一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法技术

本发明专利技术涉及一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法，所述色谱分离方法包括如下步骤：将来那度胺样品溶于低级醇中，采用超临界流体色谱法在手性固定相上进行手性分析分离；所述流动相为超临界二氧化碳和低级醇的混合物，所述低级醇为甲醇或乙醇；所述流动相中超临界二氧化碳和低级醇的体积比为60~75:40~25；所述手性固定相为硅胶表面涂覆或键合三（3，5‑二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉手性固定相、硅胶表面键合4‑氯苯氨基甲酰化‑β‑环糊精手性固定相或硅胶表面键合3，5‑二甲基苯氨基甲酰化‑β‑环糊精手性固定相中的一种。本发明专利技术提供的超临界流体色谱分离方法很好地实现来那度胺对映异构体的手性色谱分离。在优选条件下，来那度胺对映异构体的分离度为5.05。

A method of supercritical fluid chromatographic separation of enantiomers from amidodiamine

The invention relates to a lenalidomide supercritical fluid chromatographic enantiomer separation method, the chromatographic separation method comprises the following steps: the future of lenalidomide was dissolved in lower alcohol, using supercritical fluid chromatography on chiral stationary phase for chiral separation and analysis; the mobile phase was a mixture of supercritical carbon dioxide and lower alcohol, the lower alcohol for methanol or ethanol; the mobile phase in supercritical carbon dioxide and lower alcohol volume ratio is 60~75:40~25; the chiral stationary phase is coated with silica surface or key three (3, 5 two methyl benzene carbamoylation) amylose chiral stationary phase, the surface of silica gel bonded 4 chlorobenzene carbamoylation beta cyclodextrin chiral stationary phase or silica gel bonded to the surface of the 3, a 5 two methyl benzene carbamoylation beta cyclodextrin chiral stationary phase. The supercritical fluid chromatography separation method provided by the present invention is very good for the chiral separation of the amido enantiomer. Under the optimum conditions, the degree of separation of amido enantiomers is 5.05.

