咖啡酸在食管癌治疗中的应用制造技术

技术编号:15007873 阅读:91 留言:0更新日期:2017-04-04 14:15
本发明专利技术公开一种咖啡酸在食管癌治疗中的应用,作为食管癌肿瘤细胞内组蛋白去甲基化酶GASC1基因的抑制剂。本发明专利技术利用咖啡酸作为分子靶向药物抑制食管癌肿瘤细胞的生长和/或抑制肿瘤的复发、转移,减小癌细胞繁殖,为食道癌提供了有效的治疗手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及咖啡酸的新用途,尤其是涉及一种咖啡酸在食管癌治疗中的应用
技术介绍
咖啡酸(CaffeicAcid),又称3,4-二羟基肉桂酸,是一种从中药如丹参、野胡萝卜、光叶水苏、荞麦、木半夏、咖啡菊科植物等中提取的天然产物,具有以下作用:1、抗菌抗病毒:具有较广泛的抑菌作用,但在体内能被蛋白质灭活。体外试验表明,有抗病毒活性,对牛痘和腺病毒抑制作用较强,其次为脊髓灰质炎Ⅰ型和副流感Ⅲ型病毒。2、抗蛇毒:咖啡酸3微克剂量时能完全抑制20微克响尾蛇毒磷酸二酯酶,用作抗蛇毒剂。3、其他作用:口服或腹腔注射时,咖啡酸可提高大鼠的中枢兴奋性;口服,可增加人胃中盐酸的分泌量,并能使脉搏变慢;可增强子宫的张力,此作用可被罂粟碱所拮抗,而阿托品则不能影响;可增进大鼠胆汁分泌。有升高白血球和血小板、止血及灭活维生素B1等作用。能抑制鼠脑组织匀浆脂质过氧化物的生成。有缩短血凝及出血时间的作用。食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一,死亡率在消化系统恶性肿瘤中列第二位,仅次于胃癌。化疗是治疗食管癌及术后患者的方法之一,但化疗药物对骨髓抑制较严重,容易引起白细胞减少等。国内在中医文献中曾有报道,咖啡酸有一定抗肿瘤治疗及提高免疫力作用,但是,仅为个案报道。疗效不明显,治疗机理不清楚,数据不完整。目前咖啡酸用于食管癌肿瘤细胞治疗方面未见有文献报道。
技术实现思路
为解决上述问题,本专利技术的目的是提供一种咖啡酸在食管癌治疗中的应用,具体地,是作为分子靶向药物在食管癌治疗中的应用。为实现上述专利技术目的,本专利技术采用如下技术方案:一种咖啡酸在食管癌治疗中的应用,作为食管癌肿瘤细胞内组蛋白去甲基化酶GASC1基因的抑制剂。上述的咖啡酸在食管癌治疗中作为分子靶向药物,能够抑制食管癌肿瘤细胞的生长和/或抑制肿瘤的复发、转移,减小癌细胞繁殖。上述的咖啡酸在食管癌治疗中作为表观遗传学药物,实现多个靶点治疗。上述的食管癌肿瘤包括各种实体原发性肿瘤、转移性肿瘤或复发性肿瘤。上述的咖啡酸可以制成任何可口服药用的剂型,这些剂型包括:片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、丹剂、混悬剂。上述的咖啡酸是现有技术,可以从市场上买到,也可以根据现有技术制备,符合药用标准。分子靶向治疗,是在细胞分子水平上,针对已经明确的致癌位点(该位点可以是一个基因片段),来设计相应的治疗药物,药物进入体内会特异地选择致癌位点结合发生作用,使肿瘤细胞特异性死亡,而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞。咖啡酸作为组蛋白去甲基化酶GASC1(Geneamplifiedinsquamouscellcarcinoma1)的抑制剂,通过特异性阻断GASC1分子靶点可抑制干性核心转录因子SOX2核心启动子上组蛋白H3K9me3去甲基化,通过维持组蛋白H3K9me3的高甲基化状态抑制干性核心转录因子SOX2的转录活性及表达,影响其表观遗传修饰功效,从而在食管癌细胞增殖及干性维持中发挥抑制作用。由于采用如上所述的技术方案,本专利技术具有如下优越性:本专利技术利用咖啡酸作为分子靶向药物抑制食管癌肿瘤细胞的生长和/或抑制肿瘤的复发、转移,减小癌细胞繁殖,为食道癌提供了有效的治疗手段;表观遗传抗癌药物与传统化疗药物之间的联合应用,可实现多靶点治疗及最大限度发挥减毒增效作用。附图说明图1:人食管癌肿瘤细胞增值抑制率曲线图;图2:人食管癌肿瘤细胞克隆形成实验示意图;图3:人食管癌肿瘤细胞克隆形成实验柱状统计图;图4:咖啡酸对人食管癌肿瘤细胞活性影响示意图;图5:人食管癌肿瘤细胞克隆成球实验结果示意图;图6:人食管癌肿瘤细胞球的自我更新示意图;图7:免疫缺陷裸小鼠食管癌肿瘤体积随咖啡酸注射时间变化的统计图;图8:不同浓度咖啡酸治疗后食管癌干细胞异体移植瘤活体随注射时间呈像信号强度变化图;图9:不同浓度咖啡酸治疗后食管癌干细胞肺部转移瘤活体随注射时间呈像信号强度变化图;图10:免疫缺陷裸小鼠肺部克隆成瘤数量比较散点图。具体实施方式参照以下实施例可以对本专利技术作进一步详细说明;但是,以下实施例仅仅是例证,本专利技术并不局限于这些实施例。实施例11、人食管癌肿瘤细胞培养(1)、细胞传代前提前做好培养瓶包被(培养瓶瓶底用鼠尾胶原包被,效果较好);(2)、每日换液;(3)、细胞汇合度达80~90%时传代,传代比例为1:8或1:10;(4)、在细胞生长至铺满培养瓶80~%时,光学显微镜下观察细胞的生长情况并拍照;细胞传至第5代后,消化细胞,取6孔板,将细胞爬片置于6孔板内。取待用细胞缓慢滴加至细胞爬片上,覆盖至整个爬片。将6孔板置于培养箱内37℃继续培养,随后取出6孔板,光学显微镜下观察爬片上的细胞贴壁是否良好,随后可用于干细胞标记物免疫细胞荧光(ICC)检测;(5)、细胞传至第5代后,消化细胞,进行ALDEFLUOR?细胞检测。2、食管癌CSC干性维持及自我更新能力的检测贴壁培养的食管癌原代培养CSC细胞制成细胞悬液,15ml离心管1000r/min离心5min收集细胞,1×PBS洗细胞1次,再离心收集细胞,用干细胞培养基重悬细胞,调整细胞浓度至25000个细胞/ml。初级细胞球培养:将重悬于干细胞培养基、细胞密度为25000细胞/ml的原代培养CSC加于24孔超低吸附培养皿中,毎孔加细胞悬液0.5ml,用于细胞微球拍照、计数和初级细胞球ALDHbri+Eso/ALDHlow-Eso百分比检测;用于总RNA提取的细胞培养于在6孔超低吸附培养皿,毎孔加细胞悬液1ml培养液,细胞密度为25000个细胞/ml。其间,在第3天更换新鲜干细胞培养基,于培养的第7天收集初级细胞球用于次级细胞球培养。次级细胞球培养:800g离心1min收集各组食管癌细胞初级细胞球,用含0.02%EDTA的0.25%、胰蛋白酶消化细胞球15min,用10%FBSDMEM/F12终止消化,吹打3次分散细胞,用40μm细胞筛网过滤,取滤过的单个细胞,1000r/min离心5min收集细胞,用不含血清DMEM/F12洗细胞1次,离心,用新鲜配制的干细胞培养基重悬细胞,细胞终浓度为25000个细胞/ml。细胞至24孔超低吸附培养皿悬浮培养,毎孔加细胞悬液0.5ml,第3天更换1次新鲜培养基,连续培养7天。在显微镜下对悬浮培养的细胞照相,计数直径在40μm以上次级细胞球的数目。次级细胞球形成率=次级细胞球的数目/接种细胞数目×100%;肿瘤干细胞自我更新能力:以次级细胞球形成率和初级细胞球ALDHbri+Eso/ALDHlow-Eso细胞群的百分比来衡量。3、MTS法绘制细胞生长曲线接种细胞:用含5%FBSDMEM/F12培养基配成单细胞悬液,以每孔1000个细胞接种96孔板,每孔体积100μL,贴壁本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种咖啡酸在食管癌治疗中的应用,其特征是:作为食管癌肿瘤细胞内组蛋白去甲基化酶GASC1基因的抑制剂。

【技术特征摘要】
1.一种咖啡酸在食管癌治疗中的应用,其特征是:作为食管癌肿瘤细胞内组蛋白去甲基化酶GASC1基因的抑制剂。
2.根据权利要求1所述的咖啡酸在食管癌治疗中的应用,其特征是:咖啡酸在食管癌治疗中作为分子靶向药物,能够抑制食管癌肿瘤细胞的生长和/或抑制肿瘤的复发、转移,减小癌细胞繁殖。
3.根据权利要求1所述的咖啡酸在食管癌治疗中的应用,其特征是:咖啡酸在食管癌治疗中作为表观遗传学药物,...

【专利技术属性】
技术研发人员:高社干冯笑山刘刚原翔马志坤孔金玉李娜
申请(专利权)人:河南科技大学第一附属医院
类型:发明
国别省市:河南;41

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