一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法技术

本发明专利技术提供了一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，包括如下步骤：二氢杨梅素样品溶解在流动相中，在多糖衍生物手性固定相进行液相色谱分离分析；所述流动相为正己烷和低级醇的混合溶液；所述多糖衍生物手性固定相为涂覆三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉、三（（S）-（ɑ）-苯乙基氨基甲酰化）直链淀粉、三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）纤维素或三（4-甲基苯基氨基甲酰化）纤维素手性固定相中的一种。在本发明专利技术提供的手性分离分析方法中，二氢杨梅素对映体的分离度最大为1.95，选择因子最大为1.36。

【技术实现步骤摘要】
一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法
本专利技术属于手性色谱分离
，更具体地，涉及一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法。
技术介绍
二氢杨梅素(Dihydromyricetin，见式I(a))是一种黄酮类化合物，其化学名为(2R,3R)-3,5,7-三羟基-2-(3,4,5-三羟基苯基)苯并二氢吡喃-4-酮。1940年Kotake和Kubota等首先从楝叶玉葡萄(A.Meliaefolia)的叶中分离得到。二氢杨梅素作为一种不可多得的天然活性物质，具有抗炎抗过敏、抗氧化[现代食品科技，2014，(10)：36-41；食品科学，2014，(20)：69-71]、止咳祛痰[中国民族医药杂志，1998，(3)：42-44]、镇痛[福建医学杂学，1995，(4)：39-40]、抑菌[食品科技，2008，(4)：140-143]、降血脂[茶叶科学，2007，(3)：221-225]、抗脂质过氧化[中国中药杂志，2003，1188-1191]、抗肿瘤[中华中医药学刊，2010，(9)：1914-1915]、保肝护肝[食品科学，2008，(11)：622-625]等生理活性，具有很高的开发利用价值和应用前景。二氢杨梅素大量存在于蛇葡萄属植物，如显齿蛇葡萄、粤蛇葡萄、羽叶蛇葡萄、东北蛇葡萄、光叶蛇葡萄等植物中，特别是在显齿蛇葡萄植物的幼嫩茎叶中其含量可达30％以上。目前，主要通过热水提取后重结晶纯化[现代食品科技，2009，(10)：1124-1128；食品科技，2011，(6)：230-233；现代食品科技，2009，(8)：907-910]、乙醇浸泡辅助法[广东化工，2006，(10)：5-9]、微波萃取[广州化工，2005，(2)：12-15；天然产物研究与开发，2005，(5)：636-638]、低温-超声提取[中国专利技术专利申请201310391546.X]、微波逆流提取及膜提取[中国专利技术专利申请201210229991.1]、以水为萃取剂的逆流提取[食品科技，2004，(11)：192-194]、超临界流体萃取法[沈露，天津科技大学硕士论文，2006]等方法从蛇葡萄属植物中提取和纯化二氢杨梅素。天然的二氢杨梅素具有确定的绝对构型，文献中常采用反相液相色谱法(即C18柱或ODS柱，以乙腈/水或甲醇-水-磷酸为流动相)对二氢杨梅素产品进行纯度和含量检测，不对绝对构型做进一步确认[ProcessBiochemistry，2006，41(3)：567-570；JournalofChromatographyA，2002，973(1)：217-220；湖南农业大学学报，2002，(1)：32-34；中成药，2004，(3)：210-212；广东农业科学，2013，(19)：90-93]。然而，有文献报道在沸水提取、重结晶纯化时，天然二氢杨梅素发生消旋化，(2R,3R)-二氢杨梅素和(2S,3S)-二氢杨梅素(式I(b))同时析出，形成外消旋产物[ActaCrystallographic，2007，E63(11)：o4384和中国专利技术专利申请201510062355.8]。在中国专利技术专利申请201510062355.8，专利技术人首次开发以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、在甲醇-磷酸的流动相中添加手性添加剂即β-环糊精的RP-HPLC拆分法对二氢杨梅素进行光学纯度检测，结果表明多种市售产品的光学纯度(e.e％)为0。由于二氢杨梅素分子中含有多个羟基和芳香环，易与手性选择剂和硅胶产生较强的氢键和π-π等相互作用，难被流动相洗脱和拆分，迄今未见直接采用手性色谱柱对二氢杨梅素进行手性分析分离的研究报道。另一方面，手性化合物的立体构型可能对其生理活性、毒性和临床疗效等产生极大影响。因此，在手性色谱柱上，开发一种二氢杨梅素对映体的手性分离方法显得尤为重要。
技术实现思路
