本发明专利技术涉及一种蔬果中烯酰吗啉与赤霉素残留量测定的方法。本发明专利技术蔬果中烯酰吗啉与赤霉素残留量的测定方法包括：样品制备；样品前处理；有机溶剂提取；固相萃取小柱去除色素杂质，氮气吹至近干，以流动相溶解残渣，溶液经滤膜过滤供HPLC分析；标准溶液的配制；高效液相色谱仪测定等过程。本发明专利技术的方法，操作简单，快速，自动化程度高，萃取效率快，回收率和重复性好，可实现蔬果中烯酰吗啉与赤霉素残留量的同时测定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种蔬菜、水果中烯酰吗啉与赤霉素残留量的测定方法，具体涉及一种蔬果中2种农药残留测定的高效液相色谱方法，属于农药残留的理化检测
技术介绍
近年来，温室大棚等保护地蔬果种植面积迅速增加，重茬、连作导致农产品中病虫害加重，各地在防治蔬果病虫害中，大量和连续地使用烯酰吗啉、赤霉素等农药，使得农产品中病虫对化学农药产生了普遍的抗药性，菜农只能加大农药的使用量。由此，农药使用和依赖程度呈现出恶性循环状态，使得农产品中农药残留量超标问题日益突出。食用农药残留超标的蔬菜与水果，会直接危及人体的神经系统和肝脏、肾脏等重要器官，残留农药在人体内蓄积过一定限度后会导致一些慢性疾病，如癌症、动脉硬化、心血管病、胎儿畸形、死胎、早夭、早衰等疾病。农药残留不但对人体健康造成极大的危害，同时也严重污染人类生存环境，造成空气、土壤、河流等污染，并在环境中不断积累起来，造成动植物中毒，破坏了生态平衡。烯酰吗啉是一种肉桂酸衍生物，对藻状菌的霜霉和疫霉属真菌有独特的作用方式；赤霉素是一种高效能的广普性植物生长促进物质，有诱导无子果实的形成、提高座果率、改善果实品质、防止落花落果、促进果实早熟、延迟果树花期、增加果品贮藏能力和打破休眠的调控作用。生产中，二者广泛应用于葡萄、苹果、西红柿、马铃薯、黄瓜、白菜等作物。目前，国内尚无烯酰吗啉与赤霉素同时测定的液相色谱分析方法，文献报道主要有气相色谱法、气-质联用法、液-质联用法测定其中一种农药，还未报道通过高效液相色谱法同时测定蔬果中的烯酰吗啉与赤霉素。已报道的国外文献中，利用气相色谱-质谱联用法(GC/MS)检测啤酒和干啤酒花中烯酰吗啉残留，但尚未用于蔬菜水果。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种操作简单，快速，自动化程度高，萃取效率高，回收率和重复性好的，同时测定蔬果中烯酰吗啉与赤霉素农药残留量的方法。为实现上述专利技术的目的，本专利技术采取的技术方案如下：一种蔬果中烯酰吗啉与赤霉素残留量测定的方法，包括如下步骤：（1）样品制备：将蔬果样品绞碎、匀浆，冷冻保存，得冷冻样品；（2）样品前处理：称取10g冷冻样品，精确到0.01g，置于50mL离心管中，加入10 mL 80%甲醇水混匀，涡旋，2 min；振荡，10 min；4℃，8000 r/min离心，提取上清液；再加入10 mL 80%甲醇水，涡旋，2 min；振荡，10 min；4℃，8000 r/min离心，提取上清液；合并两次提取液，浓缩至4 mL，得浓缩液；用2 mol/L盐酸调节上述4 mL浓缩液的pH至2.5，加入15mL乙酸乙酯，涡旋，2min；振荡，10min；4℃，8000 r/min离心，提取有机相；再加入15 mL乙酸乙酯，涡旋，2min；振荡，10min；4℃，8000 r/min离心，提取有机相；合并两次有机相提取液；将两次有机相提取液在45℃，旋转、浓缩至近干，加入2.0mL正己烷溶解残渣，净化，得待净化溶液；将酸性氧化铝柱依次用5mL的丙酮+正己烷混合液、5mL正己烷预淋洗、条件化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用15mL刻度离心管接收洗脱液，用5mL的丙酮+正己烷混合液冲洗烧杯后，洗脱酸性氧化铝柱，并重复一次；将盛有10mL洗脱液的刻度离心管置于氮吹仪上，在水浴温度50℃条件下，氮气吹干，用超纯水定容至1.0mL，在旋涡混合器上混匀，经0.45μm滤膜过滤，供高效液相色谱测定；（3）标准溶液的配制：混合标准工作液用乙腈稀释，配制成具有系列梯度浓度的混合标准工作液，以超纯水定容；（4）高效液相色谱仪测定：将工作液注入配有紫外检测器的高效液相色谱仪器中，进行高效液相色谱测定；高效液相色谱测定条件如下：C18柱，150 mm×4.6 mm×5 μm；流动相：甲醇+水+乙酸水溶液（pH=4.0）；流速：1.0 mL/min；柱温：40℃；进样量：20 μL；紫外吸收波长：252 nm；（5）残留量测定结果的计算：以保留时间对烯酰吗啉、赤霉素两种农药进行定性分析，以峰面积进行两种农药的定量分析，用外标法计算结果。