RG1抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及针对ＲＧ１多肽的抗体、和抗原结合性抗体片段。本发明专利技术还涉及将抗体、和抗体片段用于诊断性和治疗性应用的方法。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新的针对多肽RG1的抗体，RG1在前列腺和其他的肿瘤细胞中被优先表达。特别地，本专利技术涉及这些抗体用于癌症以及癌症转移灶的治疗和检测的用途。
技术介绍
前列腺癌是一种男性经常发生的疾病，其中发现约三分之一45岁以上年龄的男性都患有前列腺癌。目前存在遗传的和环境的病因的证据，大多数病例可能是两种因素的组合的结果。对家族性癌症的研究已经表明遗传易感性在所有前列腺癌患者的约5-10％患者以及约45％年龄小于55岁的男性病例中发挥着作用。目前存在前列腺癌以多步骤疾病的形式发生的证据，其中一种前驱病变是前列腺上皮内瘤形成(PIN)。疾病的早期是雄激素依赖性的，而晚期是激素非依赖性的。临床上经常可以检测出被称为良性前列腺增生症的前列腺增生性病变，但它可能不是癌症发生过程中的一个阶段。但是，它经常与前列腺癌相关。前列腺的癌症常常是多灶的、通常缓慢生长的、和异质的癌症。晚期的癌症经常转移到淋巴结和骨骼。通过体格检查和通过前列腺特异抗原(PSA)的血清水平一般可以诊断前列腺癌。根治性前列腺切除术是局灶病变的治疗选择。目前用睾丸切除术或GnRH(促性腺激素释放激素)治疗所诱导的雄激素去除和抗雄激素治疗治疗进展性的转移性疾病。但是，进展性的疾病(advanceddisease)几乎常常都变为激素抵抗，并且不能治愈进行性疾病(progressive disease)。另外，存在与根治性前列腺切除术和雄激素去除治疗相关的严重的副作用。这些副作用包括高危的与根治性前列腺切除术相关的尿失禁和阳痿以及与雄激素去除治疗相关的骨折和骨质疏松。因此，存在对用于治疗早期和晚期的前列腺癌的新的治疗方法的大量需求。也存在对新的诊断试剂的显著需求，因为诊断试剂显著地影响着治疗方案。例如，如果疾病已经进展到超出了前列腺并已经转移到了淋巴结，那么就不再进行根治性前列腺切除术，因为它对进展性疾病没有任何作用，反而可能带来显著的不必要的副作用。一种能检测体内转移灶的试剂将具有重大价值。已经证实在前列腺癌中存在着特异蛋白表达的变化，包括p53在晚期前列腺癌中的异常表达、降低了水平的TGF-β受体、降低了水平的E-cadherin、C-Cam(一种细胞粘附分子)、和一些整联蛋白。在晚期的雄激素非依赖性的肿瘤中，癌基因bcl-2的表达被明显地增高，并且高水平表达bcl-2的患者的预后是相当的差。虽然已经很好地证明了先前提及的基因表达的变化，但是已经鉴定出已被证实是疾病的病因的基因的表达没有发生变化。因此，鉴定出其表达与前列腺肿瘤的存在或发生相关的新蛋白将是有用的，它能作用为定向于前列腺癌诊断和治疗的组合物的分子靶点。多肽RG1(见美国专利5,871,969)是细胞外基质蛋白Mindin/F-spondin家族的一种同系物。已证实RG1多肽在前列腺组织内高表达(见WO98/45442)，以及它应当是一种用于前列腺癌的诊断和治疗以及其中有RG1表达的其他癌症的有用的靶点。
技术实现思路
本专利技术提供了对RG1多肽具有高度选择性的抗体、或其抗原结合性抗体片段、或其变体，它可被应用于检测与疾病状态例如前列腺癌、肾癌、结肠或卵巢癌相关的RG1表达的方法，或应用于对这些疾病状态的治疗。为了这些目标，本专利技术的一个目的是提供与RG1多肽(SEQ ID NO2)中的一个表位特异性结合的分离的抗体、或其抗原结合性抗体片段、或其变体。特别优选的是以小于或等于1μM的解离常数(KD)与RG1多肽的表位结合的人抗体，更优选的是KD小于或等于100nM，以及最优选的是KD小于或等于10nM。根据本专利技术的更加优选的实施方式，提供了分离的抗体和其抗原结合性抗体片段，其包括一种包括SEQ ID NO26或SEQ ID NO29的氨基酸序列的轻链可变区。