本发明专利技术公开了一氧化碳释放分子在制备抑制凝血活化疾病药物中的应用。通过体内动物试验和体外细胞实验发现，所述外源性一氧化碳能够明显降低脓毒症时凝血因子FIB、D-D的表达；同时降低血浆中血小板膜糖蛋白CD61、CD62p的表达，从而下调了血小板粘附和聚集功能，同时抑止脓毒症小鼠血小板HS1的磷酸化水平，最终抑制了脓毒症凝血系统的过度活化。采用所述的一氧化碳释放分子抑制脓毒症时凝血系统的过度活化疾病时，其浓度控制相对容易且正确，长期使用时追加方便，能够满足临床应用的需要。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术专利涉及ー氧化碳释放分子在凝血系统方面的新用途，具体的说，涉及一种早期应用ー氧化碳释放分子治疗脓毒症时凝血系统的过度活化的方法。
技术介绍
脓毒症是严重创伤、休克及感染后常见的并发症，即便在基础与临床医学研究及重症监护手段高度发展的现代，临床治疗仍然收效甚微，死亡率居高不下！统计表明，全世界超过10%的死亡患者与脓毒症密切相关。在脓毒症复杂的发病机制中，凝血系统紊乱是病死率増加的ー个重要原因。凝血系统的异常在脓毒症的发 生、发展过程中具有重要作用。脓毒症时由于细胞因子瀑布样释放，激活凝血系统，同时纤溶系统及生理性的抗凝系统受到不同程度的抑制，血液处于高凝状态，微血管内微血栓广泛形成，微循环障碍，进一步发展可导致脓毒性休克、MODS。脓毒症时凝血活化和炎症反应之间存在明显的交叉反应，脓毒症时机体的大量凝血因子被激活，凝血系统活化，使其功能紊乱，并促进炎症反应的进ー步发展，后者亦可引起前者的活化，两者相互影响，共同促进脓毒症的恶化。目前认为脓毒症早期以TNF-a增高、凝血和纤溶激活为特征。脓毒症时产生的多种促炎症因子如TNF-a、IL-1及IL-6等可引起并加重高凝。细胞因子增高后可见凝血酶生成的标志物和纤维蛋白原转变为纤维蛋白的标志物显著升高，提示凝血酶生成増加，凝血系统经细胞因子介导而活化。反之，凝血酶、因子Xa、纤维蛋白等凝血因子又可通过刺激单核细胞、内皮细胞释放TNF-a、IL-I及IL-6等促进炎症反应发生。因此，凝血活化与细胞因子形成相互促进的循环，在研究脓毒症的病理生理及治疗时，必须高度重视凝血系统紊乱问题和抗凝策略。血小板活化是凝血系统激活过程中的重要事件，在脓毒症的早期阶段，即可发生血小板激活和聚集。血小板在脓毒症所致的多器官功能障碍综合综中扮演了重要角色，在脓毒症的发生、发展和转归中具有重要作用。血小板活化包括3个方面黏附、聚集和释放，三者相互促进。研究表明，血小板參与脓毒症时血管的痉挛、血栓形成、栓塞的发生和缺血后组织的迟发性损害等各个环节。血小板膜糖蛋白在这些过程中起着极其重要的作用。主要的血小板膜糖蛋白GP II b/IIIa(即⑶41/⑶61)、⑶62p等介导了上述病理过程。造血系细胞特异蛋白-I (HSl)是血小板受刺激后活化过程中的一个关键信号分子，上述血小板重要的膜糖蛋白的活化信号均经HSl而得以传导。因此，研究ー种能抑制膜糖蛋白的表达，或者阻断HSl信号传导，进而抑制血小板的激活，弱化凝血系统的活化的方法对抑制脓毒症的发生发展具有重要作用。一氧化碳(CO)常温常压下是ー种双原子、小分子的气态物质，由于ー氧化碳可与机体内血红蛋白结合生成碳氧血红蛋白(ffico)，使得血液运输氧的能力发生障碍，高浓度时还可与还原性细胞色素氧化酶的两价铁结合，抑制组织呼吸，故CO在以往被认为是有毒气体，对CO的研究仅局限于它的生物学毒性。近年来，大量的研究证实ー氧化碳(CO)与一氧化氮(NO)相类似，也是ー种重要的气体细胞信使分子，在细胞功能和通讯的调节カー面发挥信号转导的重要作用。到1990年代初，Snyder等提出至少在ー种类型的神经细胞内，CO将不仅仅是副产物且作为CGMP的调节分子，它将和NO —样激活生物信号。Snyder等研究证明，cGMP在中枢神经系统的嗅觉信号传导中起了重要的作用，而这种作用可被HO的抑制剂阻断，从而提出了 CO的分子信号作用。既往常采用“吸入CO”作为外源性CO的来源，发现弊端较多，装置复杂，吸入浓度较难控制和維持，难以在实验需要时追加剂量，易导致高HbCO(—氧化碳血红蛋白)血症等。