优选的，所述蔬果样品为西红柿或西瓜。所述丙酮+正己烷混合液中丙酮和正己烷的体积比为1:9。步骤（2）所述乙酸乙酯在使用前用超纯水饱和。步骤（2）所述酸性氧化铝柱是以酸性氧化铝粉末为固相萃取填料的色谱柱，色谱柱中酸性氧化铝粉末的加入量为每克样品加入1克酸性氧化铝粉末；所述酸性氧化铝粉末在使用前，于马弗炉内400℃下烘干。步骤（3）所述混合标准工作液的系列梯度浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和5.0 μg/mL。优选的，所述步骤（1）冷冻保存温度为-18℃。进一步的，步骤（2）所述加入80%甲醇水的体积为每克样品加入2.0 mL。本专利技术的蔬果中烯酰吗啉与赤霉素残留量测定方法应用于检测西瓜、西红柿中的农药残留量。尤其是用于同时检测西瓜、西红柿中烯酰吗啉与赤霉素残留量。步骤（3）所述混合标准工作液的系列梯度浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和5.0 μg/mL；所采用的HPLC条件为：色谱柱：C18柱，150 mm×4.6 mm×5 μm；流动相：甲醇（A）+水（B）+乙酸水溶液（pH=4.0，C)；流速：1.0 mL/min；柱温：40℃；进样量：20 μL；紫外吸收波长：252nm。优选的，所述流动相梯度及时间如表1所示。表1 流动相梯度及时间。本专利技术的有益效果是：用本方法检测蔬果农药残留量，处理操作简单，快速，自动化程度高，萃取效率高，是一种回收率和重复性好的测定蔬果农药残留量的方法；本专利技术方法可同时测定蔬果中烯酰吗啉与赤霉素农药残留量。附图说明图1：烯酰吗啉与赤霉素2种农药的标准液相色谱图（浓度为0.1 μg/mL），图中1-3依次为烯酰吗啉 、烯酰吗啉、赤霉素。图2：西瓜样品空白谱图。图3：西瓜样品加标谱图（浓度为0.5 μg/mL）。图4：西红柿样品空白谱图。图5：西红柿样品加标谱图（浓度为0.5 μg/mL）。具体实施方式下面通过实例对本专利技术做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本专利技术，并不限制本专利技术的范围。实施例1 采用本专利技术的方法，按如下步骤分别测定5个西瓜与西红柿样品中的烯酰吗啉与赤霉素残留量：（1）样品制备：将5个西瓜与5个西红柿分别绞碎匀浆，-18℃条件下冷冻保存，得冷冻样品；（2）样品前处理：称取10g冷冻样品，精确到0.01g，置于50mL离心管中，加入10 mL 80%甲醇水混匀，涡旋，2 min；振荡，10 min；4℃，8000 r/min离心，提取上清液，得提取液 80%甲醇水10 mL；再加入10 mL 80%甲醇水，涡旋，2 min；振荡，10 min；4℃，8000 r/min离心，提取上清液，得提取液80%甲醇水10 mL；合并两次提取液，浓缩至4 mL；用2 mol/L盐酸调节上述4 mL浓缩液pH至2.5，加入15mL乙酸乙酯，涡旋，2min；振荡，10min；4℃，8000 r/min离心，提取有机相；再加入15 mL乙酸乙酯，涡旋，2min；振荡，10min；4℃，8000 r/min离心，提取有机相；合并两次有机相提取液；将两次有机相提取液3本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蔬果中烯酰吗啉与赤霉素残留量测定的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）样品制备：将蔬果样品绞碎、匀浆，冷冻保存，得冷冻样品；（2）样品前处理：称取10g冷冻样品，精确到0.01g，置于50mL离心管中，加入10 mL 80%甲醇水混匀，涡旋，2 min；振荡，10 