一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物残留量的方法技术

本发明专利技术提供一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物残留量的方法，涉及农药残留检测领域，所述测定方法采用高效液相色谱‑质谱/质谱法进行检测，包括先对样品中的草铵膦及其代谢物用水提取，经二氯甲烷和C18固相萃取小柱净化，然后采用亲水作用NH2色谱柱，用液相色谱‑质谱/质谱法，电喷雾离子源(ESI)负离子模式电离，多反应监测(MRM)模式检测，基质外标法定量测定草铵膦及其代谢物N‑乙酰基草铵膦(简称NAG)和3‑(甲基膦基)丙酸(简称MPP)。本发明专利技术所提供的方法简便快捷，灵敏度高，实用性强，对进出口食品检测，国内食品安全控制具有实质意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及农药残留量的测定
，更具体地涉及一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物残留量的方法。
技术介绍
草铵膦(glufosinate-ammonium，简称GLU)是德国赫斯特公司(HearstCorporation)于上世纪80年代开发的新型灭生性除草剂，其有效成分为phosphinothricin(简称PPT)，化学名称为(RS)-2-氨基-(羟基甲基氧膦基)丁酸铵，分子式为C5H12NO4P，分子量181.1。原药为白色至浅黄色结晶粉末，密度1.4g/mL(20℃)，熔点215℃，沸点99.5℃，蒸气压<0.1mPa(25℃)，高度稳定，25℃可贮存2年；25℃时其在水中的溶解度为1370g/L，20℃时在几种常规有机溶剂中的溶解度分别为：丙酮0.016g/100mL，乙醇0.065g/100mL，乙酸乙酯0.014g/100mL，正己烷0.02g/100mL，甲苯0.014g/100mL。对光稳定，在pH5～9水解，在土壤中DT50<10d。目前已知草铵膦在植物中的主要代谢物有N-乙酰基草铵膦(简称NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(简称MPP)草铵膦是目前用量仅次于草甘膦的世界第二大转基因作物耐受除草剂，属于磷酸类除草剂，是谷氨合成抑制剂，施药后短时间内植物体内铵代谢陷于紊乱，细胞毒剂铵离子在植物体内累积，与此同时，光合作用被严重抑制，达到除草目的。它具有内吸传导型、广谱非选择性、触杀型、灭杀性等特点。草铵膦主要用于防除一年生和多年生双子叶禾本科杂草，采用杂草茎叶定向喷雾处理，应用于茶叶、果园、葡萄园、柑橘园、咖啡园、蔬菜、马铃薯田、非耕地等。草铵膦属于非持久性农药，但其大量和任意的使用，仍有可能在农作物上残留，从而对人、畜构成威胁。根据1999年联合国粮农组织及世界卫生组织农药残留联合专家会议(JMPR)报告，草铵膦的主要代谢物有N-乙酰基草铵膦(简称NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(简称MPP)，均为有毒代谢物，存在一定的风险。目前，各国(地区)和相关机构对食品中草铵膦(GLU)的限量标准不同：国际食品法典委员会(CAC)制定了草铵膦40项残留限量标准，限量范围在0.05～8mg/kg之间；美国草铵膦共33项残留限量标准，限量范围在0.05～6mg/kg之间；欧盟草铵膦共378项残留限量标准，限量范围在0.1～5mg/kg之间；日本草铵膦共169项残留限量标准，限量范围在0.05～6mg/kg之间；韩国草铵膦共26项残留限量标准，限量范围在0.05～0.5mg/kg之间；澳大利亚草铵膦共37项残留限量标准，限量范围在0.05～20mg/kg之间；新加坡草铵膦共30项残留限量标准，限量范围在0.1～0.5mg/kg之间；中国制定了草铵膦5项残留限量标准，番茄、柑橘、茶叶中草铵膦的最大残留限量为0.5mg/kg，香蕉、木瓜中草铵膦的最大残留量为0.2mg/kg。中国台湾有14项残留限量标准，限量范围在0.05～2mg/kg之间；中国香港有18项残留限量标准，限量范围在0.05～5mg/kg之间。其中中国台湾、中国香港、CAC、美国、欧盟标准中明确规定残余物定义为草铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸之和，以草铵膦(游离酸)表示；韩国规定残余物定义为草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸之和，以草铵膦(游离酸)表示；中国、日本、澳大利亚、新加坡则没有指明限量是否包含代谢物。但目前各国并无具体的检测标准，在贸易中为达到限量规定要求，对产品检测是必不可少的。因此建立草铵膦及其代谢物的残留检测方法，对我国进出口贸易，食品安全等方面都有重要的意义。在目前公开的现有技术中，存在多种检测草铵膦及其代谢物的分析方法。江燕，曹赵云，贾瑞琳，齐慧，陈铭学，亲水作用色谱一串联质谱法测定稻米中的草甘膦和氨甲基磷酸残留量，《色谱》，2012,30(1)39-44，公开了一种亲水作用色谱-串联质谱法测定稻米中的草甘膦和氨甲基磷酸残留量。采用亲水作用色谱5串联质谱建立了同时测定稻米中草甘膦及其主要代谢物氨甲基磷酸残留量的检测方法。样品经水提取，C18固相萃取柱和超滤膜净化，以1mmol/L乙酸铵溶液(用氨水调pH＝11.0)-乙腈为流动相，亲水作用色谱柱分离，采用电喷雾离子源、负离子扫描模式和多反应监测模式质谱检测，基质匹配标准溶液外标法定量。