制备Ｐ↑［１］，Ｐ↑［４］－二（尿苷５′－）四磷酸或其盐的晶体的方法，该方法包括通过阴离子交换色谱法和活性炭色谱法纯化Ｐ↑［１］，Ｐ↑［４］－二（尿苷５′－）四磷酸或其盐的粗品，并将亲水性有机溶剂加到纯化的Ｐ↑［１］，Ｐ↑［４］－二（尿苷５′－）四磷酸或其盐的溶液中，以将溶质作为晶体沉淀出。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及可用作祛痰剂或肺炎治疗剂的活性组分的P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸(U2P4)或其盐的稳定晶体；制备该晶体的方法；和高效率地制备U2P4或其盐的方法。
技术介绍
式(I)所示P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸的四钠盐(U2P4·4Na) 具有祛痰作用，并且是期望作为祛痰剂或肺炎治疗剂开发的化合物(例如美国专利US 5789391、5763447、和5635160)。迄今为止没有获得晶体形式的U2P4，仅制得了冻干产物形式的U2P4(参见WO 99/05155的实施例1)。通过常规方法制得的U2P4其纯度低至90％，并含有副产物。副产物的实例包括核苷5′-(多)磷酸，例如尿苷5′-四磷酸(UP4)、尿苷5′-三磷酸(UTP)、尿苷5′-二磷酸(UDP)、尿苷5′-一磷酸(UMP)；和二核苷多磷酸，例如P1，P4-二(尿苷5′-)三磷酸(U2P3)、和P1，P4-二(尿苷5′-)二磷酸(U2P2)。特别是难以将核苷5′-(多)磷酸例如UTP与U2P4分开，并且仅非常困难地通过常规纯化方法、即离子交换色谱法制得了高纯度U2P4(WO 99/05155，Biochimica etBiophysica Acta，438，(1976)304-309)。上述纯化和冻干产品具有诸如高吸湿性这样的缺点。因此，由U2P4制备药物必须在湿度被良好控制的特殊装置中进行。甚至在药物制备后，还必须将产品紧密包装起来。此外，因为冻干制剂的稳定性不佳，所以药物的有效期非常短，因而希望获得具有高纯度且稳定的U2P4晶体。U2P4是由尿苷5′-一磷酸(UMP)通过使用活化剂例如氯磷酸二苯酯(DPC)和磷酸化剂例如焦磷酸盐(PPi)合成的。然而，常规方法提供的合成产率很低，即低至大约10wt.％(WO 99/05155的实施例4B)，并且可能永远不会成为实用方法。因此，还需要开发出能以高产率和大规模制备U2P4的方法。鉴于上述情况，本专利技术的目的是提供U2P4或其盐的稳定晶体。本专利技术的另一目的是提供制备所述晶体的方法。本专利技术还有一个目的是提供以大规模高效率地制备U2P4的方法。本专利技术公开本专利技术者们已经对纯化U2P4的方法和由UMP合成U2P4的方法进行了深入的研究。本专利技术者们已经发现，通过阴离子交换色谱法和采用活性炭的色谱法(活性炭色谱法)纯化的U2P4易于结晶，并且在通过使用DPC和PPi由用作原料的UMP合成U2P4的过程中，使用特定反应条件能显著提高U2P4产率。基于这些发现，本专利技术得以完成。因此，本专利技术提供了P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的晶体。本专利技术还提供了P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸四钠盐的晶体，该晶体具有在采用Cu-Kα射线的X-射线衍射中在下述衍射角(2θ)附近表现出特征峰的晶体结构5.9、11.5、12.4、15.4、17.2、18.0、19.8、和20.5(°)。本专利技术还提供了P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸四钠盐的晶体，该晶体具有在IR吸收光谱中在1690、1277、1233、1146、1116、和890(cm-1)附近波长表现出特征峰的晶体结构。本专利技术还提供了制备P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的晶体的方法，该方法包括通过阴离子交换色谱法和活性炭色谱法纯化P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的粗产物，并将亲水性有机溶剂加到纯化的P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的溶液中，以沉淀出晶体。