本发明专利技术涉及特异结合人白细胞介素－２（ＩＬ２）的人源化单克隆抗体或其片段，其中所述人源化单克隆抗体通过在所述人ＩＬ２与人ＩＬ２－受体结合之前、之中、和／或之后结合所述人ＩＬ２来中和人ＩＬ２的活性，而且其中所述人源化单克隆抗体的轻链可变区在其第二框架区中的氨基酸位置第４２－４６位上包含连续的氨基酸序列ＫＡＰＫＡ。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗il2抗体本专利技术涉及特异结合人细胞因子IL2的抗体及其片段。本专利技术还涉及 编码该抗体及其片段的多核香酸、包含该抗体及其片段的药物組合物和涉 及该抗体及其片段的医学用途。人IL2是有133个氨基酸的蛋白质(15.4kDa),其不与其他任何因子带 有显著的序列同源性。IL2作为153个氨基酸的前体蛋白合成，前20个氨 基末端氨基酸作为疏水分泌信号序列。该蛋白质包含对生物活性至关重要 的单个二硫键(连接位置Cys58/105)。IL2的生物活性由膜受体介导，所述膜受体几乎专门在活化的T细胞上 表达，而不在静息T细胞上表达。完整的IL2受体由3个I型穿膜蛋白亚基 构成a、卩和y;较低亲和性的功能性受体可以仅由卩和y受体蛋白组成。 静息的B细胞和静息的单核白细胞很少表达该受体。IL2受体(尤其是a 亚基)的表达由许多因子调节，例如有IL5、 IL6和L2R/p55诱导因子。小鼠和人IL2都能使同种物种T细胞高效增殖。人IL2对小鼠细胞也有 作用，但反之不然。IL2是所有T淋巴细胞亚群的生长因子。它对于T细胞 来说，是抗原非特异性的增殖因子，其能诱导静息的细胞中的细胞周期进 程并由此使T淋巴细胞克隆扩增。IL2也促进活化的B细胞的增殖和分化。 与T细胞的增殖一样，该活性也需要存在其他因子，例如IL4。由于其对T细胞和B细胞的效应，IL2成为免疫应答的核心调节剂。药 物的临床功效4艮好地说明了 IL2对适应性免疫应答的起始和扩增的核心重 要性，所述药物最常用于抑制不希望产生的免疫应答，如移植排斥。免疫 抑制药物环孢霉素A和FK506 (他克莫司)通过阻断经由T细胞受体的信 号递送来抑制IL2产生，而雷帕霉素(西罗莫司)抑制经由IL2受体的信号递 送。环孢霉素A和雷帕霉素协同作用，通过防止IL2驱动的T细胞克隆扩 增来限制免疫应答。可是，所有这些化合物都靶向细胞内信号递送途径，其不但专门干扰IL2，而且干扰其它因子。这意味着这些药物的临床应用会 由于它们有限的靶位专一性而带来不希望产生的副作用的相当大风险。IL2活性的抗体抑制剂的许多例子也是现有已知的，例如商品化的抗 体daclizumab (Zenapax , Protein Design Lab, Inc.)。 可是，IL2活性的已知抗体抑制剂通过结合IL2受体而不是抗原本身来发挥它们的生物学效能。 考虑到IL2活性抑制剂的重要的临床应用，本专利技术的目的是提供IL2活性的 另外的特异性抑制剂。因此，本专利技术的一个方面提供了特异结合人白细胞介素-2 (IL2)的人源 化单克隆抗体或其片段，其中所述人源化单克隆抗体通过在所述人IL2与 人IL2-受体结合之前、之中、和/或之后结合所述人IL2来中和人IL2的活 性，而且其中所述人源化单克隆抗体的轻链可变区在其第二框架区中包含 连续的氨基酸序列KAPKA,优选其在氨基酸位置第42-46位上。本文所用的术语"人源化单克隆抗体"、或"人源化抗体"、或"人源化免 疫球蛋白"、或其语法上相关的变型可互换使用，指包含源自一种或多种非 人免疫球蛋白的抗原结合位点的分子，所述分子另外还包含至少 一个部分， 如源自 一种或多种人免疫球蛋白或其生殖系序列的轻或重链可变结构域的 至少一个框架区。本文所用的"人源化抗体，，包括人源化轻链可变结构域免疫 球蛋白和人源化重链可变结构域免疫球蛋白。人源化抗体可包括部分或完 全源自一种或多种人基因序列(包括合成类似物)的恒定区。预计人源化 抗体像提供CDR的供体抗体那样结合相同的靶抗原。通常除了 CDR，人源蛋白序列的相应节段或部分基本上一致或基本上同源。所述人源化单克隆抗体的轻链可变区(VL)在其第二框架区中包含连 续的氨基酸序列KAPKA，优选其位于氨基酸位置第42-46位。