一种快速检测沙眼衣原体和淋病的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种快速检测沙眼衣原体和淋病的试剂盒及其应用，属于医疗检测领域。其具体是在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成的试纸卡。

Reagent kit for quickly detecting Chlamydia trachomatis and gonorrhea and its application

The present invention relates to a kit for rapid detection of Chlamydia trachomatis and gonorrhea and its application, belonging to the field of medical examination. It is on the PVC board are overlapped each other through the sample pad, the adsorption bond pad, rare earth fluorescent microspheres labeled antibody package nitrocellulose membrane and the absorbent pad is a detection line and a quality control line, strip assembly after the formation of the card.

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测沙眼衣原体和淋病的试剂盒及其应用
本专利技术涉及一种快速检测沙眼衣原体和淋病的试剂盒及其应用，属于医疗检测领域。
技术介绍
沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，Ct)具有独特的发育周期，有原体(ElementaryBody)和网状体(ReticulateBody)两种形式。其独特的生命周期是原体感染细胞发育为网状体，网状体再分裂为原体释放，进而再次感染细胞的循环过程。Ct是一种在人体内长期生存并又广泛传播的病原体，是我国性传播疾病(sexuallytransmitteddiseases，STDs)的主要病原之一，它在一定条件下能引起异位妊娠、早产、流产及尿道感染等多种疾病。研究发现，Ct感染尚与许多自身免疫疾病发病有关，如衣原体感染后可引起反应性关节炎、Reiter综合征等。Ct主要外膜蛋白(majoroutermembraneprotein,MOMP)具有5个保守区和4个可变区。由于其保守结构和好的免疫原性，MOMP是检测Ct的最理想的抗原之一。实验室检查衣原体的方法有：衣原体细胞培养法、血清学方法和核酸扩增法。其中以衣原体细胞培养法最敏感、最可靠，但由于操作繁琐、费用高、培养时间长且受标本采集、运送、保存及实验技术的影响，一般实验室难以开展。核酸扩增法由于应用特异性引物，大大增强了检测的敏感性和特异性，但对实验室条件、仪器设备、人员专业素质要求很高，且容易因为核酸扩增产物的交叉污染而出现假阳性。血清学检查简便快速的特性使其在临床上得到广泛应用。淋病(gonorrhea)是淋病奈瑟菌(简称淋菌)引起的以泌尿生殖系统化脓性感染为主要表现的性传播疾病，是一种古老而又常见的性病。近年来发病率居我国(中国)性传播疾病首位，淋菌为革兰氏阴性双球菌，呈肾型，成双排列，离开人体不易生存，一般消毒剂容易将其杀灭，淋病的病原体即奈瑟菌，是1879年由Neisseria首次分离出的淋病双球菌，因而淋病双球菌又称为奈瑟双球菌(Neisseriagon-orrhoeas)。淋病双球菌呈肾形，两个凹面相对，大小一致，长约0.7微米，宽0.5微米。它是嗜二氧化碳的需氧菌，革兰染色阴性，最适宜在潮湿，含2.5-5％二氧化碳的环境中生长。常存在多核白细胞内，椭圆或球形，常成双排列，无鞭毛、无荚膜、不存在芽孢，对外界理化条件的抵抗力差，最怕干燥，在干燥环境中1-2小时即可死亡。在高温或低温条件下都易致死。对各种化学消毒剂的抵抗力也很弱。目前，沙眼衣原体和淋病的检测方法耗费时间较长，由于STD疾病患者的隐私性考虑，很难获得患者的足够配合。而胶体金免疫层析技术得到了广泛应用，其检测方法最为简便、快捷；但是胶体金免疫层析技术仅能获得定性检测结果，而用于定量检测时往往精密度和准确度较差，并且稳定性不佳。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种快速定量检测沙眼衣原体和淋病的试剂盒，其具体是在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成的试纸卡。在一个实施方案中，稀土荧光微球标记抗体由稀土荧光微球标记淋病抗原单克隆抗体和稀土荧光微球标记沙眼衣原体抗原单克隆抗体组成。在另一个实施方案中，所述稀土荧光微球掺杂有铕元素；所述稀土荧光微球的直径为50-100nm。在本专利技术另一个实施方案中，所述吸附荧光微球标记的抗体的结合垫通过以下方法制备：1)稀土荧光微球的活化；2)稀土荧光微球标记的抗体制备：a、将沙眼衣原体抗原单克隆抗体与上述活化的稀土荧光微球混合，反应过夜；然后加入硼氢化钠反应；封闭液封闭，封闭液组成为pH8.5的100mMTris-HCl缓冲液中(含0.5％OVA、0.5％BSA和0.1％木质素磺酸钠)，离心洗涤3遍，重悬于的pH8.5的100mMTris-HCl缓冲液中(含0.5％OVA、0.5％BSA和0.2％木质素磺酸钠)，4℃避光保存备用。b、将淋病抗原单克隆抗体与上述活化的稀土荧光微球混合，反应过夜；然后加入硼氢化钠反应；封闭液封闭，封闭液组成为pH8.5的100mMTris-HCl缓冲液中(含0.5％OVA、0.5％BSA和0.1％木质素磺酸钠)，离心洗涤3遍，重悬于的pH8.5的100mMTris-HCl缓冲液中(含0.5％OVA、0.5％BSA和0.2％木质素磺酸钠)，4℃避光保存备用。c、将步骤a和步骤b制备的稀土荧光微球微球标记抗体按体积比1：1混合备用。3)将玻璃纤维膜浸泡于含1.5％木质素磺酸钠、0.5％BSA和0.5％OVA(卵清白蛋白)的100mMTris-HCl缓冲液中，pH8.5；浸泡，然后取出并烘箱烘干，将玻璃纤维膜置于喷台上，用微定量喷头将稀土荧光微球标记抗体溶液喷到玻璃纤维膜，即得。在本专利技术又一个实施方案中，所述包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜的制备方法如下：用包被稀释液分别将淋病抗原单克隆抗体、沙眼衣原体抗原单克隆抗体和羊抗小鼠IgG抗体制成溶液，将淋病抗原单克隆抗体和沙眼衣原体抗原单克隆抗体溶液作为检测线喷洒于硝酸纤维素膜上进行包被，羊抗小鼠IgG抗体制成溶液作为质控线喷洒于硝酸纤维素膜上进行包被，然后置于烘箱中烘干。在一个具体实施方案中，所述包被稀释液为含0.5％OVA、0.5％BSA和0.5％木质素磺酸钠的100mMTris-HCl缓冲液，pH8.5。在本专利技术又一个实施方案中，所述样品垫的制备方法如下：将玻璃纤维膜浸泡于0.25MTris缓冲液(pH7.5)，含1.2％TritonX-100，2.5％BSA的处理液中，于4℃浸泡4个小时，然后置于烘箱中，37℃烘干4小时。在本专利技术中，所述试纸卡的组装过程如下：在PVC板上依次粘贴经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记的抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后得到试纸大板，按照要求切割成4mm宽，将试纸装入塑料卡内形成试纸卡。所述试剂盒，检测方法为：1)将检测试剂及样本平衡至室温，取出试纸卡，平放；2)精确吸取100μl血清样本，样本为全血时吸取150μl样本，加入到样本孔中，15-30分钟内用荧光免疫层析分析仪定量判定结果；3)设置好仪器相关参数后将试纸卡放入仓内进行检测，仪器将显示出样品浓度的定量测定结果。在本专利技术的快速定量检测试剂盒的制备过程中，在封闭液和喷涂液中添加了木脂素磺酸钠，其作为表面活性剂时，不仅抗体稳定性效果极佳，并且由于其配体作用导致对铕元素荧光微球发光强度随着时间延长没有出现减弱现象。另外，考虑到淋病抗原单克隆抗体和沙眼衣原体抗原单克隆抗体可能会导致的相互影响，因此本专利技术对封闭液及喷涂液中所使用的封闭蛋白进行了详细筛选，最终发现OVA和BSA的组合效果最佳，其与木质素磺酸钠组合可以达到最佳的稳定效果，保证试剂盒中所使用的单抗的稳定性。具体实施方式还可进一步通过实施例来理解本专利技术，其中所述实施例说明了一些制备或使用方法。然而，要理解的是，这些实施例不限制本专利技术。现在已知的或进一步开发的本专利技术的变化被认为落入本文中描述的和以下要求保护的本专利技术范围之内。在本专利技术中，在无特殊说明的前提下，“％”代表重量百分比。实施例1快速检测试剂盒的制备包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜的制备：用包被稀释本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速定量检测沙眼衣原体和淋病的试剂盒，其具体是在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成的试纸卡。

