一种蔬菜和干果中双炔酰菌胺残留量的LC‑MS‑MS检测方法技术

本发明专利技术公开了一种蔬菜和干果中双炔酰菌胺残留量的LC‑MS‑MS检测方法，属于农药残留量检测技术领域。本方法用乙腈溶液均质提取样品中残留的双炔酰菌胺，提取液经分散净化后，液相色谱串联质谱（LC‑MS‑MS）检测，采用不含待测农药的空白基质溶液建立校正的标准曲线，外标法定量。本方法平均回收率为85.0％～94.6%，平均相对标准偏差（RSD）为0.86％～2.89％%，本发明专利技术检出限0.003mg/kg，定量检出限0.01mg/kg。具有操作简便、快速、灵敏度高、重复性好、定性定量准确的优点。能满足0.01mg/kg残留限量的“一律标准”技术要求，为保障我国人民食品安全、对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种双炔酰菌胺残留量的检测方法，更具体地涉及一种蔬菜和干果中双炔酰菌胺残留量的LC-MS-MS（液相色谱-串联质谱）检测方法，属于农药残留量检测

技术介绍
双炔酰菌胺化学名称为2-(4-氯苯基)-N-[2-(3-甲氧基-4-丙-2-炔基氧基-苯基)-乙基]-2-丙-2-炔氧基-乙酰胺，英文化学名称为2-(4-chlorophenyl)-N-[2-(3-methoxy-4-prop-2-ynyloxy-phenyl)-ethyl]-2-prop-2-ynyloxy-acetamide。CAS登录号为[374726-62-2]。分子式：C23H22ClNO4，相对分子质量：411.9。化学结构式如下：理化性质：淡棕色粉末，熔点96.4℃~97.3℃。沸点大约200℃开始热分解。蒸汽压<9.4×10-7Pa(25℃)。油水分配系数logPow：3.2℃(25℃)。水中溶解度4.2mg/L(25℃)。哺乳动物毒性：大鼠急性经口LD5>5000mg/kg，大鼠急性经口LD50>2000mg/kg，大鼠急性吸入LC50>5000mg/kg，兔眼睛有轻微刺激，兔皮肤有中度刺激，通过大鼠试验无致突变、致畸、致癌作用，亦无神经毒害，对大鼠的繁殖无影响，大鼠体内代谢可快速吸收和排出。生态毒性：鸟类急性经口山齿鹑LD50>5000mg/kg，虹鳟鱼LC50>2.9mg/L。蜜蜂触杀和经口LD50>r>200mg/只，蚯蚓LC50>1000mg/kg。环境降解效应：在pH4~9水溶液中稳定。水中光解DT501.7d(pH=7，25℃)。土壤代谢Koc847mL/g(范围405~1294mL/g)。土壤降解DT5017d(范围2~29d)。双炔酰菌胺对抑制孢子的萌发具有较高活性。它同时也抑制菌丝体的成长与孢子的形成，对靶标病原体，双炔酰菌胺最好是用作预防性喷洒，但在潜伏期中也可以提供治疗作用。双炔酰菌胺对植物表面的蜡质层具有很高的亲合力。当喷洒到植物表面且沉淀干燥后，大部分活性成分被腊质层吸附，并且很难被雨水冲洗掉。一小部分活性成分渗透到植物组织中，由于其本身活性高，被吸收到植物组织中的这部分足以抑制菌丝体的成长，从而保护整个叶片不受病害侵染。这些性质保证它稳定高效，持效期长，作用效果好，使用剂量低应用范围广。随着人们对食品中农药残留毒性的关注，双炔酰菌胺残留的检测也受到重视。据美国联邦公报消息，2016年3月28日美国环保署发布条例，修订双炔酰菌胺（mandipropamid）的最大残留限量。土豆（湿皮）中限量小于0.15ppm；块茎和球茎类蔬菜(亚组1C)限量小于0.09ppm。同时，作为我国主要出口市场的欧盟、日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登记，没有制定相应的残留限量标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性食品中残留限量均实行0.01mg/L的“一律标准”。我国最新颁布的GB2763—2014《食品中农药最大残留限量》规定了苯酰菌胺、氰酰胺、啶酰菌胺、氟吡菌胺、环酰菌胺、噻呋酰胺、双炔酰菌胺7种新型酰胺类杀菌剂在食品中的残留限量，而目前尚未有同时分析这7种新型杀菌剂残留分析方法的报道，因此建立果蔬中简单准确的新型酰胺类杀菌剂残留量分析方法已是迫在眉睫。国内外公开报道的关于新型酰胺类杀菌剂分析手段主要有免疫分析法、气相色谱法、液相色谱法、气相色谱-质谱法，其中目前报道较多的分析方法为气相色谱-质谱联用法。而利用液质联用方法在基质较为复杂的各种蔬菜和干果中检测多双炔酰菌胺残留，并且适应范围广、灵敏度高、重复性好、定性定量准确的LC-MS-MS方法尚未见报道。因此，一种简便、快速、灵敏度高、重复性好、定性定量准确的双炔酰菌胺在蔬菜和干果中的残留检测方法亟待开发出来。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处，而提供一种简便、快速、灵敏度高、重复性好、定性定量准确的蔬菜干果中双炔酰菌胺残留量的检测方法。为实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种蔬菜干果中双炔酰菌胺残留量的LC-MS-MS（液相色谱-串联质谱）检测方法，包括如下步骤：（1）试样制备：将市场采集样品按照四分法缩分至500g，将此样品分成2×200g两份，用食品加工机粉碎，于-20℃冰柜密闭保存。（2）提取及净化：称取5.0g已制备好试样于50mL离心管中，加入10ml乙腈，高速匀浆2min，加入2gNaCl，剧烈振摇1min。取上层乙腈相离心，取1mL上清液加入1mL的甲醇和水混合溶液（体积比1:1）过0.2μm尼龙微孔过滤膜，得到的液相部分即为待测样品。（3）标准工作溶液的配制:将不含双炔酰菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤(1)、(2)处理，得样品提取净化液，用空白提取净化液配制成至少5个浓度的双炔酰菌胺系列混合标准工作液。（4）测定和结果计算:将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS-MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(2)中净化后的样品液进行LC-MS-MS测定，测得样品液中双炔酰菌胺的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中双炔酰菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中双炔酰菌胺残留量。步骤(1)中样品若为脱水蔬菜和干果，需降低称样量，并加适量水充分浸润。步骤(2)中用乙腈提取时加入氯化钠盐析含水量较少的样品盐析时需加入一定量的水。步骤(4)中所述的液相色谱的流动相包括A相和B相，A相为甲醇，B相为水；流速：0.3mL/min；进样体积：1.0μL；柱温箱：45℃。步骤(4)中液相色谱使用梯度洗脱的方法，梯度洗脱程序为：步骤(4)中液相色谱的色谱柱ZORBAXECLIPSEPlusC18，2.1×50mm,1.8μm。步骤(4)中分析条件为：离子源温度375℃.离子源:ESI.电喷雾电压：5000V。雾化器压力：0.138MPa。辅助加热气：0.379MPa。扫描方式：正离子扫描。步骤(4)中质谱检测使用多反应监测(MRM)负离子扫描模式，双炔酰菌胺的母离子、子离子，去簇电压和碰撞能量分别为：步骤(4)中检测所述滤液中农药的母离子和子离子对，若其离子色谱峰保留时间与标准工作溶液一致；且滤液(样品)中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当的空白基质标准溶液的离子相对丰度偏差不超过30％时，则判断该样品中存在该种农药；若上述两个条件不能本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蔬菜和干果中双炔酰菌胺残留量的LC‑MS‑MS检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1）试样制备：将采集样品按照四分法缩分，用食品加工机粉碎，于‑20℃冰柜密闭保存；2）提取及净化：称取已制备好试样于离心管中，加入乙腈，高速匀后加入NaCl，剧烈振摇1min；取上层乙腈相离心，取上清液加入体积比1:1甲醇和水混合溶液过0.2μm尼龙微孔过滤膜，得到的液相部分即为待测样品；3）标准工作溶液的配制：将不含双炔酰菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤1)、2)处理，得样品提取净化液，用空白提取净化液配制成至少5个浓度的双炔酰菌胺系列混合标准工作液；4）测定和结果计算：将步骤3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC‑MS‑MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤2)中净化后的样品液进行LC‑MS‑MS测定，测得样品液中双炔酰菌胺的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中双炔酰菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中双炔酰菌胺残留量。

