肺炎支原体检测试剂及其用途制造技术

本发明专利技术的课题在于，提供一种可适用于使用免疫层析法的肺炎支原体感染的检测的特异性抗体及使用其的检测试剂等。提供一种含有针对肺炎支原体的P30蛋白质的特异性抗体的肺炎支原体检测试剂及试剂盒、以及免疫层析试验设备。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肺炎支原体检测试剂及其用途
本专利技术涉及一种肺炎支原体检测试剂及其用途(免疫层析法试验设备、肺炎支原体感染检查法)等。本申请基于2014年7月30日所申请的日本国专利申请第2014-155388号主张优先权，该专利申请的全部内容通过参照而被引用。
技术介绍
与细菌性的典型肺炎不同，在胸部X射线照片中呈现肺浸润像的非细菌性肺炎的30～40％的原因为肺炎支原体。从人体分离的支原体中，病原性明显的物质为肺炎支原体。支原体肺炎多见于幼儿、学童。潜伏期间平均为14天。有多种多样的并发症的报道，在小儿中，脑炎、格林巴利综合征、皮疹等的皮肤炎等的并发症多。细菌性肺炎虽急剧减少，但肺炎整体中支原体肺炎的比率升高。肺炎支原体作为社区获得性肺炎的原因菌，其数量仅次于肺炎球菌。支原体为可自增殖的最小的微生物，难以用光学显微镜进行观察。与其它细菌不同的是其不具有细胞壁，因此，在青霉素及头孢烯类抗生素中不显示感受性，在治疗中通常使用四环素系或大环内酯类的抗生素。为了诊断肺炎支原体感染，可利用如下的各种方法。来自咽拭子、咳痰的分离培养法用于确定诊断，但由于需要特殊的培养基及长的天数(2～4周)，因此不能应用于迅速诊断。在由肺炎支原体感染所产生的抗体的检测法中，例如利用粒子凝集法(PA)、红细胞凝集反应(IHA)等检测血清抗体。但是，均不能应用于急性期的诊断。在利用了咽拭子、咳痰等检体中的肺炎支原体核酸的基因扩增技术的检测法中，聚合酶连锁反应(PCR)引起的判断与作为确定诊断的分离培养法的结果非常相关。另外，作为与PCR相比简便的手段，也报道有LAMP(Loop-MediatedIsothermalAmplification)法的利用。但是，均需要复杂的操作，在测定中需要很多的劳动力，不能应用于迅速的诊断。在支原体肺炎中，由于有效的抗生素受到限制，因此，在医疗现场高度需要在感染初期即判定肺炎支原体感染的有无。一般而言，如果可得到特异性抗体，则可以利用ELISA法等酶免疫测定法(EIA)。另外，可以应用于化学发光法、色素法、荧光法等各种测定法。但是，任一种方法都需要各自专用的测定装置，在这点上不能说抓住医疗现场的需求。另一方面，免疫层析法(以下，称为免疫层析法)的操作简便，不需要特别的装置，进而可以在短时间(例如10～20分钟)内测定。但是，可用EIA法检测的抗体不一定可以应用于免疫层析法，大多需要更高的特异性及高灵敏度的抗体。关于肺炎支原体感染，目前，市售有抗P1蛋白质单克隆抗体(专利文献1)或使用了抗RibosomalProteinL7/L12蛋白质特异性抗体的免疫层析用试剂(专利文献2)并应用于诊断，但不能说灵敏度高，难以说显示与临床现场中的需求相应的充分的性能。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2013-72663号公报专利文献2：日本特开2012-6968号公报非专利文献非专利文献1：VarshneyAKetal.,ClinVaccineImmunol.Feb2008；15(2):215-220.