根据目前二氢杨梅素对映体手性拆分技术中的不足，本专利技术提供了一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法。本专利技术的技术目的通过以下技术方案实现：本专利技术提供一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，包括如下步骤：二氢杨梅素样品溶解在流动相中，采用多糖衍生物手性固定相进行液相色谱分析分离；所述流动相为正己烷和低级醇的混合溶液；所述多糖衍生物手性固定相为涂覆三(3，5-二甲基苯氨基甲酰化)直链淀粉、三((S)-(ɑ)-苯乙基氨基甲酰化)直链淀粉、三(3，5-二甲基苯氨基甲酰化)纤维素或三(4-甲基苯基氨基甲酰化)纤维素手性固定相中的一种。专利技术人发现，以正己烷和低级醇作为流动相，在上述多糖衍生物手性固定相上，能够很好地实现二氢杨梅素对映体的手性色谱分离。更优选地，所述多糖衍生物手性固定相为涂覆三(3，5-二甲基苯氨基甲酰化)直链淀粉手性固定相。优选地，所述流动相中正己烷和低级醇的体积比为60～80：40～20。优选地，所述流动相中正己烷和低级醇的体积比为80：20。优选地，所述低级醇为乙醇或异丙醇。更优选地，所述低级醇为乙醇。优选地，所述流动相中还含有不大于0.5％(体积百分数)的三氟乙酸。专利技术人发现，在流动相中加入少量的三氟乙酸，可以加快二氢杨梅素的洗脱速度，提高选择因子和分离度。更优选地，所述流动相中含有0.1％(体积百分数)的三氟乙酸。优选地，所述二氢杨梅素样品的浓度不大于1.0mgmL-1。更优选地，所述二氢杨梅素样品的浓度为0.5mg·mL-1。优选地，所述的温度为不大于30℃。优选地，所述色谱条件中流动相的流速为1.0mL·min-1，进样体积为10μL，检测波长为290nm，色谱柱温度为25℃。更优选地，一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，包括如下步骤：将二氢杨梅素样品溶解在流动相中，采用涂覆三(3，5-二甲基苯氨基甲酰化)直链淀粉手性固定相进行手性分离；所述流动相由正己烷、乙醇和三氟乙酸组成，其中，正己烷与乙醇的体积比为80：20，并添加总体积0.1％的三氟乙酸。在上述色谱条件下，二氢杨梅素对映体的分离度为1.95，达到基线分离。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：在本专利技术公开的涂覆型手性固定相材料上，结合所述的流动相，二氢杨梅素对映体实现了良好的手性分离，色谱峰峰型、峰展宽和拖尾等得到改善。在优选的条件下，二氢杨梅素对映体间的分离度达到1.95，选择因子为1.36。与文献方法相比，本专利技术开发的手性分离法需要在正相流动相条件下完成，分析分离速度快，可对二氢杨梅素产品进行快速分析检测。附图说明图1为本专利技术实施例1在涂覆三(3，5-二甲基苯氨基甲酰化)直链淀粉手性固定相、25℃下，流动相为正己烷/乙醇/三氟乙酸(80：20：0.1，v/v/v)、紫外检测器(波长为290nm)的条件下得到的二氢杨梅素样品的HPLC谱图。图2为本专利技术实施例2在涂覆三(3，5-二甲基苯氨基甲酰化)直链淀粉手性固定相、25℃下，流动相为正己烷/乙醇/三氟乙酸(80：20：0.1，v/v/v)、旋光检测器的条件下得到的二氢杨梅素样品的色谱图。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术进行具体描述，有必要在此指出的是本实施例只用于对本专利技术进行进一步说明，但不能理解为对本专利技术保护范围的限制。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于，包括如下步骤：将二氢杨梅素样品溶于流动相中，采用多糖衍生物手性固定相进行液相色谱分离分析；所述流动相为正己烷和低级醇的混合溶液；所述多糖衍生物手性固定相为涂覆三（3，5‑二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉、三（（S）‑（ɑ）‑苯乙基氨基甲酰化）直链淀粉、三（3，5‑二甲基苯氨基甲酰化）纤维素或三（4‑甲基苯基氨基甲酰化）纤维素手性固定相中的一种。

【技术特征摘要】
1.一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于，包括如下步骤：将二氢杨梅素样品溶于流动相中，采用多糖衍生物手性固定相进行液相色谱分离分析；所述流动相为正己烷和低级醇的混合溶液；所述多糖衍生物手性固定相为涂覆三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉、三（（S）-（ɑ）-苯乙基氨基甲酰化）直链淀粉、三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）纤维素或三（4-甲基苯基氨基甲酰化）纤维素手性固定相中的一种；所述流动相中正己烷和低级醇的体积比为60~80：40~20。2.根据权利要求1所述的二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于，所述流动相中正己烷和低级醇的体积比为80：20。3.根据权利要求1所述的二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于，所述低级醇为乙醇或异丙醇。4.一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，其特征在于，包括如下步骤：将二氢杨梅素样品溶于流动相中，采用多糖衍生物手性固定相进行液相色谱分离分析；所述流动相为正己烷、低级醇和三氟乙酸的混合溶液；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：章伟光，李丽群，范军，
申请(专利权)人：广东研捷医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44