一种分离和测定阿利维A酸与异构体的方法技术

一种高效液相色谱法分离测定阿利维A酸及其5种异构体的方法，色谱柱以十八烷键合硅胶为填料，以酸的甲醇溶液和醚类溶剂的混合液为流动相。本方法可以同时对阿利维A酸及其5种异构体中的任一种或多种异构体进行分离检测。与现有技术相比，阿利维A酸与各异构体分离均较好，并提高了分离检测效率。本方法适用于含阿利维A酸及其异构体的各种制剂、各种生物样品、各种化妆品的检测和质量控制。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术属于分析化学领域，涉及一种分离阿利维A酸及异构体的方法；本方法还涉及测定化妆品中添加的维A酸类及其异构体或相同结构物质的方法。
技术介绍
：阿利维A酸是一种内源性维甲酸，现用于局部外用强效糖皮质激素无效的慢性手部湿疹患者，也用于治疗皮肤卡波济肉瘤。阿利维A酸很容易与维A酸等其他异构体发生异构化而互相转换，在合成和放置过程中均可能转化为其他异构体：现有文献主要是维A酸、异维A酸的测定方法，但其维A酸与阿利维A酸的分离度达不到1.5，且阿利维A酸的保留时间达到30min以上，对分析效果和效率都不能满足要求。本专利技术人对比维A酸、异维A酸后，发现现有技术中有关异维A酸的有关物质测定方法均不能很好分离阿利维A酸与维A酸。见如下：表1现有技术异维A酸测定方法目前，维A酸类化合物不仅被应用于多种皮肤疾病以及癌症预防和治疗，也屡有发生不良企业或商家在化妆品中添加维A酸类药物的情况。因此，研究将阿利维A酸与其异构体分离，并进行定量检测的方法很有现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能够用于阿利维A酸及其5种异构体的有效分离和测定的高效液相色谱方法，并提高分离检测的效率。本专利技术的技术方案为：一种高效液相色谱法分离测定阿利维A酸及其5种异构体的方法，为反相液相色谱法,色谱柱填料为十八烷基或八烷基键合硅胶，用含甲醇和酸的混合液的流动相洗脱后采用紫外检测器进行检测，其特征是：流动相中还含有叔丁基甲醚，含量占流动相总体积的15％-35％。所述含甲醇和酸的混合液的体积比是：酸:水:甲醇＝0.2～2:30～70:70～30；所述酸选自磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸中的一种或多种，优选为乙酸。优选十八烷基键合硅胶颗粒粒径为3.5μm，柱长优选为250mm。其它分析条件：色谱柱适用的柱温范围为20-40℃，优选为30℃。流动相的流速为0.2-2.0ml/min，优选为0.5-1.5ml/min，更优选为1.0ml/min。紫外检测器的检测波长为350nm，检测器型号不限，如可使用DAD或VWD检测器。本专利技术一个具体实施方式中，色谱柱为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱(ThermoHypersil250×4.6mm,5μm)。叔丁基甲醚：甲醇：1％冰乙酸＝15：60：25(v/v/v)；操作方法为：取阿利维A酸、异构体1、异构体2、异构体3、异构体4、异构体5对照品各适量，用甲醇溶解，配制成每1ml含阿利维A酸200μg、异构体1、异构体2、异构体3、异构体4、异构体5各2μg的系统适用性溶液。注入液相色谱仪，按本专利技术色谱条件(色谱柱填料为十八烷基键合硅胶，柱长为250mm，检测波长为350nm，以叔丁基甲醚：甲醇：1％冰乙酸＝15：60：25(v/v/v))进行洗脱，流动相的流速为1.0ml/min，色谱柱柱温箱温度为30℃，进样体积为20μl进行测定。本专利技术方法适用于阿利维A酸及5种异构体的分离和测定，可用于单独检测某一种异构体，也可同时分离和检测这5种异构体。可用于阿利维A酸原料药及阿利维A酸软胶囊、阿利维A酸乳膏、阿利维A酸凝胶、各种化妆品中阿利维A酸及其异构体的检测和质量控制，还可用于检测服用阿利维A酸者体内的生物代谢物。实例1图1中的阿利维A酸与维A酸分离达到2.67，阿利维A酸理论塔板数12067，阿利维A酸保留时间为8.831min，保留时间8.831min的峰纯度为0.999,保留时间8.831min的峰对称因子为1.02；而对比例例1图2中阿利维A酸与维A酸分离明显无法分开，理论塔板数5678，阿利维A酸保留时间为39.856min，保留时间为39.856min的峰纯度为0.825，保留时间8.831min的峰对称因子为1.38；通过对比实例1与对比例1，得出本专利技术的有以下有益处效果。本专利技术的有益效果在于：1、阿利维A酸与异构体分离较好，专属性强。