抗TNF‑α醣抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及抗TNF‑α醣抗体及其用途。本发明专利技术揭示关于新颖种类的抗TNFα单株抗体或抗原结合片段，其包括在每一Fc上具有相同N‑聚醣之抗TNFα IgG分子的均质群体。本发明专利技术抗体可自抗TNFα单株抗体由Fc醣改造产生。与未经醣改造的相应单株抗体相比，本发明专利技术醣抗体可具有改良的治疗价值。

Anti TNF alpha carbohydrate antibody and its use

The present invention relates to anti TNF alpha glycoprotein antibody and its use. The invention discloses an anti TNF alpha monoclonal antibodies or antigen binding fragments of novel species, which includes a homogeneous population of the same N polyglucan anti TNF alpha molecule IgG in each Fc. The antibody of the invention can be produced by resisting the TNF alpha monoclonal antibody and is produced by the Fc carbohydrate. Compared with the corresponding monoclonal antibodies without carbohydrate modification, the present invention has improved therapeutic value.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗TNF-α醣抗体及其用途相关申请案本专利技术主张以下优先权：美国临时申请案美国申请序号(USSN)62/003,908，申请于2014年5月28日、USSN62/020,199，申请于2014年7月2日、USSN62/110,338，申请于2015年1月30日。其内容各自以全文引用方式并入本文中。
技术介绍
Fc醣基化已成为治疗性单株抗体领域中的重要主题。Fc醣基化可显着改质Fc效应物功能(例如Fc受体结合及补体活化)，且由此影响治疗抗体的活体内安全及功效特征。基于基因改造的若干表达系统已报导会产生治疗性单株抗体。这些表达系统包含酵母(例如嗜甲醇酵母菌)、昆虫细胞系及甚至细菌。然而，这些表达系统具有诸多可不利地影响治疗抗体的效应物功能的缺陷。大部分经批准生物药物是在哺乳动物细胞培养系统中产生以递送具有具有期望醣基化模式的蛋白质且由此确保减小的免疫原性及较高活体内功效及稳定性。非哺乳动物表达系统(例如CHO或NS0细胞)具有添加复杂人类型聚醣所需的机制。然而，这些系统中所产生的聚醣可不同于人类中所产生的聚醣。其醣基化机制通常添加不期望碳水化合物污染物，此可改变蛋白质折迭，诱导免疫原性，且减小药物的循环寿命。显而易见，呈N-乙酰基神经胺酸形式的唾液酸不能有效添加于大部分哺乳动物细胞中且6-链接在这些细胞中丢失。唾液酸转移所需的具有各种酶活性的改造细胞尚未成功提供醣型至蛋白质药物的人类样模式。迄今为止，需要将动物细胞或醣蛋白改造成尽可能类似于人类蛋白质的高度唾液酸化产物。另外，哺乳动物细胞培养递送并不皆具有相同性质的醣基化模式的异质混合物。这些醣基化模式可影响诸如治疗性蛋白质的安全性、功效及血清半衰期等性质。自体免疫性病症是重大且广泛的医学问题。TNFα(坏死因子α)是自体免疫性疾病(例如类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩氏病(Crohn'sdisease)及牛皮癣)中的发炎的主要促成者。TNF在发炎中的重要性已藉由抗TNF抗体在控制类风湿性关节炎及其他发炎性病状中的疾病活性中的功效突出显示。当前存在4种批准用于治疗类风湿性关节炎的抗TNFαmAb，包含REMICADETM(英夫利昔单抗(Infliximab))、嵌合抗TNFαmAb、ENBRELTM(依那西普(Etanercept))、TNFR-IgFc融合蛋白、HUMIRATM(阿达木单抗(Adalimumab))、人类抗TNFαmAb及(赛妥珠单抗(Certolizumabpegol))、聚乙二醇化Fab片段。阿达木单抗是藉由基因技术改造的人类源重组IgG1单株抗体。阿达木单抗结合至TNF-α但并不结合至TNF-β且具有大约2周的半衰期。其已在2002年12月31日批准用于RA患者。阿达木单抗是在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中产生且在Fc结构域中的醣基化模式具有高度异质性。异质混合物中的每一IgG分子可能并不皆具有相同性质，且某些结合至治疗蛋白的N-连接寡醣可在患者中触发不期望效应，由此可视为安全问题。
技术实现思路
