环焦磷酸酯类化合物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了环焦磷酸酯类化合物及其制备方法，目的是提供稳定性强、活性高的ｃＡＤＰＲ类似物及其制备方法。本发明专利技术所提供的环焦磷酸酯类化合物具有通式（Ⅰ）结构，其中Ｘ为Ｃ或Ｏ，Ｙ为Ｃ或Ｏ；其制备以Ｎ↑［９］－［（叔丁基二甲基硅基－Ｏ－乙氧基）－甲基］－次黄嘌呤为原料。本发明专利技术的ｃＩＤＰＲＥ为膜透性的ｃＡＤＰＲ类似物，具有合成方法简便，对底物局限小、合成产物量大等特点；产物自身可以发出荧光，稳定性好、修饰范围广等优点，可以作为研究ｃＡＤＰＲ介导细胞内钙库的钙离子释放，ｃＡＤＰＲ参与的细胞内钙信号传导等各方面的材料，是一种理想的药理学工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
环腺苷二磷酸核糖(cADPR)是内源性的细胞内钙离子激动剂，近年来研究表明它还可以作为细胞内信号传导的第二信使。由于cADPR在细胞内易酸解和酶解，因而迫切需要稳定性强，活性高的cADPR类似物作为药理学工具对cADPR在细胞内的作用机制进行研究。目前合成cADPR类似物的方法主要有三种酶法合成，仿生法合成和化学法合成。其中酶法合成和仿生法合成对底物的局限较大。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供稳定性强、活性高的。本专利技术所提供的环焦磷酸酯类化合物是具有通式(I)的化合物， 式中X为C或O，Y为C或O。通式(I)表示的环焦磷酸酯类化合物的制备方法，包括如下步骤1)将N9--次黄嘌呤溶于二氯甲烷中，加入DBU后，滴加氯甲氧基乙酸乙酯，室温下搅拌0.5-1h后蒸干溶剂，柱层析得N1--N9-(甲基-乙二醇)-次黄嘌呤；2)将N1--N9--次黄嘌呤溶于THF后，加入TBAF的THF溶液，室温下搅拌1-3h后蒸干溶剂，柱层析得N1--N9-(甲基-乙二醇)-次黄嘌呤；3)将N1--N9-(甲基-乙二醇)-次黄嘌呤溶于无水吡啶中，加入1-H四唑和(PhNH)2POCl，室温下搅拌44-52h后蒸干溶剂，柱层析得N1--N9--次黄嘌呤；4)将N1--N9--次黄嘌呤溶于无水甲醇中，滴入甲醇钠溶液，室温搅拌1-3h，过滤后浓缩滤液，得N1--N9--次黄嘌呤；5)将N1--N9--次黄嘌呤溶于无水吡啶中，加入TPSCl(2，4，6-三异丙基苯磺酰氯)，1-H四唑和PSS(S，S’-二苯巯基磷酰基环己胺盐)，室温搅拌20-28h，蒸干溶剂，柱层析得N1--甲基]-N9--次黄嘌呤；6)将N1--甲基]-N9--次黄嘌呤溶于吡啶-乙酸-乙酸酐中，加入亚硝酸异戊酯，室温搅拌6-10h，蒸干溶剂后溶于无水吡啶中，加入H3PO2和三乙胺室温下搅拌10-12h，蒸干溶剂，萃取、柱层析、冻干后得N1--N9--次黄嘌呤的三乙胺盐；7)将活化好的3分子筛和I2置于反应瓶中，加入无水吡啶，室温下搅拌，将N1--N9--次黄嘌呤(式(XII))的三乙胺盐上述反应瓶中，继续搅拌1-3小时，过滤掉分子筛，萃取、柱层析、冻干后得N1--N9--次黄嘌呤-环焦磷酸酯的三乙胺盐。其中所述N9--次黄嘌呤按如下步骤制备1)将腺嘌呤溶于无水吡啶中，加入苯甲酰氯后回流反应1-2小时，蒸干溶剂，萃取、过滤、浓缩，得N6-苯甲酰基-腺嘌呤；2)将N6-苯甲酰基-腺嘌呤溶于无水1，2二氯乙烷中，加入N，O-双三甲基硅基乙酰胺(BSA)，加热至110-130℃，加入氯代甲氧基乙酸乙酯，在70-90℃下搅拌反应1-2h，萃取、浓缩得N6-苯甲酰基-N9--腺嘌呤；3)将N6-苯甲酰基-N9--腺嘌呤溶于甲醇-氨水中，室温下搅拌反应20-28h，蒸干溶剂，用水重结晶，得N9-甲基乙二醇-腺嘌呤；4)将N9-甲基乙二醇-腺嘌呤溶于冰醋酸，搅拌下加入亚硝酸钠水溶液，室温下搅拌20-28h，蒸干溶剂，得N9-甲基乙二醇-次黄嘌呤；5)将N9-甲基乙二醇-次黄嘌呤溶于无水DMF中，加入咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷，室温下搅拌2-4h，经沉淀、过滤、浓缩，得N9--次黄嘌呤。本专利技术合成反应式如下，反应式(1)为腺嘌呤合成N9--次黄嘌呤的反应式；反应式(2)为以N9--次黄嘌呤合成N1--N9--次黄嘌呤-环焦磷酸酯的反应式。 