现有技术方法，对比例1中，其他异构体之间都能很好分离，但阿利维A酸与维A酸分离度达不到分离要求，本专利技术的方法实施例1中，不但其他异构体之间都能很好分离，而且阿利维A酸与维A酸分离达到2.67；现有技术方法对比例1中，阿利维A酸的理论塔板数5678，本专利技术的方法实施例1中，阿利维A酸的理论塔板数为12067；现有技术方法对比例1中，阿利维A酸峰的的峰对称因子为1.38，峰纯度为0.825；本专利技术的方法实施例1中，阿利维A酸峰的的峰对称因子为1.02，峰纯度为0.999。对比例和实施例，各异构体出峰顺序一致，现有技术不能对阿利维A酸与维A酸分离，而本专利技术方法能将阿利维A酸与维A酸完全分开，在进行分离阿利维A酸与维A酸时专属性更强。2、用时短，提高了效率。现有技术方法，对比例1中，各异构体均比本专利技术的实施例的保留强，阿利维A酸和维A酸保留时间为39.856min，本专利技术实施例1中的方法阿利维A酸和维A酸保留时间分别为8.831min为9.995min；本专利技术比现有技术的分离效率高。3、结果更准确。本专利技术由于分离的专属性更高后，进行含量测定时，就不会将阿利维A酸和维A酸一起作为阿利维A酸或维A酸的进行含量和有关物质的计算，故比现有技术方法更准确。注：以上所述现有技术，指“EP7.5版异维A酸原料药质量标准”中有关测定异维A酸及其制剂的标准方法。并将色谱柱的原色谱柱柱长150mm换为分离更好的长色谱柱250mm。表2本专利技术方法与现有技术方法对比注：各对比例采用现有技术方法测定，具体指“EP7.5版异维A酸原料药质量标准”中规定的方法，并将标准规定的原色谱柱柱长150mm换为分离更好的长色谱柱250mm。各实施例采用本专利技术的方法检测。附图说明图1为采用本专利技术的方法检测阿利维A酸混合异构体的色谱图，各峰从左至右，依次为：异构体4、异构体5、异构体2、异构体3、阿利维A酸、异构体1；图2为采用EP7.5异维A酸方法测定阿利维A酸混合异构体的色谱图，各峰从左至右，依次为：异构体4、异构体5、异构体2、异构体3、阿利维A酸。(可看出阿利维A酸和异构体1未分开)；图3为采用本专利技术的方法检测阿利维A酸光降解杂质的色谱图，各峰从左至右，依次为：异构体2、阿利维A酸、异构体1，未知杂质1、未知杂质2；图4为采用EP7.5方法检测阿利维A酸光降解杂质的色谱图，各峰从左至右，依次为：异构体2、阿利维A酸、未知杂质1、未知杂质2。(可看出阿利维A酸和异构体1未分开)；图5为采用本专利技术的方法检测阿利维A酸软胶囊的色谱图，各峰从左至右，依次为阿利维A酸、维A酸；图6为采用本专利技术的方法检测阿利维A酸软胶囊的色谱图2，各峰从左至右，依次为阿利维A酸、维A酸。图7为采用本专利技术的方法检测阿利维A酸软胶囊生物代谢的色谱图，各峰从左至右，依次为阿维A、阿利维A酸、维A酸。具体实施方式以下所举实施例是为了更清楚地对本专利技术的内容进行说明，但本专利技术的内容并不仅限于实施例中所举。所以，熟悉本领域的技术人员根据上述
技术实现思路
对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。除特别说明，以下实施例和对比例采用的仪器及色谱柱等条件如下：日本岛津SHIMADZULC-20AT液相色谱仪，检测器：UV；色谱工作站：LCsolution，色谱柱：十八烷基键合硅胶或八烷基键合硅胶，流本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种采用高效液相色谱分离和测定阿利维A酸及其5种异构体的方法，为反相液相色谱法,色谱柱填料为十八烷基或八烷基键合硅胶，用含甲醇和酸的混合液的流动相洗脱后采用紫外检测器进行检测；所述阿利维A酸及其5种异构体具体如下：所述分离和测定，包括单独分离和检测某一种异构体，也包括同时分离和检测上述6种异构体中的几种或全部；其特征是：流动相中还含有叔丁基甲醚，含量占流动相总体积的15％‑35％。

【技术特征摘要】
1.一种采用高效液相色谱分离和测定阿利维A酸及其5种异构体的方法，为反相液相色谱法,色谱柱填料为十八烷基或八烷基键合硅胶，用含甲醇和酸的混合液的流动相洗脱后采用紫外检测器进行检测；所述阿利维A酸及其5种异构体具体如下：所述分离和测定，包括单独分离和检测某一种异构体，也包括同时分离和检测上述6种异构体中的几种或全部；其特征是：流动相中还含有叔丁基甲醚，含量占流动相总体积的15％-35％。2.权利要求1所述的方法，所述测定，包括定量测定阿利维A酸原料药、阿利维A酸制剂和生物样品中所含的阿利维A酸及其5种异构体。3.权利要求1所述的方法，所述阿利维A酸制剂，包括阿利维A酸硬胶囊或软胶囊、阿利维A酸乳膏或阿利维A酸凝胶，也包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：周维，兰昌云，程刚，颜波，张吉，谭辉，
申请(专利权)人：重庆华邦制药有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50