蔬菜中8种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种蔬菜中8种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱‑串联质谱检测方法，包括如下步骤：称取匀浆后蔬菜样品，在蔬菜样品中加入内标溶液，然后加入酸化乙腈提取，加入氯化钠振荡后离心，将上清液用硫酸镁除水和PSA(乙二胺基‑N‑丙基)吸附净化后，用氮气吹干后甲醇‑水复溶，过滤后利用高效液相色谱‑串联质谱方法进行检测。该方法操作简便快速、灵敏度高、专属性强，可实现蔬菜样品中8种喹诺酮类药物残留的高通量分析，满足蔬菜中喹诺酮类药物残留的监控要求。该方法的检出限为1μg/kg，在10、50和100μg/kg 3个浓度水平下进行加标回收实验的平均回收率为71.5％～111％，相对标准偏差为1.25％～10.2％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于化学分析领域，具体涉及一种蔬菜中8种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法及其应用。
技术介绍
喹诺酮类抗生素被大量应用于人类医疗及动物养殖中，而抗生素使用后80％左右以药物原形或代谢产物随粪尿排除体外。人用抗生素在污水处理过程中去除率较低，造成水体抗生素污染；畜牧养殖中抗生素的使用一方面直接造成动物源性食品中药物残留，另一方面随粪尿排出的抗生素在环境中累积，导致水体和土壤的污染；同时富含抗生素的畜禽粪便作为有机肥时大多未经处理直接用于农业生产，残留抗生素可能被农作物吸收蓄积最终通过食物链威胁人体健康。已有研究显示喹诺酮类抗生素可被蔬菜等植物所吸收累积，但对蔬菜等植物性食品中抗生素的污染问题现在研究相对较少，由于蔬菜样品的基质相对复杂，含有大量的有机酸、糖类、脂类和色素等，这些物质严重干扰蔬菜中的抗生素的检测。
技术实现思路
本专利技术为了解决现有技术中存在的技术问题，提供一种蔬菜中8种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法及其应用。该方法操作简便、灵敏度高、结果准确可靠，为蔬菜中喹诺酮类抗生素污染特征分析及蔬菜等植物性食品的质量安全监测提供了技术支持。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：蔬菜中8种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法，包括如下步骤：称取匀浆后蔬菜样品，在蔬菜样品中加入内标溶液，然后在蔬菜样品中加入酸化乙腈提取，提取完毕加入氯化钠振荡后离心，将上清液用硫酸镁除水和PSA(乙二胺基-N-丙基)吸附净化后，将上清液用氮气吹干，然后用甲醇-水复溶，过滤后利用高效液相色谱-串联质谱法进行检测。加入氯化钠提取有盐析作用，可以促进水层与有机相的分层，使蔬菜中的药物有机物更好地溶解在有机相中，提高提取效率。加入硫酸镁有助于去除提取液中多余水分，改善喹诺酮类化合物的分配；PSA可去除蔬菜样品中的有机酸、糖类、脂类和色素等干扰性基质物质，提高检测的准确度。净化后的提取液经氮气吹干后用甲醇-水复溶浓缩后，用于高效液相色谱-串联质谱法检测。该预处理步骤，可以最大限度地将喹诺酮类药物从蔬菜样品中提取出来，并且有效除去喹诺酮类药物中的干扰物质，使得该方法可以准确检测蔬菜中的多种喹诺酮类药物。优选的，所述8种喹诺酮类药物为二氟沙星、达氟沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、培氟沙星、环丙沙星和诺氟沙星。由于蔬菜样品的基质相对复杂，含有大量的有机酸、糖类、脂类和色素等，这些物质严重干扰了蔬菜中抗生素的检测，导致这几种物质的同时检测较为困难，同时受到现有的提取方法的限制，蔬菜中的这几种物质的检测不准确，本专利技术的提取方法可以精确提取蔬菜中的这几种抗生素，并且可以保证较低的检出限和较好的回收率，检出限为1μg/kg，在10，50和100μg/kg3个浓度水平下进行加标回收实验平均回收率为71.5％～111％，相对标准偏差为1.25％～10.2％。优选的，所述内标溶液为环丙沙星-D8内标溶液，内标溶液的浓度为1.0μg/mL。优选的，所述酸化乙腈中的含3％甲酸。优选的，所述蔬菜样品、酸化乙腈和氯化钠的用量比例为0.5-1.5g：4.5-5.5ml：1.5-2.5g。优选的，所述硫酸镁和PSA的质量比为4-7：0.5-1.5。可以确保样品中干扰性基质和水分的去除。