【技术特征摘要】
1.一种快速定量检测沙眼衣原体和淋病的试剂盒，其具体是在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成的试纸卡。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，稀土荧光微球标记抗体由稀土荧光微球标记淋病抗原单克隆抗体和稀土荧光微球标记沙眼衣原体抗原单克隆抗体组成。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀土荧光微球掺杂有铕元素；所述稀土荧光微球的直径为50-100nm。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述吸附荧光微球标记的抗体的结合垫通过以下方法制备：1)稀土荧光微球的活化；2)稀土荧光微球标记的抗体制备：a、将沙眼衣原体抗原单克隆抗体与上述活化的稀土荧光微球混合，反应过夜；然后加入硼氢化钠反应；封闭液封闭，封闭液组成为pH8.5的100mMTris-HCl缓冲液中(含0.5％OVA、0.5％BSA和0.1％木质素磺酸钠)，离心洗涤3遍，重悬于的pH8.5的100mMTris-HCl缓冲液中(含0.5％OVA、0.5％BSA和0.2％木质素磺酸钠)，4℃避光保存备用。b、将淋病抗原单克隆抗体与上述活化的稀土荧光微球混合，反应过夜；然后加入硼氢化钠反应；封闭液封闭，封闭液组成为pH8.5的100mMTris-HCl缓冲液中(含0.5％OVA、0.5％BSA和0.1％木质素磺酸钠)，离心洗涤3遍，重悬于的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈立国，邹伟权，张亚丽，李庆祥，母润红，王涛，苏焱，
申请(专利权)人：广州华弘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44