溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂和制备方法，该注射剂主要由以下重量百分比的原料制备而成：液晶材料45‑95％、相变调节剂0.5‑10％、溶瘤病毒营养液4‑54％；所述液晶材料为单油酸甘油酯，所述相变调节剂为泊洛沙姆，所述溶瘤病毒营养液由体积比为1:2‑4的溶瘤病毒和分散介质组成；所述分散介质为含有肌醇和山梨糖醇的PBS缓冲液，所述肌醇和山梨糖醇在分散介质中的浓度分别为35‑45mg/mL和15‑25mg/mL。本发明专利技术的溶瘤病毒立方液晶前体注射剂能提高病毒的体外稳定性和体内安全性，粘度低、流动性好，易于注射，注射后即可快速形成立方液晶凝胶，能够在原位缓慢释放出病毒颗粒，且不易渗漏。

Cubic liquid crystal oncolytic virus precursor injection and preparation method thereof

The invention relates to a cubic crystal oncolytic virus precursor injection and preparation method, the main raw material for injection by the following weight percentage is prepared: 45 liquid crystal material 95%, 10%, 0.5 phase modulators oncolytic virus 4 54% nutrient solution; the liquid crystal material is a single oil acid glycerol ester, the the phase change regulator poloxamer, the oncolytic virus by nutrient solution volume ratio of 1:2 4 oncolytic viruses and a dispersion medium; the dispersion medium is PBS buffer containing inositol and sorbitol, the concentration of inositol and sorbitol in dispersion medium were 35 45mg/mL and 15 25mg/mL. The invention relates to a liquid crystal cubic oncolytic virus precursor injection can enhance viral stability in vitro and in vivo safety, low viscosity, good fluidity, easy injection, after injection can be quickly formed cubic phase gel, can release virus particles in situ is slow, and not easy to leak.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及制药
，特别是涉及一种溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂及其制备方法。
技术介绍
黑色素瘤是来源于黑色素细胞的一类恶性肿瘤，常见于皮肤，亦见于黏膜、眼脉络膜等部位。黑色素瘤是皮肤肿瘤中恶性程度最高的瘤种，容易出现远处转移。黑色素瘤的治疗最为多见的为早期手术切除和中晚期手术切除后辅以化疗和放疗。目前，针对肿瘤的治疗，研究出了一种溶瘤病毒疗法，其相应药品尚处于临床研究阶段。溶瘤病毒疗法的原理是通过对自然界存在的一些致病力较弱的病毒进行基因改造，利用靶细胞中抑癌基因的失活或缺陷从而选择性地感染肿瘤细胞，在其内大量复制并最终摧毁肿瘤细胞。同时它还能激发免疫反应，吸引更多免疫细胞来继续杀死残余癌细胞。已获得FDA批准并上市的溶瘤病毒类药物仅有美国Amgen公司的IMLYGIC注射剂一种产品。IMLYGIC是一种遗传上修饰的溶瘤病毒，给药方式为病毒悬液瘤内注射，治疗适用为不可切除的皮肤，皮下，和淋巴结病变，以及黑色素瘤初始手术后复发。此外，尚有一些溶瘤病毒类药物刚进入临床研究阶段。已有的溶瘤病毒类药物制剂存在的不足主要为病毒易失活，以及溶液容易渗漏。唯一上市产品IMLYGIC需要在-80℃保存，使用前缓慢解冻且必须于12h内注射。注射后需要用无菌纱布对注射部位加压共至少30秒来避免在注射点IMLYGIC的泄漏，注射后还需要使用敷料保持注射部位覆盖至少一周。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种稳定性好的溶瘤病毒类药物制剂。