技术实现思路
专利技术所要解决的课题因此，本专利技术的课题在于，提供一种可适用于利用免疫层析法的肺炎支原体感染的检测的特异性抗体及使用其的检测试剂等。用于解决课题的技术方案在为了解决上述课题而进行的研究中，本专利技术人等关注于作为与P1蛋白质相比能够以高灵敏度检测肺炎支原体感染的目标蛋白质的P30蛋白质。P30为富含脯氨酸(20.7％)的分子量29,743的粘接蛋白质。迄今为止，P30分子已被鉴定，也取得针对P30的抗体。另外，作为利用了该抗体的测定法，有ELISA法的报道(非专利文献1)，但没有报道该抗体的向免疫层析法的应用。这次，重新尝试了适于免疫层析法的抗体的制作，结果可得到显示优异的性能的抗体。使用该抗体的免疫层析法与使用针对P1蛋白质的抗体的情况相比，可进行明显地高灵敏度的检测。以下的专利技术基于上述的成果。[1]一种肺炎支原体检测试剂，其含有针对肺炎支原体的P30蛋白质的特异性抗体。[2]根据[1]所述的检测试剂，其用于免疫层析法。[3]根据[1]或[2]所述的检测试剂，其中，所述特异性抗体为单克隆抗体。[4]根据[3]所述的检测试剂，其中，所述单克隆抗体为由保藏号NITEBP-01880的杂交瘤或保藏号NITEBP-01881的杂交瘤所产生的抗体。[5]根据[1]～[4]中任一项所述的检测试剂，其中，所述特异性抗体为将除去了从N末端至95号氨基酸的重组P30蛋白质作为抗原所制备的抗体。[6]根据[5]所述的检测试剂，其中，所述重组P30蛋白质由序列号2的氨基酸序列构成。[7]根据[1]～[6]中任一项所述的检测试剂，其中，所述特异性抗体用着色合成高分子粒子或金属胶体粒子进行标记。[8]根据[7]所述的检测试剂，其中，所述金属胶体粒子为金胶体粒子。[9]一种肺炎支原体检测试剂盒，其含有[1]～[8]中任一项所述的检测试剂。[10]一种免疫层析试验设备，其具备针对肺炎支原体的P30蛋白质的第1特异性抗体、针对肺炎支原体的P30蛋白质的第2特异性抗体及膜载体，其中所述第1特异性抗体固定化于所述膜载体而构成检测部，所述第2特异性抗体被标记物质所标记，且担载于离开所述检测部的位置。[11]根据[10]所述的试验设备，其中，所述第1特异性抗体为由保藏号NITEBP-01881的杂交瘤所产生的抗体，所述2特异性抗体为由保藏号NITEBP-01880的杂交瘤所产生的抗体。[12]根据[10]或[11]所述的试验设备，其中，所述标记物质为着色合成高分子粒子或金属胶体粒子。[13]根据[12]所述的试验设备，其中，所述金属胶体粒子为金胶体粒子。[14]一种肺炎支原体感染检查法，其使用了[10]～[13]中任一项所述的免疫层析试验设备。[15]根据[14]所述的检查法，其中，将源自生物体的材料用于检体。[16]根据[15]所述的检查法，其中，所述生物体材料为咽拭子或鼻腔抽吸液。[17]一种针对肺炎支原体的P30蛋白质的特异性单克隆抗体，其是由保藏号为NITEBP-01880或NITEBP-01881的杂交瘤产生的。[18]一种标记化抗体，其是用金属胶体粒子标记[17]所述的特异性单克隆抗体而得到的。[19]根据[18]所述的标记化抗体，其中，所述金属胶体粒子为金胶体粒子。[20]一种保藏号为NITEBP-01880或NITEBP-01881的杂交瘤。附图说明图1是测试条的构成的一例。具体实施方式本专利技术提供一种对肺炎支原体的检测有用的试剂(肺炎支原体检测试剂)及试剂盒。本专利技术的肺炎支原体检测试剂的特征在于，也可适用于免疫层析法(并不妨碍适用于EIA法或蛋白质印迹法等)。即，本专利技术的试剂可以进行利用了免疫层析法的高灵敏度的肺炎支原体感染的检测。本专利技术的试剂盒含有本专利技术的试剂作为主要构成要素。可以将在实施检测法时使用的其它的试剂(展开用溶剂、缓冲液等)和/或装置或器具(容器、反应装置等)包含在试剂盒中。另外，也可以将抗原(P30蛋白质或其一部分)包含在试剂盒中。另外，通常，在本专利技术的试剂盒中付加操作说明书。本专利技术的试剂的有效成分为针对肺炎支原体的P30蛋白质的特异性抗体。构成本专利技术的试剂的抗体可以为多克隆抗体或单克隆抗体的任一种，从灵敏度的方面本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺炎支原体检测试剂，其含有针对肺炎支原体的P30蛋白质的特异性抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.30 JP 2014-1553881.一种肺炎支原体检测试剂，其含有针对肺炎支原体的P30蛋白质的特异性抗体。2.根据权利要求1所述的检测试剂，其用于免疫层析法。3.根据权利要求1或2所述的检测试剂，其中，所述特异性抗体为单克隆抗体。4.根据权利要求3所述的检测试剂，其中，所述单克隆抗体为由保藏号NITEBP-01880的杂交瘤或保藏号NITEBP-01881的杂交瘤所产生的抗体。5.根据权利要求1至4中任一项所述的检测试剂，其中，所述特异性抗体为将除去了从N末端至95号氨基酸的重组P30蛋白质作为抗原而制备的抗体。6.根据权利要求5所述的检测试剂，其中，所述重组P30蛋白质由序列号2的氨基酸序列构成。7.根据权利要求1至6中任一项所述的检测试剂，其中，所述特异性抗体被着色合成高分子粒子或金属胶体粒子所标记。8.根据权利要求7所述的检测试剂，其中，所述金属胶体粒子为金胶体粒子。9.一种肺炎支原体检测试剂盒，其包含根据权利要求1至8中任一项所述的检测试剂。10.一种免疫层析试验设备，其具备针对肺炎支原体的P30蛋白质的第1特异性抗体、针对肺炎支原体的P30蛋白质的第2特异性抗体及膜载体，其中，所述第1特异性...

【专利技术属性】
技术研发人员：富山哲雄，见理刚，
申请(专利权)人：田中贵金属工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP