过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的工程菌及构建制造技术

过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的工程菌及构建，属于基因工程及微生物发酵技术领域。克隆了多糖絮凝剂合成途径的关键酶尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因，利用大肠杆菌－芽孢杆菌穿梭质粒构建重组表达载体。通过电转化的方法将重组质粒导入到地衣芽孢杆菌，构建了重组地衣芽孢杆菌HN301-2，构建的重组地衣芽孢杆菌比出发菌株的多糖絮凝剂产量提高了15.6％，发酵液絮凝活性提高了70％。可望用于多糖絮凝剂的工业化生产，提高产量，降低成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程及微生物发酵
，具体是涉及一株过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的地衣芽孢杆菌基因工程菌及其构建方法。
技术介绍
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphorylase，UGPase)在植物、动物和细菌中广泛分布，是一种与糖代谢密切相关的酶。它催化生成的尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)是葡萄糖的主要活化形式，可作为葡萄糖基的供体，在细胞内作为蔗糖、淀粉、纤维素、半纤维素、果胶质以及糖脂、糖蛋白、糖原、β-葡聚糖等多种碳水化合物的前体。已有研究表明尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(gtaB)是多糖生物合成的关键酶基因(JournalofBacteriology,176(9):2611-2618；BiochemicalJournal,370(1):995-1001)。微生物絮凝剂(Microbialflocculant,MBF)是微生物分泌的能够使悬浮液中的固体颗粒、菌体、细胞和胶状物絮凝沉淀的大分子化合物，主要成分有多糖、糖蛋白、蛋白质、纤...

【技术保护点】
过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(gtaB)，其特征在于是编码尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的基因。

【技术特征摘要】
1.过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(gtaB)，其特征在于是编码尿苷二磷酸葡
萄糖焦磷酸化酶的基因。
2.如权利要求1所述过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(gtaB)，其特征在于其
核苷酸序列如序列表中SEQIDNo：1所示。
3.过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(gtaB)的地衣芽孢杆菌基因工程菌的制备
方法，其特征在于其具体步骤如下：
将过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(gtaB)片段连接到表达载体上，然后利用
电转化的方法导入到地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)中，通过抗性筛选获得目的
基因的工程菌，即过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因(gtaB)的地衣芽孢杆菌基因工
程菌；所述地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)已于2009年01月14日保藏于中国微
生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCCNo.2876。
4.如权利要求3所述方法，其特征在于所述表达载体为游离载体，所述表达载体的启动
子为地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)α-淀粉酶基因的启动子PamyL。
5.过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的地衣芽孢杆菌基因工程菌的构建方法，其
特征在于包括以下步骤：
(1)设计PCR引物扩增尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因gtaB；
(2)将扩增得到的目的基因插入到PHY300PLK-PamyL-TTamyL组成型启动子PamyL下游
多克隆位点，得到PHY300-gtaB过表达质粒；
(3)然后将PH...

【专利技术属性】
技术研发人员：何宁，陈震，王志，王远鹏，李清彪，沈亮，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35