该优选序 列的编号，即位置第42-46位，指如"VBase"数据库( MRC蛋白质工程 中心)所示的编号，其可在互联网地址http: 〃www.mrc-cpe.cam.ac.uk处获得。 为了清楚起见，人生殖系VL的框架区序列(作为V-k和V-人序列)和VH区 的框架区的序列比对包括在本申请中，这些序列也出现在Vbase中(分别参 见图7、 8和9，尤其是图8a和9a，中对人生殖系V-k和V-X序列中的第二 轻链框架区的编号)。尽管本文提供氨基酸序列KAPKA (即Lys-Ala-Pro-Lys-Ala)的优选编 号(即氨基酸位置第42-46位)以方便地与上文引用的文献对应，应当理解的 是在该部分序列内的氨基酸同一性，而不是其本身中的和其本身的序列编 号，决定了本专利技术人源化单克隆抗体的活性。如所属领域技术人员所知道 的，存在有多种对人生殖系抗体序列编号的规则，上文所引用的文献 (VBase)仅是这些中的一种。因此，包括在某些人生殖系轻链可变区的第二 框架区内的部分氨基酸序列KAPKA可根据以上引文中特别指出的规则之 外的编号规则来分派其他编号。在这种情况下，部分氨基酸序列KAPKA 将带有优选的氨基酸位置第42-46位之外的编号方式，而在这种其他的标号 规则下对应优选的氨基酸位置第42-46位的序列将可能是除了 KAPKA之 外的氨基酸序列。在这种情况下，如所属领域技术人员会理解的，带有"正 确"序列(KAPKA)但编号有差异(优选的氨基酸位置第42-46位之外的)的 部分氨基酸序列应当被认为是本专利技术的实质特征，而其他其编号是"正确" 的(优选是氨基酸位置第42-46位)，但其同一性不是KAPKA的部分氨基酸 序列不是本专利技术的实质特征。令人惊讶的观察结果是，在第二轻链框架区中缺少共有序列KAPKA 的抗体或其片段，尤其是在该序列串中缺少末端丙氨酸残基的，能特异结 合IL2，但不能中和其活性。当包含在人源化单克隆抗体的轻和重可变链中 的CDR区如SEQ ID No. 1-3 (分别针对轻链可变区CDR 1-3)、和SEQ ID No. 4-6(分别针对重链可变区CDRl-3)所示时，尤其是这样的。不受理论所限， 本专利技术人将丧失中和活性归结于共有序列KAPKA的脱漏，尤其归结于该 序列串中的末端丙氨酸残基被除了丙氨酸之外的其他氨基酸所替代，从而 使之不稳定和/或产生对中和产生有害效应、而不影响结合活性的构象重排。本文中所用的术语"特异结合"或语法相关表述，如"特异的结合"、"特 异地结合"、"特异结合物，，等，指人单克隆抗体或其片段从多种作为潜在结 合配偶体的不同抗原汇聚物中区分出人IL2和任何其他不同于人IL2的潜在 抗原、仅结合或仅显著结合人IL2的能力。在本专利技术的范围内，"显著"结合 人IL2,是指在从作为潜在结合配偶体的能同样接触的多种不同抗原的汇聚 物中，以比任何其他不同于人IL2的抗原至少10倍、优选50倍、最优选100 倍或更高的频率(在动力学意义上)地结合人IL2的时候。如本领域技术人员所理解的，这些动力学测量可在Biacore设备上进行。本专利技术所述的人源化抗体或其片段是单克隆的。本文中所用的术语"单 克隆的"应被理解为具有其现有技术中所述的典型含义，即识别所结合抗原 上的单个表位的抗体。这与多克隆抗体相反，多克隆抗体代表一组结合相 同抗原的不同抗体，而且结合在该抗原不同表位上。因为该原因，单分子本文档来自技高网...
【技术保护点】
特异结合人白细胞介素－２（ＩＬ２）的人源化单克隆抗体或其片段， .其中所述人源化单克隆抗体通过在所述人ＩＬ２与人ＩＬ２－受体结合之前、过程中、和／或之后结合所述人ＩＬ２来中和人ＩＬ２的活性，而且 .其中所述人源化单克隆抗体的轻链可变区在其第二框架区中包含连续的氨基酸序列ＫＡＰＫＡ。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：帕特里克鲍尔勒，约翰拉姆斯登，斯蒂芬弗兰兹，托拜厄姆劳姆，乔格沃尔克兰德，
申请(专利权)人：米克罗麦特股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]
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