人腺苷酸环化酶相关蛋白编码序列、其制备方法及用途技术

本发明专利技术涉及基因工程领域，具体地，本发明专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明专利技术涉及人腺苷酸环化酶相关蛋白（ｈＡＣＬ）的ｃＤＮＡ序列以及该序列编码的多肽。本发明专利技术还涉及所述多核苷酸序列和所述多肽的生产方法，以及这些多核苷酸和所述多肽的用途。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本专利技术涉及人腺苷酸环化酶相关蛋白的cDNA序列以及该序列编码的多肽。本专利技术还涉及所述多核苷酸序列和所述多肽的生产方法，以及这些多核苷酸和所述多肽的用途。cAMP是信号通路中的众多传递者之一，在细胞信号传导中起重要作用。腺苷酸环化酶(Adenylate cyclase)是细胞中cAMP信号通路的催化单位。它结合在质膜上并跨越质膜十二次，是由大约1100个氨基酸残基组成的糖蛋白。该酶含有两个功能域一个N末端的催化功能结构域和一个C末端的调控结构域。有两个高度保守区域第一个位于催化结构域中，第二个在调节结构域中，后者含有一个保守的组氨酸，该组氨酸可被PTS系统的IIA酶磷酸化，从而激活整个环化酶。腺苷酸环化酶的作用是在Mg2+或Mn2+存在下的条件下催化ATP生成3’，5’-环腺苷酸(cAMP)。作为cAMP信号通路的胞内第二信使的cAMP，在细胞内的浓度(正常状况下≤10-6mol/L)应该被严格的控制，并且能够对细胞外信号产生快速的应答。例如当刺激型激素存在时，cAMP水平在1秒钟内增加5倍以上。细胞内另一种类型的酶即环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)可快速的降解cAMP生成5’-腺苷酸(5-AMP)，使细胞内cAMP水平下降。cAMP信号通路的最后一个化学反应是通过蛋白激酶A完成的。CAMP特异性的活化蛋白激酶A，活化的蛋白激酶A即可使特殊的蛋白磷酸化。依赖于cAMP的蛋白激酶A将ATP末端的磷酸转移到底物蛋白的丝氨酸或苏氨酸残基上。许多酶被蛋白激酶A磷酸化后，酶的活性提高；另一些酶被磷酸化后，酶活性降低。每个蛋白激酶A由两部分组成两个催化亚基和两个调节亚基。不存在cAMP时，催化亚基和调节亚基形成一个钝化复合物。cAMP与调节亚基结合，改变了调节亚基的构象，使调节亚基和催化亚基解离，催化亚基释放。被释放的蛋白激酶A的催化亚基转为到细胞核中并磷酸化一种称为CREB的蛋白(binding protein of cAMP-responseelement，与cAMP应答元件结合的蛋白)的丝氨酸残基。被磷酸化的CREB作为基因调节蛋白识别靶基因上的基因调节序列CRE(cAMP-response element，cAMP应答元件)并与之结合调节靶基因的表达。通过靶基因表达产物把外界刺激转变为信号逐级传递，进而影响整个生物体的生理活动。本专利技术的另一个目的是提供一种新的转运蛋白家族成员，该蛋白被命名为人hACL。本专利技术的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的人hACL的方法。本专利技术还提供了hACL基因序列和多肽的应用。在本专利技术的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括编码具有人hACL蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸1040-1519位的核苷酸序列有至少90％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.1中从核苷酸1040-1519位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.2所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.1中从1040-1519位的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种分离的hACL蛋白多肽，它包括具有SEQ ID NO.2氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ IDNO.2序列的多肽。在本专利技术的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。在本专利技术的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。在本专利技术的另一方面，提供了一种产生具有hACL蛋白活性的多肽的方法，该方法包括(a)将编码具有hACL蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成hACL蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸1040-1519位的核苷酸序列有至少90％的同源性；(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成hACL蛋白的重组细胞；(c)在适合表达hACL蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；(d)分离出具有hACL蛋白活性的多肽。在本专利技术的一个具体实施方案中，本专利技术的分离的多核苷酸全长为2013个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.1，其中开放读框位于1040-1519位核苷酸。在本专利技术中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。在本专利技术中，术语“hACL蛋白(或多肽)编码序列”指编码具有hACL蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1中1040-1519位核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指，位于SEQ ID NO.1序列的编码框1040-1519位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ ID NO.1中1040-1519位核苷酸序列同源性低至约90％的简并序列也能编码出SEQID NO.2所述的序列。该术语还包括能在中度严紧条件下，更佳的在高度严紧条件下与SEQ ID NO.1中从核苷酸1040-1519位的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。还术语还包括与SEQ ID NO.1中从核苷酸1040-1519位的核苷酸序列的同源性至少90％的核苷酸序列。该术语还包括能编码具有与人hACL相同功能的蛋白的、SEQ ID NO.1中开放阅读框序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-90个，较佳地1-60个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个(通常为60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为10个以内，最佳地为5个以内)核苷酸。在本专利技术中，“基本纯的”蛋白质或多肽是指其至少占样品总物质的至少20％，较佳地至少50％，更佳地至少80％，最佳地至少90％(按干重或湿重计)。纯度可以用任何合适的方法进行测量，如用柱层析、PAGE或HPLC法测量多肽的纯度。基本纯的多肽基本上不含天然状态下的伴随其的组分。在本专利技术中，术语“hACL蛋白多肽”指具有hACL蛋白活性的SEQ ID NO.2序列的多肽。该术语还包括具有与人hACL相同功能的、SEQ ID NO.2序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括hACL蛋白的活性片段和活性衍生物。该多肽的变异形式包括同源序列、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严谨度条件下能与hACL DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗hACL多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。本专利技术还提供了其他多本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离出的ＤＮＡ分子，其特征在于，它包括：编码具有人ｈＡＣＬ蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１中从核苷酸１０４０－１５１９位的核苷酸序列有至少７０％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１中从核苷酸１０４０－１５１９位的核苷酸序列杂交。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，唐丽莎，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]