ＰＴ－１４１和ＭＴ－Ⅱ的固相合成方法技术

本发明专利技术涉及制备环七肽ＰＴ－１４１和ＭＴ－Ⅱ的方法。本发明专利技术选择性的保护了部分氨基酸，采用不同的环合顺序，得到环肽树脂，最后用ＨＦ进行裂解，经纯化，得到ＰＴ－１４１和ＭＴ－Ⅱ。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及PT-141及MT-II的制备方法。
技术介绍
下式PT-141及MT-II主要用于在治疗性功能障碍、肥胖以及刺激皮肤产生黑皮素抵抗紫外线灼伤等方面的研究。尤其是在治疗性功能障碍方面，它们对男女患者都有效，弥补了现有西地那非等磷酸二酯酶抑制剂的一些不足。 在有关PT-141及MT-II合成方法的专利和文献中，主要采用全保护策略，例如Trp侧链吲哚氮用甲酰基保护，His侧链咪唑氮用苄氧甲基保护；并且利用TFA/哌啶/Pd催化氢化的正交原则，使用Pd催化氢化的方法脱除对酸碱都不敏感的保护基，这些都导致肽合成成本较高。另外，在文献方法中，催化氢化易导致色氨酸生成2，3-二氢衍生物，从而降低收率。因此开发新的制备PT-141及MT-II的方法具有必要性。本专利技术中使用的缩写具有下面含义Ac 乙酰基Arg精氨酸Asp天冬氨酸Boc叔丁氧羰基BOP苯并三唑-1-氧-三(二甲氨基)磷六氟磷酸Dnp2，4-二硝基苯基DBU1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯PyBOP 苯并三唑-1-氧三吡咯烷膦鎓六氟磷酸盐HATU 1--1H-1，2，3-三唑吡啶-3-氧化六氟磷酸盐HBTU2-(1H-苯并三唑-1-)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐 TBTU 2-(1 H-苯并三唑-1-)1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐TPTU O-(1，2-二氢-2-氧-1-吡啶)-N，N，N，，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐DCC二环己基碳二亚胺DIEA 二异丙基乙酰胺NMMN-甲基吗啉HOBt 1-羟基苯并三唑OtBu 叔丁氧基Trt三苯甲基Tos对甲苯磺酰基Z 苄氧羰基2-Cl-Z 2-氯苄氧羰基His组氨酸Lys赖氨酸Nle亮氨酸Phe苯丙氨酸，RP-HPLC反相高效液相色谱Trp色氨酸DCM二氯甲烷DMF二甲基甲酰胺NMP1-甲基吡咯烷酮MeOH 甲醇MBHA树脂 甲氧二苯基甲基氨树脂BHA树脂二苯基甲基氨树脂PAM树脂羟甲基苯乙酰胺甲基树脂ESI-MS 电喷雾质谱
技术实现思路
本专利技术目的是寻找制备PT-141及MT-II的新方法。本专利技术经研究已发现一种制备PT-141及MT-II的方法，该方法比现有技术降低了成本，减少了副反应，提高了收率。本专利技术涉及制备PT-141及MT-II的方法，其包括a)采用固相合成方法由R1-Lys(R5)-P，R1-Trp，R1-Arg(R4)，R1-D-Phe，R1-His(R3)，R1-Asp(R2)，R1-Nle，得到下式七肽树脂R1-Nle-Asp(R2)-His(R3)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-Lys 式1R1-Nle-Asp(R2)-His(R3)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-Lys 式2其中，R1＝Fmoc；R2＝OtBu；R3＝Dnp、Trt或Tos；R4＝HCl盐、Tos、NO2、Z或2-Cl-Z；R5＝Boc；P为 羟基型树脂，如PAM树脂；P2为氨基型树脂，如MBHA、BHA树脂；b)利用HCl或TFA的二氧六环、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氯甲烷等有机溶液处理a)中式1和式2肽树脂，脱除部分侧链保护基，得到下式七肽树脂R1-Nle-Asp-His(R6)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-Lys 式3R1-Nle-Asp-His(R6)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-Lys 