3`,5`-环二腺苷酸包合物及其制造方法技术

以往，3',5'‑环二腺苷酸仅作为冷冻干燥品来提供，通过本发明专利技术得到冷冻干燥品以外的固体以及其制造方法。通过在3',5'‑环二腺苷酸水溶液中添加酸，使pH降低至pH1～3的工序，可得到3',5'‑环二腺苷酸包合物。该制造方法及其简便，无需特殊的仪器等。

3 `,5 `cyclodiadenylate inclusion complex and its manufacturing method

【技术实现步骤摘要】
3′,5′-环二腺苷酸包合物及其制造方法本申请是申请日为2015年3月12日、申请号为CN201580012339.6、专利技术名称为“3′,5′-环二腺苷酸包合物及其制造方法”的分案申请，该案的全文以引用的方式并入本申请中。
本专利技术涉及作为辅助剂有用的物质3′,5′-环二腺苷酸包合物，以及其制造方法。
技术介绍
3′,5′-环二腺苷酸是作为细菌的第二信使被发现的物质。近年来有该物质可诱导1型干扰素的报道等，作为医药品的利用被受期待(非专利文献1)。目前，作为3′,5′-环二腺苷酸的制造方法，已知有化学合成法(非专利文献2、3)，或者利用来源于芽孢杆菌属(Bacillus属)或链球菌属(Streptococcus属)等的二腺苷酸环化酶的酶合成法(非专利文献4、5)，并以冷冻干燥品的形式被提供。【现有技术文献】【非专利文献】【非专利文献1】Science,328,1703-1705(2010)【非专利文献2】SYNTHESIS,24,4230-4236(2006)【非专利文献3】NucleosidesNucleotidesNucleicAcids,32,1-16(2013)【非专利文献4】MolecularCell,30,167-178(2008)【非专利文献5】NagoyaJ.Med.Sci.,73,49-57(2011)
技术实现思路
【专利技术所要解决的问题】以往3′,5′-环二腺苷酸是作为冷冻干燥品被提供的，冷冻干燥品以外的制备品尚未已知。但是，冷冻干燥品在其制造过程中需要冷冻干燥，为大量生产而扩大规模自然也存在限制。因此，本专利技术的课题在于，在不使用特殊的装置和工序的情况下，提供与冷冻干燥品不同的崭新的3′,5′-环二腺苷酸的制备品。【解决问题的技术手段】本专利技术的专利技术人等针对与冷冻干燥品不同的3′,5′-环二腺苷酸的制备品进行了研究。结果新发现，通过在3′,5′-环二腺苷酸水溶液中添加酸使pH降低至pH1～3这种极其简便的方法，可制造与冷冻干燥品具有完全不同的物理性质的3′,5′-环二腺苷酸包合物。【专利技术的效果】本专利技术提供一种与以往的冷冻干燥品完全不同的3′,5′-环二腺苷酸包合物。本专利技术的包合物是结晶性物质，操作简便(例如，无吸湿性且稳定性、溶解性优异等)。另外，本专利技术的3′,5′-环二腺苷酸包合物的制造方法不需要制备所需的特殊装置或者工序，可有效地大量生产3′,5′-环二腺苷酸。【附图说明】【图1】图1为3′,5′-环二腺苷酸包合物(非结晶性)照片。【图2】图2为3′,5′-环二腺苷酸钠盐的冷冻干燥品照片。【图3】图3为3′,5′-环二腺苷酸铵盐的冷冻干燥品照片。【图4】图4为3′,5′-环二腺苷酸包合物(非结晶性)的热重测定/差示热分析结果。【图5】图5为3′,5′-环二腺苷酸钠盐的冷冻干燥品的热重测定/差示热分析结果。【图6】图6为3′,5′-环二腺苷酸铵盐的冷冻干燥品的热重测定/差示热分析结果。【图7】图7为3′,5′-环二腺苷酸包合物的核磁共振波谱(1H)。【图8】图8为3′,5′-环二腺苷酸包合物的核磁共振波谱(13C)。【图9】图9为3′,5′-环二腺苷酸包合物的核磁共振波谱(31P)。【图10】图10为3′,5′-环二腺苷酸包合物的红外线吸收光谱。【图11】图11为3′,5′-环二腺苷酸钠盐的冷冻干燥品的红外线吸收光谱。【图12】图12为3′,5′-环二腺苷酸铵盐的冷冻干燥品的红外线吸收光谱。【图13】图13为3′,5′-环二腺苷酸包合物(结晶性)照片。【图14】图14为3′,5′-环二腺苷酸包合物(结晶性)的热重测定/差示热分析结果。【图15】图15为3′,5′-环二腺苷酸包合物(结晶性)的X射线衍射光谱。【具体实施方式】本专利技术提供由以下结构是所示的3′,5′-环二腺苷酸包合物。[化学式1]本专利技术中提到的包合物是指，化合物和溶剂通过弱的相互作用而形成复合体等，在固化中溶剂起到辅助作用的状态的固体物，对于包合的形态与固体的结构没有限制。