草甘膦和氨甲基磷酸分别在0.001～0.250mg/L和0.0025～0.250mg/L质量浓度范围内线性关系良好，检出限(信噪比为3)分别为0.010mg/kg和0.020mg/kg。通过对空白大米样品进行0.100、0.500和2.500mg/kg3个加标水平的回收试验，草甘膦和氨甲基磷酸的平均回收率和相对标准偏差分别为96.3％～107.3％和1.3％～9.1％(n＝3)。该方法同时检测草铵膦及其代谢物时，草铵膦及其代谢物的分离度很差。刘铮铮，李立，王静，潘荷芳，高效液相色谱-柱前衍生法测定水中有机磷除草剂,《中国环境监测》，2009,25(5)35-38，其公开了一种采用氯甲酸-9-芴基甲酯(FMOC)柱前衍生化后，再通过高效液相色谱荧光检测分析法测定水样品中痕量草甘膦、草铵膦和氨基甲磷酸的方法。该方法先在水样品中加入0.5mL0.05M的硼酸钠溶液，然后加入0.5mL1.0mg/mL的FMOC溶液，衍生2h后，加入5mL乙酸乙酯萃取制备样品，然后以Waters高效液相色谱柱(AtlantisC18柱5μm，4.6㎜×250㎜)，流动相为0.02M磷酸溶液-乙腈的混合液80:20(按体积比)，在柱温40℃和流速1.0mL/min的条件下，以荧光检测器检测样品。该方法需要事先对样品进行衍生化，操作繁琐，灵敏度较低。NaokiYoshioka,MigiwaAsano,AzumiKuse,TakaoMitsuhashi,YasushiNagasaki,YasuhiroUeno,Rapiddeterminationofglyphosate,glufosinate,bialaphos,andtheirmajormetabolitesinserumbyliquidchromatography–tandemmassspectrometryusinghydrophilicinteractionchromatography,JournalofChromatographyA,2011(1218)3675–3680.公开了一种用亲水作用色谱(HILIC色谱柱)—液相串联质谱法直接法快速测定了血清中的草甘膦本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物N‑乙酰基草铵膦和3‑(甲基膦基)丙酸的方法，所述方法采用亲水作用NH2色谱柱，乙酸铵水溶液‑乙腈为流动相按梯度程序洗脱待测样品溶液或基质混合标准校准溶液，用质谱/质谱检测器以多反应监测模式检测，然后按照外标法计算食品中残留草铵膦及其代谢物N‑乙酰基草铵膦和3‑(甲基膦基)丙酸的含量，其中所述的梯度洗脱程序是：其中所述的待测样品溶液制备方法：对样品中的草铵膦及其代谢物用水提取，再经二氯甲烷和C18固相萃取小柱净化获得；其中所述的基质混合标准校准溶液的制备方法：称取阴性样品，加入草铵膦、N‑乙酰基草铵膦和3‑(甲基膦基)丙酸的混合标准溶液，然后用水提取，再经二氯甲烷和C18固相萃取小柱净化获得。

【技术特征摘要】
1.一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的方
法，所述方法采用亲水作用NH2色谱柱，乙酸铵水溶液-乙腈为流动相按梯度程序洗脱待测
样品溶液或基质混合标准校准溶液，用质谱/质谱检测器以多反应监测模式检测，然后按照
外标法计算食品中残留草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的含量，
其中所述的梯度洗脱程序是：
其中所述的待测样品溶液制备方法：对样品中的草铵膦及其代谢物用水提取，再经二
氯甲烷和C18固相萃取小柱净化获得；
其中所述的基质混合标准校准溶液的制备方法：称取阴性样品，加入草铵膦、N-乙酰基
草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的混合标准溶液，然后用水提取，再经二氯甲烷和C18固相萃取
小柱净化获得。
2.根据权利要求1所述的方法，其中待测组分草铵膦的定量离子对是180/95；N-乙酰基
草铵膦的定量离子对是222/136；3-(甲基膦基)丙酸的定量离子对是151/133。
3.根据权利要求1所述的方法，所述方法流动相流速是0.1～0.5mL/min或0.25mL/min。
4.根据权利要求1所述的方法，所述的亲水作用NH2色谱柱是NH2P-502D柱，150mm×
2.0mm，5μm；运行过程中色谱柱的柱温是20℃～40℃或35℃。
5.根据权利要求1所述的方法，所述乙酸铵水溶液是采用乙酸铵溶解于水，然后用氨水
调节pH值获得，乙酸铵水溶液的浓度是0.5～2mmol/L或1mmol/L，其pH值是9～11或11。
6.根据权利要求1所述的方法，所述的质谱检测器的离子源是电喷雾离子源，并采用负
离子模式电离样品。
7.根据权利要求1所述的方法，其中质谱检测器采用电喷雾离子源，以负离子模式扫
描，采用多反应监测检测，质谱检测参数是：干燥气温度：300℃；干燥气流速：10L/min；雾化
气压力：45psi；电喷雾电压：-4500V；鞘流气温度：350℃；鞘流气流速：7L/min；喷嘴电压：-
1000V。
8.一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的方
法，采用高效液相色谱-质谱/质谱法，按梯度程序洗脱待测样品溶液或基质混合标准校准
溶液，用质谱/质谱检...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦航，黄伙水，许彩霞，邹强，翁城武，李亦军，
申请(专利权)人：韦航，黄伙水，泉州出入境检验检疫局综合技术服务中心，
类型：发明
国别省市：福建;35