用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法技术

本发明专利技术公开了一种用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法，该方法采用以硅胶表面共价键合多糖衍生物为填料的色谱柱，用双流动相，即流动相A和流动相B进行梯度洗脱，流动相A为二元流动相，流动相B为三元流动相，分离效果好，操作简便易行，试验结果证明本发明专利技术的色谱条件能较好地分离泊沙康唑及其手性异构体，更好地控制泊沙康唑原料药的质量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法。
技术介绍
泊沙康唑(posaconazole)是由美国schering-Plough公司研发公司研发的一种广谱三唑类抗真菌药物。用于难治性疾病或其他药物耐药所引起的真菌感染。本品比对照药物氟康唑和伊曲康唑，能更有效预防侵袭性曲霉菌感染并可降低侵袭性真菌感染相关的病死率。泊沙康唑含有4个手性中心，除泊沙康唑外，还有15个手性异构体。目前所用的药物多为低于50个原子组成的有机小分子，很大一部分也具有手性，他们的药理作用是通过与体内大分子之间严格手性匹配与分子识别实现的。含手性因素的的化学药物的异构体在人体内的药理活性、代谢过程及毒性存在显著的差异。药物分子必须与受体(起反应的物质)分子几何结构匹配，才能起到应有的药效，就如右手只能带右手套一样。因此，往往两种异构体中仅有一种是有效的，另一种无效甚至有害。例如，左西替利嗪是占抗过敏药最大市场份额的西替利嗪的旋光体，比西替利嗪具有更高的药效及更高的安全性；β-受体阻断剂普萘洛尔的两个对映异构体的体外活性相差98倍；L―多巴是治疗帕金森病的药物，右旋体会聚积在体内不会被体内的酶代谢，从而可能对人体的健康造成危害；又如沙利度胺的两个对映体中只有(R)―对映体具有缓解妊娠反应作用而(S)―对映体是一种强力致畸剂，在妊娠第1～2个月内服用会导致胎儿畸形。根据美国食品药品监督管理局(FDA)对具有手性中心药物的技术要求，需要对药物的手性异构体进行控制。泊沙康唑有15个手性异构体，但目前却没有与分离和控制泊沙康唑手性异构体的文献报道。专利技术内容泊沙康唑有15个手性异构体，但在合成过程中可能生成的主要有9个，其结构如下：为保证临床用药的安全性，严格控制无效或具有副作用的手性异构体的限度，同时弥补现有技术缺乏分离检测泊沙康唑手性异构体技术的不足，本专利技术的专利技术人开发了一种用高效液相色谱法分离检测泊沙康唑手性异构体的方法，对泊沙康唑的手性异构体进行分析，从而保证药物的安全性、质量可控性。在研究的过程中，本专利技术的专利技术人发现，因为泊沙康唑的手性异构体与泊沙康唑理化性质类似，尽管采用手性柱和常规的流动相也很难将各成份在同一色谱条件下较好的实现基线分离。当两个杂质峰完全重叠时，可以不影响总杂质含量的检测，但如果两个杂质部分交叉无法实现基线分离，则检测结果不准确。经过大量实验和研究，本专利技术的专利技术人最终获得一种用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法，能够实现泊沙康唑及其9个手性异构体的有效分离，还能够准确测定泊沙康唑的含量及其手性异构体的限度，专属性强，灵敏度高；该操作方法简单，具有简便、快速的优点。所述方法包括如下步骤：1)配置泊沙康唑手性异构体混合对照品溶液和供试品溶液；2)用高效液相色谱检测供试品溶液和手性异构体混合对照品溶液，色谱条件：使用以硅胶表面共价键合多糖衍生物为填料的色谱柱；采用双流动相，即流动相A和流动相B进行梯度洗脱，所述流动相A和B均为C2～C4卤代烷烃和C1～C4醇类的混合溶液，所述卤代是指被至少一个选自氯、溴和碘的元素取代；3)根据供试品溶液的色谱图和手性异构体混合对照品溶液的色谱图，确定供试品溶液中手性异构体的限度。本专利技术的检测方法采用双流动相，其中流动相A和B均至少为二元流动相，作为优选，流动相A为二元流动相，流动相B为三元流动相。流动相A和B均为C2～C4卤代烷烃和C1～C4醇类的混合溶液，所述烷烃包括支链和直链烷烃，可以是一种烷烃也可以是多种烷烃的混合，所述醇可以是一种醇也可以是多种醇的混合。本专利技术方法采用以硅胶表面共价键合多糖衍生物为填料的色谱柱，其分离效果符合分析检测的要求，克服了现有技术无法在同一色谱条件下同时分离分析泊沙康唑的9个手性异构体的难题。作为优选，本专利技术用于流动相A和B的C2～C4卤代烷烃选自于二氯甲烷、三氯甲烷中的一种或2种的混合，优选为二氯甲烷。作为优选，本专利技术用于流动相A和B的C1～C4醇类选自于甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇中的一种或多种的组合。本专利技术所述的多种在无特殊说明的情况下包括两种或两种以上，优选为乙醇或乙醇和异丙醇的组合。在本专利技术的一些实施例中，所述流动相A为二氯甲烷-异丙醇混合液，所述流动相B为异丙醇-二氯甲烷-乙醇混合液。作为优选，所述流动相A中二氯甲烷-异丙醇的体积比为(2-6)：(8-4)，所述流动相B中异丙醇-二氯甲烷-乙醇的体积比为(5-7)：(4-0.5)：(1-2.5)。作为优选，所述流动相A中二氯甲烷-异丙醇的体积比为(48～52)：(48～52)，作为更优的选择，流动相A中二氯甲烷-异丙醇的体积比为1：1。