外源性一氧化碳释放分子(Carbon monoxide-releasing molecules,CORMs)是近年来新合成的一种ー氧化碳复合物，可以通过适当溶剂溶解后持续释放CO，发挥生理作用，在一定生理剂量时并不提高动物体内HbCO的浓度。该ー氧化碳复合物的制备方法和理化性能參数,在Motterlini R等所著文献(Curr. Pharm. 2003; 9:2525 - 39)中有详细的报道，该ー氧化碳复合物通常可用于制备缓释的ー氧化碳。我们的前期研究证明，外源性一氧化碳对脓毒血症时炎性介质 和细胞因子的释放具有有效的抑制作用，可有效保护细胞、維持器官功能。如能够将所述的ー氧化碳释放分子用于抑制脓毒症时凝血系统过度活化反应中，将为研究开发凝血系统紊乱问题和抗凝策略开辟新的途径。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供ー氧化碳释放分子在制备抑制凝血活化疾病药物中的应用，以满足临床应用的需要。将所述ー氧化碳释放分子溶解在溶剂中，然后将其置于细胞培养液或生物体内，以可以持续性释放CO，作为ー种外源性CO供体；通过体内动物试验和体外细胞实验发现，所述外源性一氧化碳能够明显降低脓毒症时凝血因子FIB、D-D的表达；同时降低血浆中血小板膜糖蛋白⑶61、⑶62p的表达，从而下调了血小板粘附和聚集功能，同时抑止脓毒症小鼠血小板HSl的磷酸化水平，最終抑制了脓毒症凝血系统的过度活化。因此，所述的外源性ー氧化碳释放分子C0RM-2，可以用于制备治疗脓毒症时凝血系统的过度活化疾病的药物；本研究即采用小鼠盲肠结扎和穿孔术(CLP)脓毒症模型，将所述的外源性ー氧化碳释放分子2 (C0RM-2)作为ー种抑制脓毒症时凝血系统过度活化的药物，由医师决定，进行早期干预，进行试验，发现ー氧化碳释放分子对脓毒症时凝血系统的调节作用。采用所述的ー氧化碳释放分子在抑制脓毒症时凝血系统的过度活化疾病吋，使用C0RM-2,剂量为8mg/kg ;使用方法如下5. 125mg C0RM-2溶于250 u I DMSO中，获得40mM的C0RM-2溶液，根据8. 0mg/kg的剂量，取上述母液8 加入152 U I生理盐水中，配置成160 u I C0RM-2溶液，在小鼠CLP术后立即尾静脉注射。采用所述的ー氧化碳释放分子抑制脓毒症时凝血系统的过度活化疾病时，其浓度控制相对容易且正确，长期使用时追加方便，能够满足临床应用的需要。附图说明图I为C0RM-2对CLP小鼠血浆中血小板膜糖蛋白⑶61水平的影响。图2为C0RM-2对CLP小鼠血浆中血小板膜糖蛋白⑶62p水平的影响。图3为C0RM-2对CLP小鼠血浆中血小板膜糖蛋白⑶41水平的影响。图4为C0RM-2对CLP小鼠血液中凝血因子FIB水平的影响。图5为C0RM-2对CLP小鼠血液中凝血因子D-D含量的影响。图6为C0RM-2对CLP小鼠血小板粘附功能的影响。图7为C0RM-2对CLP小鼠血小板聚集功能的影响。图8为C0RM-2对CLP小鼠血小板HSl蛋白磷酸化的影响。图9为C0RM-2对CLP小鼠不同时间血小板HSl蛋白 磷酸化的影响。图10为C0RM-2对人血小板凝血酶刺激后HSl蛋白磷酸化的影响。具体实施例方式实施例I外源性ー氧化碳释放分子(CO-RMs)对脓毒症时血小板膜糖蛋白以及血小板活化的抑制作用试验方法I CLP动物模型6-8周大小的C57BL/6小鼠，体重20±2g，均为雄性。予以2%异氟烷吸入麻醉小鼠，腹壁中线偏下方行1-1. 5cm切ロ，寻找到盲肠，在盲肠全长的1/2处运用3-0的线进行结扎，小心勿引起肠梗阻，勿破坏回肠动脉。运用20号针在盲本文档来自技高网...
【技术保护点】
一氧化碳释放分子在制备抑制凝血活化疾病药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙炳伟，孙艳，王旭，
申请(专利权)人：江苏大学附属医院，
类型：发明
国别省市：
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