特别是，在本专利技术中使用水作为溶剂，因此在没有特殊记载的情况下，本专利技术的包合物是指与水的包合物。此外，本专利技术的包合物包括结晶性物质以及非结晶性物质。本专利技术的3′,5′-环二腺苷酸包合物可通过在3′,5′-环二腺苷酸水溶液中添加酸使pH降低至pH1～3而得到。为获得本专利技术的包合物所利用的3′,5′-环二腺苷酸可通过酶合成法或者化学合成法等已知的方法合成，优选通过酶合成法的合成的物质。在进行酶合成法时，遵循已知的方法即可，例如，可利用非专利文献4、5中记载的方法。反应后，在反应液中生成的3′,5′-环二腺苷酸可通过使用了活性炭或者离子交换树脂等的通常的色谱处理法进行分离纯化。为了获得本专利技术的包合物，在3′,5′-环二腺苷酸水溶液中添加酸，使pH降低至pH1～3，优选降低至pH1.5～2.0即可。作为所使用的酸，可调整到上述pH的酸即可，具体可举例为，盐酸、硫酸、硝酸等无机酸。此外，为了防止因加酸过快而导致的非结晶化或者结晶急剧析出，优选缓慢添加。另外，包合物的获得率低时，也可通过对上述包合物的滤液进反复进行数次相同的处理而再次获得包合物。此外，本专利技术的包合物可按照含有以下工序的方法获得：(1)在3′,5′-环二腺苷酸水溶液中添加酸，使pH降低至pH1～3；(2)将该3′,5′-环二腺苷酸水溶液加热至50～70℃；(3)将该3′,5′-环二腺苷酸水溶液冷却至1～10℃。另外，(1)(2)工序、(2)(3)工序可同时进行。另外，也可按照由以下工序构成的方法获得：(1)在被稀释的3′,5′-环二腺苷酸水溶液中添加酸，使pH降低至1～3；(2)将调整pH后的该3′,5′-环二腺苷酸水溶液加热至50～70℃；(3)将该3′,5′-环二腺苷酸水溶液冷却至1～10℃。为了更可靠地获得包合物，优选缓慢进行(3)的冷却。具体地，优选在温度梯度为-3～-11℃/hr的条件下进行冷却。对于由上述制造方法得到的3′,5′-环二腺苷酸包合物，在过滤后使其在室温(25℃)～70℃下干燥1～10小时，即可得到产品。对于本专利技术的包合物，通过在干燥时的温度为室温(25℃)～40℃的低温下干燥，可得到结晶性物质，在40～70℃的高温条件下干燥，可得到非结晶性物质。具体地，对于本专利技术的包合物，通过在干燥时的温度为室温(25℃)以上～小于40℃的低温下干燥，可得到结晶性物质，在40以上～70℃以下的高温条件下干燥，可得到非结晶性物质。另外，对于得到的包合物，可以在过滤后干燥前利用乙醇适当清洗。在干燥时，可适当地利用减压干燥法。通过这样的方法得到的本专利技术的3′,5′-环二腺苷酸包合物，在采用高效液相色谱法进行纯度检验时，具有97％以上，更优选为99％以上的纯度，且具有以下的物理性质。此外，下述的物理性质中，没有特别限定的记载的情况下，表示结晶性物质、非结晶性物质双方共有的性质。(1)水分含量对于本专利技术的3′,5′-环二腺苷酸包合物，虽然会因干燥程度而有所不同，但通过热重测定/差示热分析(TG/DTA)装置测定时的水分在3.5～17％的范围内。即，本专利技术的3′,5′-环二腺苷酸包合物中，相对于1分子的3′,5′-环二腺苷酸键合或者附着有1～7分子的水分子，更具体地，键合或者附着有1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种3',5'‑环二腺苷酸包合物的制造方法，其特征在于，所述包合物是结晶性物质，在粉末X射线分析中，在衍射角2θ为9.2°、15.2°、19.0°、20.6°、26.8°附近显示有特征峰，包括以下(1)～(4)的工序：(1)在水中添加3',5'‑环二腺苷酸，制成3',5'‑环二腺苷酸水溶液；(2)在所述3',5'‑环二腺苷酸水溶液中添加酸，使pH降低至pH1～3；(3)将3',5'‑环二腺苷酸水溶液加热至50～70℃；以及(4)将3',5'‑环二腺苷酸冷却至1～10℃。

【技术特征摘要】
2014.03.14 JP 2014-052076;2014.11.21 JP 2014-236801.一种3',5'-环二腺苷酸包合物的制造方法，其特征在于，所述包合物是结晶性物质，在粉末X射线分析中，在衍射角2θ为9.2°、15.2°...

【专利技术属性】
技术研发人员：田中寿基，石毛和也，
申请(专利权)人：雅玛山酱油株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP