本发明专利技术涉及逆转或降低食管癌放疗增敏剂、筛选方法及其用途。具体而言涉及对逆转或降低食管癌放疗抗性基因的基因沉默剂、沉默方法及其用途。本发明专利技术通过对选择的特定抗性基因的沉默，能够有效地实现放疗的增敏效果，进而能够更好地进行个体化治疗，为食管癌的治疗提供更有效的治疗方案。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术和免疫治疗领域，具体而言涉及逆转或降低食管癌放疗抗性的增敏剂、筛选方法及其用途。进一步地，涉及对食管癌放疗抗性基因的基因沉默剂、沉默方法及其用途。本专利技术通过对选择的特定抗性基因的沉默，能够有效地实现放疗的增敏效果，进而能够更好地进行个体化治疗，为食管癌的治疗提供更有效的治疗方案。
技术介绍
食管癌是常见的恶性肿瘤，在全世界是第六位癌症相关的死亡原因[EnzingerPC&Mayer RJ. Esophageal cancer. N Engl J Med 2003 ;349 :2241 2252]。已知放射治疗是食管癌的主要治疗手段之一，但局部失败率高达50% -55%，即使增加放疗或化疗剂量仍然不能改善局控率[Cooper J 等人，Radiation Therapy Oncology Group for the Chemoradiotherapy of locally advanced esophageal cancer Long-term follow-upof a prospective randomized trial (RT0G85-01). JAMA 1999 ;281 :16231627 ;MinskyB 等人，INT 0123 (Radiation Therapy Oncology Group 94-05)phase III trial ofcombinedmodality therapy for esophageal cancer :High_dose versus standard-doseradiation therapy. J Clin Oncol 2002 ;20 :11671174]。目前研究发现放疗局部失败除了与肿瘤乏氧、剂量限制性毒性降低照射量等因素有关外，与放射抵抗密切相关。可以说放射抵抗是放疗后局部复发的主要原因。体内食管癌瘤中某些基因的表达状态直接影响着癌细胞的放射抗性[K Fukuda等人，Differentialgene expression profiles of radioresistant oesophageal cancer cell linesestablished by continuous fractionated irradiation. British Journal of cancer，2004 ；91 (8) :1543-1550] o对局部失败率高达50% -55%的这部分患者人群，有必要寻找与食管癌的放疗抗性相关基因，并以之为靶点获得能够增敏放疗抗性基因的增敏剂，借助这种筛选抑制或者消除放疗抗性，进而为这部分食管癌患者提供个体化治疗，提高患者的生存率。
技术实现思路
为了实现上述专利技术目的，专利技术人进行了多方面的研究工作，先在抗性敏感基因搜索方面进行了大量工作。主要包括应用包含48000个探针的Illumine_6_V3人类全基因组芯片，对比调查了经多次照射产生放射抵抗性的食管癌细胞系KYSE-170R及其亲代细胞系KYSE-170的基因表达谱差异。由qRT-PCR和Western blot证实该基因确实存在差异表达。应用慢病毒介导的RNA干扰体系在体内外验证差异基因与放射抵抗的关系，并对该基因在食管癌患者病理组织中的表达情况进行回顾性分析。试验结果表明食管癌细胞系KYSE-170R及其亲代细胞系KYSE-170的基因在未照射、照射后8小时及照射后24小时分别有945，733和1232个表达差异基因。qRT-PCR结果提示相对于亲代细胞系KYSE-170，放射抵抗细胞系KYSE-170R在未照射、照射后8小时及照射后24小时AKR1C3分别有9. 39，5. 94和9. 20倍的表达上调。Western blot结果证实，在未照射的放射抵抗细胞系KYSE-170R中AKR1C3蛋白表达量显著高于亲代细胞系KYSE_170(P< O. 05)。应用慢病毒介导的RNA干扰体系沉默AKR1C3后，放射抵抗细胞系KYSE-170R的放射敏感性显著增强，应用AKR1C3过表达质粒转导亲代细胞系KYSE-170发现其放射抵抗性显著增强。机制探讨初步结果提示，AKR1C3沉默引起的放射敏感性增强，很可能与ROS晚聚集和放疗后48小时内G2期细胞阻滞有关。在对食管癌患者病理组织中的表达·情况进行回顾性分析中，专利技术人发现AKR1C3表达于食管癌细胞，正常食管粘膜细胞，间质细胞及小血管上皮中。正常食管粘膜细胞的表达量明显低于高分化食管鳞癌细胞；高分化食管鳞癌细胞表达量明显高于低分化食管鳞癌细胞。而且后续的研究表明，AKR1C3可能会为食管癌，尤其是食管高分化鳞癌，提供新的放射增敏药物作用靶点。总之，经过上述多方面努力，专利技术人终于找到了与食管癌抗性相关的基因-AKR1C3 (Homo sapiens aldo-keto reductase family 1，memberC3(3-alphahydroxysteroid dehydrogenase, type II) (AKR1C3)，经检索发现该序列的 Genbank 号为NM—003739，其全序列如下I gcccattgtt tttgtaatct ctgaggagaa gcagcagcaa acatttgcta gtcagacaag61 tgacagggaa tggattccaa acaccagtgt gtaaagctaa atgatggcca cttcatgcct121 gtattgggat ttggcaccta tgcacctcca gaggttccga gaagtaaagc tttggaggtc181 acaaaattag caatagaagc tgggttccgc catatagatt ctgctcattt atacaataat241 gaggagcagg ttggactggc catccgaagc aagattgcag atggcagtgt gaagagagaa301 gacatattct acacttcaaa gctttggtcc acttttcatc gaccagagtt ggtccgacca361 gccttggaaa actcactgaa gaaagctcaa ttggactatg ttgacctcta tcttattcat421 tctccaatgt ctctaaagcc aggtgaggaa ctttcaccaa cagatgaaaa tggaaaagta481 atatttgaca tagtggatct ctgtaccacc tgggaggcca tggagaagtg taaggatgca541 ggattggcca agtccattgg ggtgtcaaac ttcaaccgca ggcagctgga gatgatcctc601 aacaagccag gactcaagta caagcctgtc tgcaaccagg tagaatgtca tccgtatttc661 aaccggagta aattgctaga tttctgcaag tcgaaagata ttgttctggt tgcctatagt721 gctctgggat ctcaacga本文档来自技高网...
【技术保护点】
逆转或降低食管癌放疗抗性的增敏药物，其为AKR1C3基因表达抑制剂或沉默剂。
【技术特征摘要】
1.逆转或降低食管癌放疗抗性的增敏药物，其为AKR1C3基因表达抑制剂或沉默剂。2.权利要求I的增敏药物，其中还含有药学上可接受的佐剂。3.权利要求I的增敏药物，其中的食管癌是食管鳞癌。4.AKR1C3基因表达抑制剂或沉默剂在制备用于逆转或降低食管癌放疗抗性的增敏治疗的药物中的用途。5.食管癌放射抗性增敏剂的初步筛选方法，其包括 (1)提供高表达AKR1C3基因的宿主细胞； (2)提供候选药物； (3)使(I)的宿主细胞和(2)的候选药物在合适的条件下接触； (4)检测(3)中的经过候选药物作用的宿主细胞的AKR1C3基因的表达；和 (5)能够使AKR1C3基因表达下调或者消失的候选药物，判定为具有食管癌放射抗性增敏剂潜力的药物。6.食管癌放射抗性增敏剂的细胞水平筛选方法，其包括 (1)提供高表达AKR1C3基因的食管癌细胞； (2)提供候选药物； (3)使(I)的食管癌细胞和(2)的候选药物在合适的条件下接触； (4)检测(3)中的经过候选药物作用的食管癌细胞的AKR1C3基因的表达； (5)将使AKR1C3基因表达下调或者消失，同时保持食管癌细胞存活的候选药物判定为食管癌放射抗性增敏剂。7.权利要求6的方法，其中的食管癌细胞是KYSE-170R细胞系或者转化了AKR1C3表达载体的KYSE-17...
【专利技术属性】
技术研发人员：周德敏，高献书，熊伟，赵静，张礼和，
申请(专利权)人：北京大学，北京大学第一医院，
类型：发明
国别省市：
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