可用于检测RALGDS和VAV1基因特异甲基化位点的试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种RALGDS和VAV1基因启动子区特异性位点甲基化水平的试剂盒及其应用，特点是利用一种焦磷酸测序法定量检测RALGDS基因cg16872071位点和VAV1基因cg13470920、cg26571739位点的甲基化水平，设计了针对每个位点的独有引物，分别包括上、下游PCR扩增引物和甲基化测序引物，并且其中一条扩增引物带有生物素标记。本发明专利技术在原发性肝细胞癌患者中筛查RALGDS和VAV1基因的特异性位点，采用焦磷酸测序技术对其甲基化水平进行快速准确检测。

Kit for detecting RALGDS and VAV1 gene specific methylation site and application thereof

The invention discloses a RALGDS and VAV1 gene promoter methylation level of specific promoter kit and application thereof, is characterized by use of methylation in a quantitative pyrosequencing assay for detection of RALGDS cg16872071 gene and VAV1 gene cg13470920, cg26571739 locus, designed for each site unique primers, including amplification primers and methylation sequencing primers, downstream of PCR, and one of them with biotin labeled primers. The present invention is to screen the specific sites of RALGDS and VAV1 gene in patients with primary hepatocellular carcinoma, and to detect the methylation level by pyrosequencing.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种辅助诊断原发性肝细胞癌的检测试剂盒，尤其是涉及一种可用于检测肝癌相关RALGDS和VAV1基因启动子区特异性位点甲基化水平的试剂盒及其应用。
技术介绍
肝癌是全球范围内致死率排名第三的恶性肿瘤，也是我国位居第二的癌症“杀手”。目前对肝癌的治疗主要以手术、放化疗为主，同时结合免疫治疗、中医等其他治疗方法；但由于对于肝癌的发病机制尚不明确及缺乏有效的治疗靶点，中后期的病人治疗效果不佳，生存率低。研究表明，肝癌发生发展是一个表观遗传学调控的过程。DNA甲基化是目前表观遗传学研究的热点之一，它是指在DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferase，DNMT)介导下，以S-腺苷蛋氨酸为甲基供体，将甲基基团转移到DNA某些碱基上的过程。DNA甲基化异常被认为是发生肿瘤的一个重要原因。研究肝癌相关基因特异性位点甲基化的改变，有助于了解肝癌的发病机理，为肝癌的预防和治疗提供有效的作用靶点。RALGDS(ralguaninenucleotidedissociationstimulator，Ral鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子)是Ras的一个下游效应蛋白，也是Ras相关GTP酶效本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可用于检测与原发性肝细胞癌相关的RALGDS基因启动子区特异位点甲基化水平的试剂盒，其特征在于：焦磷酸测序法定量检测RALGDS基因特异性甲基化位点cg16872071，特异性甲基化位点的引物，包括PCR引物和甲基化测序引物，其中，PCR上游引物序列如SEQ ID NO.1所示：5′‑TGGGTAGTGAAAATGATTTTTTTAAATAGT‑3′；下游引物序列如SEQ ID NO.2所示：biotin‑5′‑CTAAACACATAATCAACCTCTCCAAACTC‑3′；甲基化测序引物序列如SEQ ID NO.3所示：5′‑AGTTGAGGGGAGGATG‑3′。

【技术特征摘要】
1.一种可用于检测与原发性肝细胞癌相关的RALGDS基因启动子区特异位点甲基化水平的试剂盒，其特征在于：焦磷酸测序法定量检测RALGDS基因特异性甲基化位点cg16872071，特异性甲基化位点的引物，包括PCR引物和甲基化测序引物，其中，PCR上游引物序列如SEQIDNO.1所示：5′-TGGGTAGTGAAAATGATTTTTTTAAATAGT-3′；下游引物序列如SEQIDNO.2所示：biotin-5′-CTAAACACATAATCAACCTCTCCAAACTC-3′；甲基化测序引物序列如SEQIDNO.3所示：5′-AGTTGAGGGGAGGATG-3′。2.权利要求1所述肝癌相关的RALGDS基因特异性甲基化位点的应用，其特征在于：应用焦磷酸测序对RALGDS基因cg16872071位点甲基化程度检测中，原发性肝细胞癌与对应的癌旁组织存在显著性差异；该位点在原发性肝癌中甲基化程度显著降低；该位点甲基化定量信息的测定，有助于开发肝癌的辅助检测和诊断手段。3.一种可用于检测与原发性肝细胞癌相关的VAVl基因启动子区特异位点甲基化水平的试剂盒，其特征在于：焦磷酸测序法定量检测VAVl基因特异性甲基化位点cg13470920，特异性甲基化位点的引物，包括PCR引物和甲基化测序引物，其中，PCR上游引物序列如SEQIDNO.4所示：5′-GTTTTGGGTAGG...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨小丽，张悦宁，李佳桐，刘坤，张成东，
申请(专利权)人：杨小丽，
类型：发明
国别省市：广西;45