试剂(a)BzCl，Py；(b)BSA，TMSOTf，DCE；(c)NH3/CH3OH；(d)NaNO2，AcOH；(e)TBDMSCl，Imidazole，DMF。 试剂(a)DBU，ClCH2CH2OAC，CH2Cl2；(b)TBAF，THF；(c)(PhNH)2POCl，tetrazole，Py；(d)CH3Ona，CH3OH；(e)PSS，TPSCl，tetrazole，Py；(f)i isoamyl nitrite，Py∶ACOH∶AC2O(2∶1∶1)，ii H3PO2，Et3N，Py；(g)I2，3MS，Py。本专利技术的cIDPRE为膜透性的cADPR类似物，具有合成方法简便，对底物局限小、合成产物量大等特点；产物自身可以发出荧光，稳定性好、修饰范围广等优点，可以作为研究cADPR介导细胞内钙库的钙离子释放，cADPR参与的细胞内钙信号传导等各方面的材料，是一种理想的药理学工具。具体实施例方式实施例1、N1--N9--次黄嘌呤-环焦磷酸酯的合成(cIDPDE，式(I)中X＝O，Y＝O)所有溶剂、原料和试剂如不特别指明，均为分析纯或化学纯。溶剂的无水处理按照常规方法进行。产物分离、鉴定的仪器和方法薄层层析硅胶GF254、柱层析粗孔硅胶(200-300目)、硅胶H均为青岛海洋化工厂生产；TLC通过254nm紫外检测或用5％磷钼酸乙醇溶液显色；熔点使用XT-4A型熔点仪测定，温度计未校正；旋光使用Perkin-Elmer 243B旋光仪测定；红外光谱使用DE-983G红外光谱仪测定，溴化钾压片；糖浆用液膜法。FAB和MALDI-TOF由VG-ZAB-HS和Bruker APEXTMII，HR-FAB使用Bruker BIFLEXTMIII质谱仪测定；紫外光谱使用Pharmacia LKB Biochrom 4060分光光度计测定。核磁共振谱使用Varian VXR-500、JEOL AL300、Bruker Advance 300核磁共振仪测定，氢谱、碳谱以TMS为内标；磷谱以85％H3PO4为外标；元素分析使用PE-240C元素分析仪测定。注射泵用Cole-Parmer公司生产的74900型。HPLC使用Gilson高效液相仪，使用Delter Paker C-18半制备柱分离。1、合成N6-苯甲酰基-腺嘌呤(N6-Benzyl-Adenosine)(式(II))将腺嘌呤(10g，74mmol)溶于50ml无水吡啶(Py)中，搅拌下滴加苯甲酰氯(26g，222mmol)，滴加完毕回流两个小时，停止反应，蒸干溶剂，加入饱和碳酸氢钠搅拌30min，用氯仿萃取水层，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，所得粗品用氯仿重结晶，得白色针状晶体(式(II))14g，产率为79％，熔点为248.5-249.5℃。2、合成N6-苯甲酰基-N9--腺嘌呤(式(III))N6-Benzyl-N9--Adenosine将N6-苯甲酰基-腺嘌呤(式(II))(5.9g，24.7mmol)溶于200ml无水1，2二氯乙烷中，加入N，O-双三甲基硅基乙酰胺(BSA)(12.4ml，49mmol)，加热至120℃，待固体完全溶解(大约20min)，加入氯甲氧基乙酸乙酯(4.9ml，29.6mmol)，在80℃下搅拌1.5h，冷却至室温，加入200ml乙酸乙酯，用100×2ml饱和碳酸氢钠洗，100ml饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，常压柱层析得白色固体(式(III))3.1g，产率为35％。1H NMR(300MHz，DMSO)δ1.936(s，3H，CH3CO-)，3.75-3.78(m，2H，H5′)，4.08-4.11(m，2H，H4′)，5.71(s，2H，H1′)，7.53-7.68(m，5H，ArH)，8.6本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有通式（Ⅰ）的环焦磷酸酯类化合物，＊＊＊（Ⅰ）式中Ｘ为Ｃ或Ｏ，Ｙ为Ｃ或Ｏ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张礼和，古险峰，杨振军，张亮仁，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]