式4式3和式4中，R1＝Fmoc；R6＝Dnp、H或Tos；R4＝HCl盐、Tos、NO2、Z或2-Cl-Z；P1为 树脂，如PAM树脂；P2为氨基 脂，如MBHA、BHA树脂；c) b)中式3和式4肽树脂在溶剂，例如DCM、DMF、NMP、四氢呋喃、二氧六环、乙酸乙酯等其中之一或它们任意组合溶剂中，加入缩合试剂，如TBTU，TATU，TPTU、DCC/HOBt、HBTU，BOP、PyBOP等其中之一或它们任意组合，以及叔胺，如DIEA，三乙胺、三甲基吡啶或NMM，使其环合，得到式5和式6肽树脂R1-Nle-c[Asp-His(R6)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-Lys 式5R1-Nle-c[Asp-His(R6)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-Lys 式6式5和式6中，R1＝Fmoc；R6＝Dnp、H或Tos；R4＝HCl盐、Tos、NO2、Z或2-Cl-Z； 羟基型树脂，如PAM树脂 为氨基型树脂，如MBHA、BHA树脂；d)向c)中式5和式6肽树脂中加入哌啶或DBU的有机溶液，反应5～120分钟，洗涤，加入乙酸酐和碱，如DIEA，三乙胺、三甲基吡啶或NMM，反应5～120分钟，洗涤，干燥，得到式7和式8肽树脂Ac-Nle-c[Asp-His(R7)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-L 式7Ac-Nle-c[Asp-His(R7)-D-Phe-Arg(R4)-Trp- 式8式7和式8中，R1＝Fmoc；R7＝H或Tos；R4＝Tos、NO2、Z或2-Cl-Z； 羟基型树脂，如PAM树脂；P2 基型树脂，如MBHA、BHA树脂；e)将d)中式7和式8肽树脂用无水氟化氢处理，无水乙醚沉淀，水洗脱，经HPLC纯化得MT-II或PT-141溶液；上述两种溶液中加入适量酸，如醋酸、马来酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、苯甲磺酸、对甲苯磺酸、葡萄糖酸、双羟基萘酸、草酸、酒石酸、苹果酸、苯甲酸、海藻酸、柠檬酸或萘磺酸等，调节适当pH值，可得相应的盐；向PT-141溶液中加入适量碱，可得相应钾盐、钠盐、镁盐、铜盐、钙盐、锌盐、钡盐、铋盐、铵盐或三烷基铵盐等无机盐或有机盐；如需要，可冷冻干燥，得到干粉。本专利技术另一方面涉及下式线性七肽树脂式1和式2R1-Nle-Asp(R2)-His(R3)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-Lys 式1R1-Nle-Asp(R2)-His(R3)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-Lys 式2式1和式2中，R1＝Fmoc；R2＝OtBu；R3＝Dnp、Trt或Tos；R4＝HCl盐、Tos、NO2、Z或2-Cl-Z；R5＝Boc； 羟基型树脂，如PAM树脂； 氨基型树脂，如MBHA、BHA树脂。本专利技术又一方面涉及式5和式6环七肽树脂肽树脂R1-Nle-c[Asp-His(R6)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-Lys 式5R1-Nle-c[Asp-His(R6)-D-Phe-Arg(R4)-Trp-Lys 式6式5和式6中，R1＝Fmoc；R6＝H或Tos；R4＝HCl盐、Tos、NO2、Z或2-Cl-Z 为羟基型树脂，如PAM树脂； 氨基型树脂，如MBHA、BHA树脂。根据本专利技术，本专利技术方法a)中七肽树脂的Nle用Fmoc保护。根据本专利技术，本专利技术方法b)中利用HCl溶液处理a)中肽树脂的反应在-20℃至50℃下进行。根据本专利技术，本专利技术方法c)中将b)中七肽树脂在溶剂中进行环合的反应在-20℃至50℃下进行。根据本专利技术，本专利技术方法d)中将c)中肽树脂N端Fmoc脱除并乙酰化的反应在-20℃至50℃下进行。根据本专利技术，本专利技术方法e)中将d)中肽树脂用无水氟化氢脱除Arg和/或His侧链保护基并从同时从树脂上裂解下来的反应在-20℃至50℃下进行。更具体的讲，本专利技术方法中的七肽本文档来自技高网...