本专利技术还提供了通过使用氯磷酸二苯酯(DPC)和焦磷酸盐(PPi)由作为原料的尿苷5′-一磷酸(UMP)制备P1，P4-二(尿苷5′-)四磷酸或其盐的方法，该方法包括至少一个下述处理步骤(a)在UMP磷酸二苯酯(UMP-DPP)与PPi-有机碱盐反应的步骤期间分批加入UMP-DPP；(b)在碱存在下进行UMP-DPP与PPi-有机碱盐反应的步骤；(c)进一步用碱处理合成的U2P4。附图简述附附图说明图1是从乙醇溶液中结晶出的U2P4·4Na四水合物晶体的X-射线衍射光谱。附图2是从乙醇溶液中结晶出的U2P4·4Na八水合物晶体的X-射线衍射光谱。附图3是通过冷冻干燥获得的U2P4的X-射线衍射光谱。附图4是表明从乙醇溶液中结晶出的U2P4·4Na八水合物晶体的晶形的照片。该照片是在偏光显微镜(放大率440)下拍摄的，其中在影像中的1cm相当于23μm。附图5是从乙醇溶液中结晶出的U2P4·4Na八水合物晶体的IR吸收光谱。附图6是通过冷冻干燥获得的U2P4的IR吸收光谱。附图7是从甲醇溶液中结晶出的U2P4·4Na八水合物晶体的X-射线衍射光谱。实施本专利技术的最佳方式本专利技术U2P4或其盐的晶体是这样获得的使用特殊手段纯化U2P4或其盐的粗产物，将亲水性有机溶剂加到纯化的U2P4或其盐的溶液中，以使溶质作为结晶沉淀出来。在下文中将按照(1)纯化U2P4或其盐和(2)结晶U2P4或其盐来描述本专利技术。(1)纯化U2P4或其盐可通过联合使用的阴离子交换色谱法和活性炭色谱法纯化U2P4或其盐。虽然这两种色谱技术可以以任意顺序进行，但是从改善U2P4纯度的角度来看，阴离子交换色谱法优选在活性炭色谱法之前进行。在上述色谱技术中，可使用苯乙烯或丙烯酸树脂作为阴离子交换树脂。可使用的树脂的实例包括强碱性阴离子交换树脂例如AMBERLITEIRA 402(Rohm&Haas Co.)、DIAION PA-312、和DIAION SA-11A(Mitsubishi Chemical Co.Ltd.)，和弱碱性阴离子交换树脂例如AMBERLITE IRA 67(Rohm&Haas Co.)和DIAION WA-30(Mitsubishi Chemical Co.Ltd.)。活性炭可以是粉碎或定形成颗粒的色谱级活性炭，并可包括市售产品(例如Wako Pure Chemical Industries，Ltd.和FutamuraKagaku Kogyo的产品)。色谱法可以以分批方式进行，或者可通过使用柱来进行。当进行柱色谱法时，对于阴离子交换色谱法，可使用酸的水溶液或其与具有增强离子强度的盐例如氯化钠的混合物作为洗脱剂；对于活性炭柱色谱法，可使用水或碱例如氢氧化钠的水溶液作为洗脱剂。为了适当确定各洗脱剂的浓度，可在0.001M-10M范围内进行小规模预先试验。(2)结晶U2P4或其盐通过将亲水性有机溶剂加到由此纯化的U2P4或其盐的溶液中来结晶U2P4或其盐。可使用的亲水性有机溶剂的实例包括具有6个或低于6个碳原子的醇，例如甲醇和乙醇；酮例如丙酮；醚例如二氧杂环己烷；腈例如乙腈；和酰胺例如二甲基甲酰胺。其中醇、尤其是乙醇是特别优选的。更具体而言，任选处理由此纯化的U2P4或其盐的溶液、或通过将该溶液浓缩所获得的浆状物以把pH调节至6-9，在60℃或60℃以下温度将亲水性有机溶剂加到该溶液或浆状物中，以使溶质作为稳定的U2P4晶体沉淀出来。由此获得的本专利技术U2P4晶体含有(1)95％或95％以上的U2P4，和(2)5％或低于5％的其它同系化合物。在本专利技术中，其它同系化合物包括核苷5′-(多)磷酸，例如UP4、UTP、UDP、和UMP；和二核苷多磷酸例如U2P3和U2P本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：前田秀明，山田寿雄，佐藤浩史，野田丰，
申请(专利权)人：雅玛山酱油株式会社，
类型：发明
国别省市：
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