本专利技术提供了一种溶瘤病毒立方液晶前体注射剂，能较好的保持病毒在注射剂中的活性，病毒稳定性好，可显著降低对注射剂保存条件的要求。具体技术方案如下：一种溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂，主要由以下重量百分比的原料制备而成：液晶材料45-95％相变调节剂0.5-10％溶瘤病毒营养液4-54％；所述液晶材料为单油酸甘油酯，所述相变调节剂为泊洛沙姆，所述溶瘤病毒营养液由体积比为1:2-4的溶瘤病毒和分散介质组成；所述分散介质为含有肌醇和山梨糖醇的PBS缓冲液，所述肌醇在分散介质中的浓度为35-45mg/mL，所述山梨糖醇在分散介质中的浓度为15-25mg/mL。在其中一些实施例中，所述溶瘤病毒为HSV-1或者对HSV-1进行基因修饰后的病毒。所述对HSV-1进行基因修饰后的病毒是指：敲除了神经毒性基因icp34.5或更多基因，以及人工插入了辅助治疗基因的HSV-1病毒。在其中一些实施例中，所述溶瘤病毒的滴度为105-108PFU/mL。在其中一些实施例中，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆407。在其中一些实施例中，所述的溶瘤病毒立方液晶前体注射剂，主要由以下重量百分比的原料制备而成：液晶材料45-65％相变调节剂1.5-5％溶瘤病毒营养液30-50％。在其中一些实施例中，所述溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂主要由以下重量百分比的原料制备而成：液晶材料48-52％相变调节剂3-4％溶瘤病毒营养液45-48％。在其中一些实施例中，所述溶瘤病毒营养液由体积比为1:3.5-3.8的溶瘤病毒和分散介质组成。在其中一些实施例中，所述肌醇在分散介质中的浓度为39-41mg/mL，所述山梨糖醇在分散介质中的浓度为19-21mg/mL。在其中一些实施例中，所述PBS缓冲液的pH为7.2-7.6。本专利技术还提供了上述溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂的制备方法。具体技术方案如下：一种上述的溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂的制备方法，包括以下步骤：将液晶材料和相变调节剂加热熔融，得混合物I，在涡旋条件下在混合物I中滴加溶瘤病毒营养液，涡旋均匀，即得所述溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂。本专利技术的溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂及其制备方法具有以下优点和有益效果：本专利技术将溶瘤病毒分散在一定量的特定分散介质中，再将其与液晶材料和相变调节剂制备成立方液晶前体注射剂。该注射剂能够有效保护病毒的活性基团，提高病毒的体外稳定性，能够更好的保持溶瘤病毒的药物活性，提高溶瘤效果，可显著降低对注射剂保存条件的要求。本专利技术的溶瘤病毒立方液晶前体注射剂粘度低，流动性好，易于注射，进行瘤内注射或瘤体旁注射后，遇瘤内液体即可快速形成高粘度的凝胶状立方液晶，能够在原位缓慢释放出病毒颗粒，实现了体内靶向给药，大大降低了溶瘤病毒在体内迅速蓄积产生的风险，且不易渗漏，可防止病毒液的泄露以及在体内的扩散带来的副作用，提高病毒在体内的安全性。将其应用于皮肤癌与黑色素瘤的治疗，效果显著，且安全性高。本专利技术的溶瘤病毒立方液晶前体注射剂的制备方法简单，原料易得，不使用任何有机溶剂，制备过程温和。附图说明图1为实施例1-4制备得到的溶瘤病毒立方液晶前体注射剂黏度示意图；图2为实施例1-4制备得到的溶瘤病毒立方液晶前体及相变后所形成凝胶的偏光显微镜图；图3为实施例1-4制备得到的溶瘤病毒立方液晶前体注射剂病毒释放图；图4为实施例1-4制备得到的溶瘤病毒立方液晶前体注射剂的细胞毒性图；图5为实施例1-4制备得到的溶瘤病毒立方液晶前体注射剂稳定性示意图。具体实施方式以下结合附图和具体实施例来详细说明本专利技术，但不对本专利技术造成任何限制。以下实施例中所用的HSV-1购自中国科学院武汉病毒研究所微生物菌毒种保藏中心，滴度为2×107PFU/ml。以下实施例中所用分散介质为：含40mg/mL的肌醇和20mg/mL的山梨糖醇的PBS缓冲液，pH为7.4。实施例1本实施例提供一种溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂，由以下原料制备而成：该溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂的制备方法如下：称取0.500gGMO与0.035gF127并在37℃时共熔得到混合物Ⅰ；量取0.1mlHSV-1加入到0.365ml分散介质中，摇匀得到混合液Ⅱ(0.47g)；边涡旋边将混合液Ⅱ缓慢滴加到混合物Ⅰ中，涡旋均匀，即得溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂。密封，-4℃保存。实施例2本实施例提供一种溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂，由以下原料制备而成：该溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂的制备方法如下：称取0.550gGMO与0.025gF127并在37℃时共熔得到混合物Ⅰ；量取0.1mlHSV-1加入到0.325ml分散介质中，摇匀得到混合液Ⅱ(0.43g)；边涡旋边将混合液Ⅱ缓慢滴加到混合物Ⅰ中，涡旋均匀，即得溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂。密封，-4℃保存。实施例3本实施例提供一种溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂，由以下原料制备而成：该溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂的制备方法如下：称取0.650gGMO与0.015gF127并在37℃时共熔得到混合物Ⅰ；量取0.1mlHSV-1加入到0.235ml分散介质中，摇匀得到混合液Ⅱ(0.34g)；边涡旋边将混合液Ⅱ缓慢滴加到混合物Ⅰ中，涡旋均匀，即得溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂。密封，-4℃保存。实施例4本实施例提供一种溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂，由以下原料制备而成：该溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂的制备方法如下：称取0.950gGMO与0.005gF127并在37℃时共熔得到混合物Ⅰ；量取0.01mlHSV-1加入到0.035ml分散介质中，摇匀得到混合液Ⅱ(0.05g)；边涡旋边将混合液Ⅱ缓慢滴加到混合物Ⅰ中，涡旋均匀，即得溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂。密封，-4℃保存。实施例5将上述实施例1-4制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂，其特征在于，主要由以下重量百分比的原料制备而成：液晶材料             45‑95％相变调节剂           0.5‑10％溶瘤病毒营养液       4‑54％；所述液晶材料为单油酸甘油酯，所述相变调节剂为泊洛沙姆，所述溶瘤病毒营养液由体积比为1:2‑4的溶瘤病毒和分散介质组成；所述分散介质为含有肌醇和山梨糖醇的PBS缓冲液，所述肌醇在分散介质中的浓度为35‑45mg/mL，所述山梨糖醇在分散介质中的浓度为15‑25mg/mL。

【技术特征摘要】
1.一种溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂，其特征在于，主要由以下重量百分比的原料制备而成：液晶材料45-95％相变调节剂0.5-10％溶瘤病毒营养液4-54％；所述液晶材料为单油酸甘油酯，所述相变调节剂为泊洛沙姆，所述溶瘤病毒营养液由体积比为1:2-4的溶瘤病毒和分散介质组成；所述分散介质为含有肌醇和山梨糖醇的PBS缓冲液，所述肌醇在分散介质中的浓度为35-45mg/mL，所述山梨糖醇在分散介质中的浓度为15-25mg/mL。2.根据权利要求1所述的溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂，其特征在于，所述溶瘤病毒为HSV-1或者对HSV-1进行基因修饰后的病毒。3.根据权利要求1所述的溶瘤病毒的立方液晶前体组合物，其特征在于，所述溶瘤病毒的滴度为105-108PFU/mL。4.根据权利要求1所述的溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂，其特征在于，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆407。5.根据权利要求1-4任一项所述的溶瘤病毒的立方液晶前体注射剂，其特征在于，主要由以下重量百分比的原料制备而成：液晶材料45-65％...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴传斌，顾宇琨，潘昕，黄莹，权桂兰，朱春娥，
申请(专利权)人：广州中大南沙科技创新产业园有限公司，中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44