因此，本揭示内容的一态样是关于抗TNFα醣抗体的组合物，其包括在每一Fc上具有相同N-聚醣的抗TNFαIgG分子的均质群体。本专利技术的抗TNFα醣抗体可自抗TNFα单株抗体由Fc醣改造产生。重要的是，与未醣改造的相应单株抗体相比，本文所阐述的抗TNFα醣抗体具有改良的治疗价值以及增加的TNFα结合亲和力。在优选实施例中，N-聚醣连接至Fc区的Asn-297。在一些实施例中，本文所阐述的抗TNFα醣抗体包括具有SEQIDNO:1中所陈述氨基酸序列的重链及具有SEQIDNO:2中所陈述氨基酸序列的轻链。在一优选实施例中，所述醣抗体包括阿达木单抗的轻链序列及重链序列。本文揭示衍生自阿达木单抗的功能活性抗TNFα醣抗体。这些抗TNFα醣抗体与阿达木单抗相比展现类似或改良的TNFα结合亲和力。在一些实施例中，本专利技术醣抗体中的N-聚醣具有双触角(biantennary)结构。在一些实施例中，N-聚醣包括二等分(bisecting)GlcNAc。在一些实施例中，本文所阐述的N-聚醣包括至少一个α2-6末端唾液酸。在某些实施例中，N-聚醣包括一个α2-6末端唾液酸。在一优选实施例中，N-聚醣包括两个α2-6末端唾液酸。在一些实施例中，本文所阐述的N-聚醣包括至少一个α2-3末端唾液酸。在某些实施例中，N-聚醣包括一个α2-3末端唾液酸。在一优选实施例中，N-聚醣包括两个α2-3末端唾液酸。在一些实施例中，本文所阐述的N-聚醣包括至少一种半乳醣。在某些实施例中，N-聚醣包括一种半乳醣。在一优选实施例中，N-聚醣包括两种半乳醣。在优选实施例中，N-聚醣发生岩藻醣基化。在一些实施例中，N-聚醣发生去岩藻醣基化。在一些实施例中，N-聚醣具有选自由以下组成的群的聚醣序列：Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-6)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)及Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)。在优选实施例中，N-聚醣具有选自由以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗TNFα醣抗体或抗TNFα结合片段的组合物，其包括在每一抗TNFα IgG分子的Fc区上具有相同N‑聚醣的抗TNFα IgG分子的均质群体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.28 US 62/003,908;2014.07.02 US 62/020,199;1.一种抗TNFα醣抗体或抗TNFα结合片段的组合物，其包括在每一抗TNFαIgG分子的Fc区上具有相同N-聚醣的抗TNFαIgG分子的均质群体。2.如权利要求1的组合物，其中所述抗TNFαIgG分子包括具有SEQIDNO:1中所述氨基酸序列的重链及具有SEQIDNO:2中所述氨基酸序列的轻链。3.如权利要求1的组合物，其中所述抗TNFαIgG分子包括阿达木单抗(Adalimumab)(Humira)的轻链序列及重链序列。4.如权利要求1的组合物，其中这些抗TNFα醣抗体展现比阿达木单抗(Humira)改良的TNFα结合性。5.如权利要求4的组合物，其中所述结合性改良至少约3倍。6.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣连接至所述Fc区的Asn-297。7.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣不含核心岩藻醣。8.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣包括二等分(bisecting)GlcNAc。9.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣包括至少一个α2–6唾液酸。10.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣包括两个α2–6唾液酸。11.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣选自由以下组成的群：Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-6)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)及Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)。12.如权利要求11的组合物，其中所述N-聚醣选自由以下组成的群：Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)及Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2(F)。13.一种医药调配物，其包括如权利要求1至12的抗TNFα醣抗体或抗原结合片段的组合物及医药上可接受的载剂。14.一种在有需要的人类中治疗TNF介导的发炎疾病的方法，所述方法包括向所述人类投与有效量的如权利要求13的医药调配物。15.如权利要求14的方法，其中所述投与包括向所述人类投与如权利要求13的医药调配物。16.如权利要求14的方法，其中所述TNF介导的发炎疾病选自发炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病(Crohn’sdisease)、类风湿性关节炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、强直性脊柱炎或幼年型特发性关节炎。17.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁启惠，吴宗益，
申请(专利权)人：中央研究院，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71