作为优选，所述流动相B为体积比为(55-65)：(40-25)：(5-10)的异丙醇-二氯甲烷-乙醇混合液，优选所述流动相B为体积比为6：3：1的异丙醇-二氯甲烷-乙醇混合液。在本专利技术的一些实施例中，步骤2)所述梯度洗脱的条件为：0-8min，流动相A相所占的体积比为：(12％～8％)→0％，流动相B相所占的体积比为：(88％～92％)→100％；8-50min，流动相A相所占的体积比为：0％，流动相B相所占的体积比为：100％；50-55min，流动相A相所占的体积比为：0％→100％，流动相B相所占的体积比为：100％→0％；55-80min，流动相A相所占的体积比为：100％，流动相B相所占的体积比为：0％。作为优选，高效色谱液相系统进行检测的进样体积10～20μL，流动相流速为0.9～1.1ml/min，色谱柱的柱温为31～35℃，理论塔板数按泊沙康唑色谱峰计算不低于1000。作为优选，高效色谱液相系统的检测器为紫外检测器，检测波长为260nm。作为优选，上述步骤1)每1ml所述手性异构体混合对照品溶液含2ug的单个异构体，每1ml所述供试品溶液含2mg泊沙康唑样品。根据本专利技术提供的高效液相色谱条件，本领域技术人员可以选择适宜的计算方法计算泊沙康唑含量和其手性异构体的限度，所述计算方法包括但不限于内标法、外标法。本专利技术的一些实施例采用杂质对照品外标法确定手性异构体的限度，具体方法如下：1)配制流动相：分别配制流动相A和流动相B，以体积比1:1的二氯甲烷-异丙醇混合物为流动相A，以体积比6:3:1异丙醇-二氯甲烷-乙醇混合物为流动相B；2)单个异构体对照品储备液的制备：分别取前述泊沙康唑的9个手性异构体，精密称定，加乙腈-异丙醇(75：:25)溶解，制成每1ml约含0.10mg的对照品储备液。3)异构体混合对照品溶液的制备：取用步骤2)单个异构体对照品储备液各0.2ml，置10ml容量瓶中用异丙醇-二氯甲烷-乙醇(6:3:1)溶解，制成每1ml约含2ug的对照品储备液。4)供试品溶液的制备：取泊沙康唑，精密称定，加异丙醇-二氯甲烷-乙醇(6:3:1)溶解，制成每1ml约含2mg的样品溶液。5)分别取步骤4)所述供试品溶液与步骤3)异构体混合对照品溶液10μL注入分离检测系统中，完成泊沙康唑异构体的检测。其中所述高效液相色谱条件如下：使用以硅胶表面共价键合多糖衍生物为填料的色谱柱；以流动相A、B进行梯度洗脱。用高效色谱液相系统进行检测进样体积10μL；流速0.9～1.1ml/min；柱温31～35本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法，包括如下步骤：1)配置泊沙康唑手性异构体混合对照品溶液和供试品溶液；2)用高效液相色谱检测供试品溶液和手性异构体混合对照品溶液，色谱条件：使用以硅胶表面共价键合多糖衍生物为填料的色谱柱；采用双流动相，即流动相A和流动相B进行梯度洗脱，所述流动相A和B均为C2～C4卤代烷烃和C1～C4醇类的混合溶液，所述卤代是指被至少一个选自氯、溴和碘的元素取代；3)根据供试品溶液的色谱图和手性异构体混合对照品溶液的色谱图，确定供试品溶液中手性异构体的限度。

【技术特征摘要】
1.一种用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法，包括如下步骤：1)配置泊沙康唑手性异构体混合对照品溶液和供试品溶液；2)用高效液相色谱检测供试品溶液和手性异构体混合对照品溶液，色谱条件：使用以硅胶表面共价键合多糖衍生物为填料的色谱柱；采用双流动相，即流动相A和流动相B进行梯度洗脱，所述流动相A和B均为C2～C4卤代烷烃和C1～C4醇类的混合溶液，所述卤代是指被至少一个选自氯、溴和碘的元素取代；3)根据供试品溶液的色谱图和手性异构体混合对照品溶液的色谱图，确定供试品溶液中手性异构体的限度。2.根据权利要求1所述的用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法，其特征在于，流动相A为二元流动相，流动相B为三元流动相。3.根据权利要求1所述的用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法，其特征在于，所述C2～C4卤代烷烃选自于二氯甲烷、三氯甲烷中的任一种或两种的混合，优选为二氯甲烷。4.根据权利要求1所述的用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法，其特征在于，所述醇类选自于甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇中的一种或多种的组合，优选为乙醇或乙醇和异丙醇的组合。5.根据权利要求1所述的用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法，其特征在于，所述流动相A为二氯甲烷-异丙醇混合液，所述流动相B为异丙醇-二氯甲烷-乙醇混合液。6.根据权利要求5所述的用高效液相色谱检测泊沙康唑手性异构体的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李敏，欧世荣，马欢，
申请(专利权)人：成都欣捷高新技术开发股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51