min；4℃，8000 r/min离心，提取上清液；再加入10 mL 80%甲醇水，涡旋，2 min；振荡，10 min；4℃，8000 r/min离心，提取上清液；合并两次提取液，浓缩至4 mL，得浓缩液；用2 mol/L盐酸调节上述4 mL浓缩液的pH至2.5，加入15mL乙酸乙酯，涡旋，2min；振荡，10min；4℃，8000 r/min离心，提取有机相；再加入15 mL乙酸乙酯，涡旋，2min；振荡，10min；4℃，8000 r/min离心，提取有机相；合并两次有机相提取液；将两次有机相提取液在45℃，旋转、浓缩至近干，加入2.0mL正己烷溶解残渣，净化，得待净化溶液；将酸性氧化铝柱依次用5mL的丙酮+正己烷混合液、5mL正己烷预淋洗、条件化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用15mL刻度离心管接收洗脱液，用5mL的丙酮+正己烷混合液冲洗烧杯后，洗脱酸性氧化铝柱，并重复一次；将盛有10mL洗脱液的刻度离心管置于氮吹仪上，在水浴温度50℃条件下，氮气吹干，用超纯水定容至1.0mL，在旋涡混合器上混匀，经0.45μm滤膜过滤，供高效液相色谱测定；（3）标准溶液的配制：混合标准工作液用乙腈稀释，配制成具有系列梯度浓度的混合标准工作液，以超纯水定容；（4）高效液相色谱仪测定：将工作液注入配有紫外检测器的高效液相色谱仪器中，进行高效液相色谱测定；高效液相色谱测定条件如下：C18柱，150 mm×4.6 mm×5 μm；流动相：甲醇+水+乙酸水溶液（pH=4.0）；流速：1.0 mL/min；柱温：40℃；进样量：20 μL；紫外吸收波长：252 nm；（5）残留量测定结果的计算：以保留时间对烯酰吗啉、赤霉素两种农药进行定性分析，以峰面积进行两种农药的定量分析，用外标法计算结果。...
【技术特征摘要】
1.一种蔬果中烯酰吗啉与赤霉素残留量测定的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）样品制备：将蔬果样品绞碎、匀浆，冷冻保存，得冷冻样品；（2）样品前处理：称取10g冷冻样品，精确到0.01g，置于50mL离心管中，加入10 mL 80%甲醇水混匀，涡旋，2 min；振荡，10 min；4℃，8000 r/min离心，提取上清液；再加入10 mL 80%甲醇水，涡旋，2 min；振荡，10 min；4℃，8000 r/min离心，提取上清液；合并两次提取液，浓缩至4 mL，得浓缩液；用2 mol/L盐酸调节上述4 mL浓缩液的pH至2.5，加入15mL乙酸乙酯，涡旋，2min；振荡，10min；4℃，8000 r/min离心，提取有机相；再加入15 mL乙酸乙酯，涡旋，2min；振荡，10min；4℃，8000 r/min离心，提取有机相；合并两次有机相提取液；将两次有机相提取液在45℃，旋转、浓缩至近干，加入2.0mL正己烷溶解残渣，净化，得待净化溶液；将酸性氧化铝柱依次用5mL的丙酮+正己烷混合液、5mL正己烷预淋洗、条件化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用15mL刻度离心管接收洗脱液，用5mL的丙酮+正己烷混合液冲洗烧杯后，洗脱酸性氧化铝柱，并重复一次；将盛有10mL洗脱液的刻度离心管置于氮吹仪上，在水浴温度50℃条件下，氮气吹干，用超纯水定容至1.0mL，在旋涡混合器上混匀，经0.45μm滤膜过滤，供高效液相色谱测定；（3）标准溶液的配制：混合标准工作液用乙腈稀释，配制成具有系列梯度浓度的混合标准工作液，以超纯水定容；（4）高效液相色谱仪测定：将工作液注入配有紫外检测器的高效液相色谱仪器中，进行高效液相色谱测定；高效液相色谱测定条件如下：C18柱，150 mm×4.6 mm×5 μm...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭宏斌，杨春亮，王明月，曾日中，林玲，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44
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