【技术特征摘要】
1.一种蔬菜和干果中双炔酰菌胺残留量的LC-MS-MS检测方法，其特征在于，所述方法
包括以下步骤：1）试样制备：将采集样品按照四分法缩分，用食品加工机粉碎，于-20℃冰柜
密闭保存；2）提取及净化：称取已制备好试样于离心管中，加入乙腈，高速匀后加入NaCl，剧
烈振摇1min；取上层乙腈相离心，取上清液加入体积比1:1甲醇和水混合溶液过0.2μm尼龙
微孔过滤膜，得到的液相部分即为待测样品；3）标准工作溶液的配制：将不含双炔酰菌胺的
同种类基质空白样品按上述步骤1)、2)处理，得样品提取净化液，用空白提取净化液配制成
至少5个浓度的双炔酰菌胺系列混合标准工作液；4）测定和结果计算：将步骤3)中的各浓度
梯度的标准工作液进行LC-MS-MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归
分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤2)中净化后的样品液进行LC-MS-MS测定，测
得样品液中双炔酰菌胺的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中双炔酰菌胺含量，然后
根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中双炔酰菌胺残留量。
2.根据权利要求1所述的一种蔬菜和干果中双炔酰菌胺残留量的LC-MS-MS检测方法，
其特征在于：步骤1)试样制备中将样品按照四分法缩分至500g，将此样品分成2×200g两
份，用食品加工机粉碎，于-20℃冰柜密闭保存。
3.根据权利要求1所述的一种蔬菜和干果中双炔酰菌胺残留量的LC-MS-MS检测方法，
其特征在于，步骤2)提取及净化中称取5.0g已制备好试样于50mL离心管中，加入10ml乙
腈，高速匀浆2min，加入2gNaCl，剧烈振摇1min；取上层乙腈相离心，取1mL上清液加入1mL
的甲醇和水混合溶液（体积比1:1）过0.2μm尼龙微孔过滤膜，得到的液相部分即为待测样
品。
4.根据权利要求1所述的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：李慧冬，陈子雷，董崭，范文静，张文君，朱倩，
申请(专利权)人：山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37