【技术实现步骤摘要】
一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法
本专利技术属于手性色谱分离
，更具体地，涉及一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法。
技术介绍
超临界流体色谱(SFC)是采用超临界流体为流动相，以固体吸附剂或键合到载体上的高聚物为固定相的一种分离技术[JournalofChromatographyA，2016，1467:33-55]。与HPLC相比，SFC分析分离具有速度较快、分析时间短，分离效率高等的显著优势；同时，样品在超临界流体中的溶解度显著增大，有机溶剂消耗大幅降低，超临界流体色谱制备技术被视为一种绿色制备工艺，在拆分手性药物领域引起研究者的极大关注[JournalofSeparationScience，2014，37:1411-1418；AnalyticalChemistry，2006，78:3835-3838]。来那度胺(Lenalidomide，商品名Revlimid，见式1)，化学名：3-(4-氨基-1,3-二氢-1-氧代-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮，由美国Celgene公司研制生产，2005年12月在美国获FDA批准上市。研究表明，来那度胺具有比沙利度胺更强的抑制血管生成和免疫调节作用，药效高于100倍，同时神经毒性和不良反应大幅减小，特别是不会引起婴儿出生缺陷，是抗血管增生和抗肿瘤性质的新型免疫调节剂，近年来成为医药领域的超级重磅炸弹式药物。式（I）目前，市场销售的来那度胺药品为外消旋混合物[中国新药杂志，2011，20:75-78]。研究者主要采用高效液相色谱法（HPLC）对来那度胺原料药和制剂进行纯度分析、杂质检测以及开展药动力学研究[JournalofLiquidChromatographicRelatedTechnology，2010，33：654-679；现代生物医学进展，2014，14(20):3810-3814；TherapeuticDrugMonitoring，2008，30(5)：620-627；中国专利技术专利申请201410225648.X；中国专利技术专利申请201210225648.X；国际专利技术专利WO2011/064574]；另报道采用核磁共振波谱法以马来酸为内标测定来那度胺含量的方法[中南药学，2017，15(2)，214-217]。然而，对来那度胺进行手性分析分离的研究相对较少。ChenNH等在AstecChirobioticV色谱柱上采用HPLC串联质谱法以13C5-CC-5013戊二酰亚胺为内标分别对人的血浆、尿液和精液等样品中S-来那度胺和R-来那度胺进行定量测定[TheJournalofClinicalPharmacology，2007，47(12):1466-1475；TheJournalofClinicalPharmacology，2010，50(7):767-774]；N.Z.Alzoman在填充涂覆(3-氯-4-甲基苯氨基甲酰化)纤维素手性固定相的手性柱上，以甲醇-醋酸-三乙胺为流动相、奥硝唑为内标的条件下对来那度胺进行手性定量分析，研究了来那度胺对映异构体在光照、加热、酸、碱和氧化剂等条件下稳定性[JournalofChromatographicScience，2016，54(5):730-735]。在手性色谱分离领域，SFC在分离速度、分离效率、有机溶剂消耗等方面比HPLC具有更为显著的优势。目前未见采用超临界流体色谱法对来那度胺进行手性分离分析的研究报道。因此，开发一种来那度胺对映异构体的超临界流体色谱分离分析方法对于对映体手性分离、药理活性和毒性等相关研究具有积极意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于弥补现有技术中采用超临界流体色谱法对来那度胺对映异构体进行手性色谱分析分离的研究空白，提供一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法。本专利技术将超临界二氧化碳流体和低级醇的混合物作为流动相，搭配合适的手性固定相，可实现对来那度胺对映异构体的手性色谱分离分析。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法，包括如下步骤：将来那度胺样品溶于低级醇中，采用超临界流体色谱法在手性固定相上进行手性色谱分析分离；所述流动相为超临界二氧化碳和低级醇的混合物，所述低级醇为甲醇或乙醇；所述流动相中超临界二氧化碳和低级醇的体积比为60~75:40~25；所述手性固定相为硅胶表面涂覆或键合三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉手性固定相、硅胶表面键合4-氯苯氨基甲酰化β-环糊精手性固定相或硅胶表面键合3，5-二甲基苯氨基甲酰化-β-环糊精手性固定相中的一种。专利技术人发现，以超临界二氧化碳和低级醇的混合物作为流动相，在硅胶表面涂覆或键合三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉手性固定相，或硅胶表面键合4-氯苯氨基甲酰化-β-环糊精手性固定相，或硅胶表面键合3，5-二甲基苯氨基甲酰化-β-环糊精手性固定相，通过超临界流体色谱法，能够很好地实现来那度胺对映异构体的手性色谱分离。优选地，所述手性固定相为硅胶表面涂覆或键合三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉手性固定相或硅胶表面键合4-氯苯氨基甲酰化-β-环糊精手性固定相中的一种。优选地，所述流动相中超临界二氧化碳和低级醇的体积比为60~65:35~40。更为优选地，所述流动相中超临界二氧化碳和低级醇的体积比为60:40。优选地，所述低级醇为甲醇。优选地，所述来那度胺样品溶于低级醇后，其浓度不大于1.0mg·mL-1。优选地，所述来那度胺样品溶于低级醇后，其浓度为0.5mg·mL-1。优选地，色谱柱温度不大于55℃。更为优选地，所述色谱柱温度为35℃。优选地，所述色谱法中流动相的流速为2.5mL·min-1，进样体积为10μL，紫外检测波长为220nm，背压13.79MPa。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术首次提供了一种超临界流体色谱分离方法对来那度胺对映异构体进行手性色谱分离分析。本专利技术提供的超临界流体色谱分离方法，选用超临界二氧化碳和低级醇的混合物为流动相，在硅胶表面涂覆或键合三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉作为手性固定相，或硅胶表面键合4-氯苯氨基甲酰化-β-环糊精作为手性固定相，或硅胶表面键合3，5-二甲基苯氨基甲酰化-β-环糊精作为手性固定相，可实现对来那度胺对映异构体的手性分离，分离时间短，分离效果好，在手性定量分析和制备分离方面具有广阔应用的前景。在优选条件下，来那度胺对映异构体的分离度达到5.05，选择因子为2.94。附图说明图1为本专利技术实施例1得到的来那度胺样品的SFC谱图；图2为本专利技术实施例1和5得到的来那度胺样品的SFC谱图；图3为本专利技术实施例1、6~8得到的来那度胺样品的SFC谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的描述。这些实施例仅是对本专利技术的典型描述，但本专利技术不限于此。下述实施例中所用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的原料，试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。实施例1~12来那度胺对映异构体的超临界流体色谱分离方法实施例1~12的超临界流体色谱分离方法中，选用的色谱仪为WatersAcquity超高效合相色谱系统（UltraPerformance本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法，其特征在于，包括如下步骤：将来那度胺样品溶于低级醇中，采用超临界流体色谱法在手性固定相上进行手性分析分离；所述流动相为超临界二氧化碳和低级醇的混合物，所述低级醇为甲醇或乙醇；所述流动相中超临界二氧化碳和低级醇的体积比为60~75:40~25；所述手性固定相为硅胶表面涂覆或键合三（3，5‑二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉手性固定相、硅胶表面键合4‑氯苯氨基甲酰化‑β‑环糊精手性固定相或硅胶表面键合3，5‑二甲基苯氨基甲酰化‑β‑环糊精手性固定相中的一种。

【技术特征摘要】
1.一种来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法，其特征在于，包括如下步骤：将来那度胺样品溶于低级醇中，采用超临界流体色谱法在手性固定相上进行手性分析分离；所述流动相为超临界二氧化碳和低级醇的混合物，所述低级醇为甲醇或乙醇；所述流动相中超临界二氧化碳和低级醇的体积比为60~75:40~25；所述手性固定相为硅胶表面涂覆或键合三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉手性固定相、硅胶表面键合4-氯苯氨基甲酰化-β-环糊精手性固定相或硅胶表面键合3，5-二甲基苯氨基甲酰化-β-环糊精手性固定相中的一种。2.根据权利要求1所述来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法，其特征在于，所述手性固定相为硅胶表面涂覆或键合三（3，5-二甲基苯氨基甲酰化）直链淀粉手性固定相或硅胶表面键合4-氯苯氨基甲酰化-β-环糊精手性固定相中的一种。3.根据权利要求1所述来那度胺对映异构体超临界流体色谱分离方法，其特征在于，所述流动相中超临界二氧化碳和低级醇的体积比为60~65:35~40。4.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：章伟光，严逸伦，范军，赖烨才，阮丽君，
申请(专利权)人：广东研捷医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44