具体如下取纳米香菇多糖用适量注射用水溶解，按每毫升加入赋形剂如甘露醇、乳糖、水解明胶或它们的混合物等0.05～0.5克，优选甘露醇，搅拌，溶解，滤过，并加注射用水适量，再调节PH值至6-8，即得该冻干粉针剂冻干所用的有效成分混合液。其中所述冻干粉针剂冷冻干燥工艺具体如下将上述香菇多糖冻干粉针剂冻干所用的有效成分混合液按每瓶2ml的规格分装后，未封口放入与冻干箱尺寸相应的金属盘内，对冻干箱进行灭菌处理，并将其搁板的温度降低至-25℃～-50℃，迅速将装有制剂的金属盘放入冻干箱内，维持1～6小时，然后对冻干箱进行真空处理，使箱内的真空度为0.2～0.5Pa，再将搁板升温，并严格控制在共熔点-2℃以下，保持10～24小时，最后升温至30℃～40℃，并保持一定时间，使制剂温度与搁板温度重合，放入无菌的过滤气体，控制制剂的含水量在1～5％，迅速封口即可。冷冻干燥过程中可选择的最佳物理条件是首先将搁板降温至-30℃，维持3小时，然后使冻干箱内的真空度为0.2Pa，将搁板升温并严格控制在共熔点-2℃以下，保持18小时，将搁板升温至40℃放入无菌气体后，控制制剂的含水量为2％。本专利技术所述的香菇多糖注射液或冻干粉针剂每支装1ml至2ml，含香菇多糖1mg至4mg；每支香菇多糖注射液或冻干粉针剂含香菇多糖按无水葡萄糖计，不少于1mg。本专利技术简化了工艺流程，降低生产成本，采用纳米技术使传统香菇多糖制剂在生产、治疗、创新使用上发生了革命性的变化，纳米香菇多糖具有良好的溶解性，多糖收率提高，纯度提高；大力投入，将节省大量的香菇资源，缓解香菇子实体生长周期长、受环境条件的影响与限制，产量低，从而导致香菇多糖的成本高、价格昂贵等问题。以下实验例用于进一步说明但不限于本专利技术实验例1香菇多糖的工艺条件筛选研究文献报道香菇多糖注射液中香菇多糖的提取是将香菇以蒸馏水浸出，浸出液脱蛋白，经离子交换树脂交换，多次乙醇沉淀，精制。这种提取工艺的不足之处是水浸出，有效成分提取不完全，离子交换树脂交换难以纯化多糖，成分过于复杂，易引入致过敏物质等。为此，本实验对香菇多糖最佳提取工艺条件进行了比较研究，现总结如下本专利技术提取工艺样品的制备(1)将香菇子实体3.5kg加工成2mm左右厚的饮片，置于提取罐中，加水并导入微波萃取，使其以50亿次/秒的速度作极性变化运动，其微波萃取的温度为40℃，时间5小时；将萃取液在40℃温度下减压浓缩16小时；将减压浓缩液置于喷雾干燥塔中，用超音速射流技术，在40℃温度、0.05Mpa压力下，以超音速瞬间射流干燥，速度为1000米/秒，得纳米香菇；(2)取纳米香菇，采用30倍的水回流3小时，在4000转/分的转速下离心10分钟，取上清液，加热浓缩至稀糖浆状为止；冷却后，慢慢加入2倍体积预冷(4℃)的95％乙醇，边加边搅本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗癌症、病毒性肝炎的纳米香菇多糖的制备方法，其特征在于该方法为：Ａ．将香菇子实体置于提取罐中，加水并导入微波萃取，使其以２０～８０亿次／秒的速度作极性变化运动，其微波萃取的温度为５０～７０℃，时间５～１０小时；将萃取液在４０～ ６０℃温度下减压浓缩８～１６小时；将减压浓缩液置于喷雾干燥塔中，用超音速射流技术，在４０～６０℃温度、０．０５～１．０Ｍｐａ压力下，以超音速瞬间射流干燥，速度为５００～１０００米／秒，得纳米香菇；Ｂ．取纳米香菇，采用２０～４０倍的水 回流２～４小时，在２０００～４０００转／分的转速下离心１０～３０分钟，取上清液，加热浓缩至稀糖浆状为止；冷却后，加入２～５倍体积在４℃下预冷的９５％乙醇，边加边搅拌至混合均匀，冷藏２４小时，离心除去乙醇，收集沉淀，减压干燥，得纳米香菇多糖粗品；Ｃ．将纳米香菇多糖粗品溶于３５℃恒温的蒸馏水中，趁热过滤，边搅拌边加入蛋白酶，保温２～４小时后升温至８０℃，维持１０分钟，过滤；滤液用２ＭＮａＯＨ溶液调ｐＨ７．４，加热至沸，加入活性炭，保温１５分钟，过滤；滤液调ｐＨ７，过阴 离子柱，收集流出液；调ｐＨ至中性，过阳离子柱，收集流出液；最后过凝胶柱，收集流出液；向流出液中加入９５％乙醇，使混合液含醇量达７０％，静置１２－２４小时，过滤，洗涤，低温干燥，得纳米香菇多糖。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯伟，卫银波，崔建彤，曹建军，
申请(专利权)人：山西亚宝药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：14[中国|山西]