本发明专利技术公开了一种基于水生动物摄食抑制度测定水污染物的方法。包括下列步骤：将供试水生动物禁食3小时以上后转入待测水中，放入适量轮虫，让供试水生动物摄食40‑80分钟，然后观察统计供试水生动物摄食轮虫数量，根据每尾水生动物摄食的平均轮虫数量，计算得到无可观察效应浓度和最低可观察效应浓度。本发明专利技术方法简单快速，只需要试验前将水生动物饥饿3小时以上，试验时间40‑80分钟，观察和统计约2‑4小时，相对于常规水生动物急性毒性试验，大大缩短试验时间。本发明专利技术方法非常灵敏，操作简单，便于大规模推广。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术具体涉及一种基于水生动物摄食抑制度测定水污染物的方法。
技术介绍
水质安全不仅关乎生态系统的健康，更关乎人类的生存和发展。近年来随着人类活动的加剧，越来越多的污染物被直接或间接地排入环境水体，造成严重的水体污染。排入环境水体中污染物种类繁多，且一种污染物往往具有多种生物效应，传统方法中借助水质标准浓度限值评价水质安全存在明显不足。生物毒性测试能直观反映水体中所有共存污染物的综合毒性特征，己逐渐发展成为水质安全评价的重要补充（徐建英，2014）。目前应用较普遍的水生生物毒性测试标准方法主要有：藻类生长抑制试验（72h）、枝角类（水蚤）急性毒性试验（48h），鱼类急性毒性试验（96h）。1981年，国际经合组织（OECD）制定了藻类生长抑制试验的国际标准方法，利用24、48、72、96h有毒物质对藻类生长的半数抑制效应的质量浓度（EC50）来表征急性毒性作用的程度。试验方法简单，得到的结果也准确可靠，但试验周期较长，需要重复，操作繁琐（谢艳，2008）。水蚤体形较小，以真菌、藻类、溶解性有机物及碎屑物为食物，繁殖能力强，分布较为广泛，是国际上普遍应用的一种标准毒性测试生物。当水生环境受到污染时，水蚤的生长将受有毒物质影响，水蚤的生殖和发育受到干扰，致使蚤类死亡。利用蚤类死亡率作为测试指标，实验现象直观，易观察，但是测试灵敏度低，实验时间长（李东，2007）。鱼类对水质环境的变化很敏感，当水体中的有毒物质达到一定的浓度时，就会引起鱼类一系列的中毒反应，因此其被广泛用于废水和毒物的生物评价、监测，进而以此为指标进行排放标准和质量标准的制定及工业废水的管理制度制定等。传统的鱼类毒性实验主要是采用24h、48h、96h有毒物质的质量浓度的半数致死来代表急性毒性物质的毒性程度，但是本检测方法需要多次重复实验及大量的实验材料，实验耗时较长（李东，2007），如GB/T 13267-1991《水质物质对淡水鱼(斑马鱼)急性毒性测定方法》规定的实验鱼使用前至少驯养14天以上，试验时间另需6-8天；GB/T21814-2008《工业废水鱼类急性毒性试验》规定的试验时间也要达到15天左右。综上所述，现有技术对于生物毒性测试的方法费时费力，而水污染源监控管理和突发水污染事件需要更为有效快速的方法作为应急使用，因此，建立一种试验周期短，准确度更高的监测方法有重要意义。水生动物终身生活在水体中，摄食活动是所有生命活动的基础。水生动物摄取食物需要通过多种感觉器来确认食物的方位和特征，化学感受器在这个过程中起到了重要作用。化学感受器主要包括嗅觉感受器和味觉感受器。水生动物嗅觉能接受水体中低浓度化学物质的刺激，有感受气味的能力，能区别化学物质且极灵敏；味觉也较灵敏，如岁鱼味蕾对糖的敏感性阈值是2×10-5 mol/L，对盐是4×10-5mol/L，这比人对糖和盐的阈值分别低512 倍和184 倍。影响水生动物选择食物的行为，除食物的物理刺激如颗粒大小、形状、光泽、颜色、硬度等因素外，水中环境的化学信息显得特别重要，特别是底栖甲壳动物，由于其视觉较原始，化学感受器在甲壳动物的摄食过程中占重要地位。化学受体直接与外界水环境接触，意味着化学受体系统特别容易受水环境中化学物质或因子，例如去污剂、工业废物、原油、温度、酸碱度等的损伤，导致水生动物摄食抑制（陈楠生，1992；曾端，2002；高强，2003）。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种基于水生动物摄食抑制度测定水污染物的方法。本专利技术所采取的技术方案是：一种基于水生动物摄食抑制度测定水污染物的方法，包括下列步骤：将供试水生动物禁食轮虫不少于3小时，然后转入待测水中，放入适量轮虫，让供试水生动物摄食，然后观察统计供试水生动物摄食轮虫的数量，根据每尾水生动物摄食的轮虫数量，计算得到无可观察效应浓度和最低可观察效应浓度。优选的，所述供试水生动物为鱼、虾、蟹。优选的，供试鱼为0-15日龄鱼苗，供试虾为蚤状幼体或糠虾幼体，供试蟹为蚤状幼体。优选的，每尾供试水生动物添加0.5-300mL待测水溶液。