【技术保护点】
环七肽ＰＴ－１４１和ＭＴ－Ⅱ的合成工艺，其包括：ａ）采用固相合成方法由Ｒ↑［１］－Ｌｙｓ（Ｒ↑［５］）－Ｐ，Ｒ↑［１］－Ｔｒｐ，Ｒ↑［１］－Ａｒｇ（Ｒ↑［４］），Ｒ↑［１］－Ｄ－Ｐｈｅ，Ｒ↑［１］－Ｈｉｓ（Ｒ↑［３］），Ｒ↑［１］－Ａｓｐ（Ｒ↑［２］），Ｒ↑［１］－Ｎｌｅ得到下式七肽树脂：Ｒ↑［１］－Ｎｌｅ－Ａｓｐ（Ｒ↑［２］）－Ｈｉｓ（Ｒ↑［３］）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｒ↑［４］）－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ（Ｒ↑［５］）＊式１Ｒ↑［１］－Ｎｌｅ－Ａｓｐ（Ｒ↑［２］）－Ｈｉｓ（Ｒ↑［３］）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｒ↑［４］）－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ（Ｒ↑［５］）＊式２其中，Ｒ↑［１］＝Ｆｍｏｃ；Ｒ↑［２］＝ＯｔＢｕ；Ｒ↑［３］＝Ｄｎｐ、Ｔｒｔ或Ｔｏｓ；Ｒ↑［４］＝ＨＣｌ盐、Ｔｏｓ、ＮＯ↓［２］、Ｚ或２－Ｃ１－Ｚ；Ｒ↑［５］＝Ｂｏｃ；Ｐ为＊或＊，＊为羟基型树脂，如ＰＡＭ树脂；Ｐ↓［２］为氨基型树脂，如ＭＢＨＡ、ＢＨＡ树脂；ｂ）利用ＨＣｌ或ＴＦＡ的二氧六环、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氯甲烷等有机溶液处理ａ）中式１和式２肽树脂，脱除部分侧链保护基，分别得到下式七肽树脂：Ｒ↑［１］－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ（Ｒ↑［６］）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｒ↑［４］）－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ＊式３Ｒ↑［１］－Ｎｌｅ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ（Ｒ↑［６］）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｒ↑［４］）－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ＊式４式３和式４中，Ｒ↑［１］＝Ｆｍｏｃ；Ｒ↑［６］＝Ｄｎｐ、Ｈ或Ｔｏｓ；Ｒ↑［４］＝ＨＣｌ盐、Ｔｏｓ、ＮＯ↓［２］、Ｚ或２－Ｃ１－Ｚ；＊为羟基型树脂，如ＰＡＭ树脂；＊为氨基型树脂，如ＭＢＨＡ、ＢＨＡ树脂；ｃ）ｂ）中式３和式４肽树脂在溶剂，例如ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、四氢呋喃、二氧六环、乙酸乙酯等其中之一或它们任意组合溶剂中，加入缩合试剂，如ＴＢＴＵ，ＴＡＴＵ，ＴＰＴＵ、ＤＣＣ／ＨＯＢｔ、ＨＢＴＵ，ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ等其中之一或它们任意组合，以及叔胺，如ＤＩＥＡ，三乙胺、三甲基吡啶或ＮＭＭ，使其环合，分别得到式５和式６肽树脂：Ｒ↑［１］－Ｎｌｅ－ｃ［Ａｓｐ－Ｈｉｓ（Ｒ↑［６］）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｒ↑［４］）－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ］＊式５Ｒ↑［１］－Ｎｌｅ－ｃ［Ａｓｐ－Ｈｉｓ（Ｒ↑［６］）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ（Ｒ↑［４］）－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ］＊式６式５和式６中，Ｒ↑［１］＝Ｆｍｏｃ；Ｒ↑［６］＝Ｄｎｐ、Ｈ或Ｔｏｓ；Ｒ↑［４］＝ＨＣｌ盐、Ｔｏｓ、ＮＯ↓［２］、Ｚ或２－Ｃ１－Ｚ；＊为羟基...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘克良，冯思良，梁远军，周宁，郄建坤，许笑宇，韩寒，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]