也提供了分离的抗体和其抗原结合性抗体片段，其包括一种包括SEQ ID NO27、SEQ ID NO28、SEQ ID NO30或SEQ ID NO31的氨基酸序列的重链可变区。一个特别优选的实施方式是一种人抗体，它包括一个具有SEQ ID NO26的氨基酸序列的轻链可变区和一个具有SEQ IDNO27或SEQ ID NO28的氨基酸序列的重链可变区。第二个特别优选的实施方式是一种人抗体，它包括一个具有SEQ ID NO29的氨基酸序列的轻链可变区和一个具有SEQ ID NO30或SEQ ID NO31的氨基酸序列的重链可变区。在本专利技术的另一个方面中，可以预期具有与上述的氨基酸序列具有80％序列相同性的氨基酸序列的轻链可变区和重链可变区也属于本专利技术的范围之内。也提供了编码上述的抗体的轻链和重链可变区的核苷酸序列。优选的是一种包括由包括SEQ ID NO20或SEQ ID NO23的核苷酸序列编码的轻链可变区的抗体。也优选的是一种包括由包括SEQ ID NO21、SEQID NO22、SEQ ID NO24或SEQ ID NO25编码的重链可变区的抗体。根据本专利技术的这个方面的某些优选的实施方式，抗体与可检测的标记物结合，用于作为施用给体外细胞、离体细胞和体内细胞、或多细胞生物体的诊断试剂的用途。特别优选的是一种与放射性标记、酶、生色团或荧光剂结合的抗体。特别优选的检测方法是免疫闪烁法和正电子发射断层术，其中用于免疫闪烁法的抗体将与放射性同位素例如111In或99mTc结合，或用于正电子发射断层的抗体将与43Sc、44Sc、52Fe、55Co、68Ga、64Cu、86Y或94mTc结合。在本专利技术的另一个方面中，提供了与治疗剂例如蓖麻毒素或放射性同位素缀合的抗体，抗体用于施用给体外细胞、离体细胞和体内细胞、或多细胞生物体。在这个方面优选的是细胞毒的治疗剂。特别优选的治疗剂将是与放射性同位素例如90Y和177Lu缀合的抗体。在这个方面的某些优选的实施方式中，给人患者施用这些结合抗体，用于治疗以RG1表达为特征的疾病状态例如前列腺癌以及特别是进展性的转移性前列腺癌。在本专利技术的另一个方面，通过使用螯合剂完成RG1抗体或其抗原结合性片段与可检测的标记物或细胞毒剂的缀合，螯合剂选自由p-SCN-苯基-DTPA和其衍生物、1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N″，N-四乙酸(1，4，7，10-tetraazacyclododecane-N，N′，N″，N-tetracetic acid，DOTA)和其衍生物、以及1，4，7-三氮杂环壬烷-N，N′，N″-三乙酸(1，4，7-triazacyclononane-N，N′，N″-triacetic acid，NOTA)和其衍生物所构成的组。本专利技术的另一个方面是一种用于治疗与RG1多肽表达相关的疾病状态例如前列腺的方法，其使用了本专利技术的免疫缀合物。本专利技术的另一个方面是一种用于检测与RG1多肽表达相关的疾病状态例如前列腺癌的方法，其使用了本专利技术的免疫缀合物。在本专利技术的另一个方面中，提供了多肽和抗独特型的抗体，它们可被用于刺激免疫应答。通过下面的描述，本专利技术的其他目的、特点、优点和方面对于那些熟练的技术人员将是显而易见的。但是要明白仅仅是以举例说明的方式给出了下面的描述和具体的实施例，它们说明了本专利技术的优选实施方式。通过阅读下面的描述和通过阅读本说明书的其他部分，在所阐述的专利技术的精神和范围内的各本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人抗体、或其抗原结合性抗体片段、或其变体，其与ＲＧ１多肽中存在的表位特异性结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查德哈金斯，德博拉帕克斯，戈登帕里，雷娜特帕里，道格拉斯施奈德，
申请(专利权)人：舍林股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]