优选的，每尾供试水生动物添加0.5-100mL待测水溶液。优选的，每尾供试水生动物添加0.5-20 mL待测水溶液。待测水可以稀释为不同浓度水溶液分别进行测试。优选的，水生动物幼体禁食轮虫时间为3-48小时。其中，禁食的目的在于：1）增强食欲，使抑制摄食试验效果显著；2）使之前摄食的轮虫消化、排除，以免试验前摄食的轮虫干扰试验结果。优选的，0-2日龄鱼禁食时间为3-24h；3-15日龄供试鱼禁食时间为3-48h。优选的，供试虾蚤状幼体禁食时间为3-24h，糠虾幼体禁食时间为3-48h；供试蟹蚤状幼体的禁食时间是3-48h。优选的，轮虫的添加密度为1-200 个/ml待测水溶液。优选的，轮虫的添加密度为2-100 个/ml待测水溶液。优选的，轮虫的添加密度为5-70个/ml待测水溶液。轮虫是一种微小的多细胞动物，其种类繁多、广泛分布于淡水、半咸水和海水中。轮虫为鱼虾蟹早期幼体阶段的适宜饵料，有大量文献数据支持。优选的，供试水生动物摄食时的培养条件为：水温20℃～28℃，液面照度为50 lux-500 lux。优选的，与供试水生动物试验前饲养水比较，待测溶液的水温变化范围不宜超过2℃，盐度变化范围不宜超过2，pH值变化范围不宜超过0.4。如待测溶液的水环境因子与试验前供试水生动物饲养的水环境因子变化超出上述范围，则在试验的环境条件下驯养供试动物一定时间（24 h-48 h）。优选的，如待测水溶液的溶解氧饱和度低于60％时，对试验待测溶液进行轻微充气，充气气泡为60个/min～100个/min。如浓度组进行充气，同样对照组也应充气。优选的，供试水生动物摄食时间为20-180分钟。优选的，供试水生动物摄食时间为30-120分钟。优选的，供试水生动物摄食时间为40-80分钟。咀嚼器为骨质结构，一般需2-3小时才能被消化，具体不同轮虫种类或不同摄食动物消化时间有差异。所以摄食时间控制在水生动物充分摄食轮虫且轮虫的咀嚼器尚未被消化的时间段内。优选的，待供试水生动物摄食完成后，采用固定液或麻醉剂使供试水生动物停止摄食和代谢，然后显微镜观察供试水生动物。这里的意义在于：1）停止摄食，鱼胃肠道内轮虫不再增加；2）停止代谢，鱼胃肠道内轮虫不再被消化，这样即使3-5天后进行观察，鱼胃肠道内轮虫数量不变。优选的，固定液选自鲁哥氏液或甲醛，麻醉剂选自丁香酚、间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐。优选的，供试水生动物摄食轮虫数量以供试水生动物胃肠道内未能被消化的轮虫咀嚼器数量为准。优选的，设定5个等比浓度组和1个空白对照组，等比系数不宜大于2.0，每个试验组设置2-4个重复，每个容器放10个供试水生动物。优选的，当待测水按相同等比系数稀释为不同浓度梯度的水溶液进行测试时，从低浓度到高浓度依次比较试验结果。当某浓度待测水溶液与对照比较供试生物摄食轮虫数量存在显著性差异，证明该浓度毒物对供试生物的摄食有抑制效应，该浓度即为最低可观察效应浓度，前一个浓度为无可观察效应浓度。为了结果更准确，在无可观察效应浓度与最低可观察效应浓度之间可以按相同等比系数进一步细分几个浓度梯度进行测试。具体的，先将对照组与最低浓度组试验结果本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于水生动物摄食抑制度测定水污染物的方法，其特征在于：包括下列步骤：将供试水生动物禁食轮虫不少于3小时，然后转入待测水中，放入适量轮虫，让供试水生动物摄食，然后观察统计供试水生动物摄食轮虫的数量，根据每尾水生动物摄食的轮虫数量，计算得到无可观察效应浓度和最低可观察效应浓度。
【技术特征摘要】
1.一种基于水生动物摄食抑制度测定水污染物的方法，其特征在于：包括下列步骤：将供试水生动物禁食轮虫不少于3小时，然后转入待测水中，放入适量轮虫，让供试水生动物摄食，然后观察统计供试水生动物摄食轮虫的数量，根据每尾水生动物摄食的轮虫数量，计算得到无可观察效应浓度和最低可观察效应浓度。2.根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：所述供试水生动物为鱼、虾、蟹。3.根据权利要求2所述的的方法，其特征在于：供试鱼为0-15日龄鱼苗，供试虾为蚤状幼体或糠虾幼体，供试蟹为蚤状幼体。4.根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：水生动物幼体禁食轮虫时间为3-...
【专利技术属性】
技术研发人员：李建军，黄韧，
申请(专利权)人：广东省实验动物监测所，
类型：发明
国别省市：广东;44
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