优选的，所述甲醇-水中，甲醇和水的体积比为3-10：94-97。优选的，质谱检测的条件为：离子源：API-ES；毛细管电压：3000V；雾化压力：30psi；干燥气温度：300℃；干燥气流量：10L/min；离子极性：正；质量扫描模式：MRM模式。优选的，目标组分MRM模式下质谱分析参数如下：优选的，高效液相色谱检测的色谱条件为：色谱柱：C182.1×150mm，5μm；流速：0.3mL/min；柱温：30℃；进样量：5μL；流动相A：水(0.1％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度洗脱程序：0-3min10-20％B，3-6min20-90％B，6.1-10min10％B。上述高效液相色谱-串联质谱检测方法在同时检测蔬菜中8种喹诺酮类药物残留中的应用。本专利技术的有益效果为：该方法操作简便快速、灵敏度高、专属性强，可实现蔬菜样品中8种喹诺酮类药物残留的高通量分析，满足蔬菜中喹诺酮类药物残留的监控要求。该方法的检出限为1μg/kg，在10，50和100μg/kg3个浓度水平下进行加标回收实验,8种喹诺酮类药物的加标回收率为71.5％～111％，相对标准偏差为1.25％～10.2％。附图说明图1为8种喹诺酮类化合物的总离子流谱图；图2为达氟沙星的提取离子谱图；图3为恩诺沙星的提取离子谱图；图4为二氟沙星的提取离子谱图；图5为环丙沙星的提取离子谱图；图6为诺氟沙星的提取离子谱图；图7为培氟沙星的提取离子谱图；图8为沙拉沙星的提取离子谱图；图9为氧氟沙星的提取离子谱图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。仪器与材料快速分离液相色谱-串联四极杆质谱仪(6410B，安捷伦科技有限公司)，超纯水仪(Simplicity，默克密理博公司)，超声波提取仪(KQ-250B，昆山市超声仪器有限公司)、漩涡混合器(VORTEX-5，江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司)。二氟沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙购于农业部环境保护科研监测所；达氟沙星、培氟沙星购自德国Dr.Ehrenstorfer公司；甲醇、乙腈、甲酸为色谱纯试剂；其它试剂均为分析纯试剂。实验方法色谱条件色谱柱：C182.1×150mm，5μm；流速：0.3mL/min；柱温：30℃；进样量：5μL；流动相A：水(0.1％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度洗脱程序：0-3min10-20％B，3-6min20-90％B，6.1-10min10％B。质谱条件离子源：API-ES；毛细管电压：3000V；雾化压力：30psi,；干燥气温度：300℃；干燥气流量：10L/min；离子极性：正；质量扫描模式：MRM模式其它质谱参数见表1所示。表1喹诺酮类药物残留的优化质谱条件(带*者为定量离子)样品处理称取匀浆后蔬菜样品1.00g(精确到0.01g)，加入50μL环丙沙星-D8内标溶液(浓度1.0μg/mL)后加5mL乙腈(含3％甲酸)振荡混匀，超声10min，加2.0g氯化钠振荡2min，5000r/min离心5min。上清液转移至1本文档来自技高网...

【技术保护点】
蔬菜中8种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱‑串联质谱检测方法，其特征在于：包括如下步骤：称取匀浆后蔬菜样品，在蔬菜样品中加入内标溶液，然后在蔬菜样品中加入酸化乙腈提取，提取完毕加入氯化钠振荡后离心，将上清液用硫酸镁除水和PSA吸附净化后，将上清液用氮气吹干，然后用甲醇‑水复溶，过滤后利用高效液相色谱‑串联质谱法进行检测。

【技术特征摘要】
1.蔬菜中8种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：包
括如下步骤：称取匀浆后蔬菜样品，在蔬菜样品中加入内标溶液，然后在蔬菜样品中加入酸
化乙腈提取，提取完毕加入氯化钠振荡后离心，将上清液用硫酸镁除水和PSA吸附净化后，
将上清液用氮气吹干，然后用甲醇-水复溶，过滤后利用高效液相色谱-串联质谱法进行检
测。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述8种喹诺
酮类药物为二氟沙星、达氟沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、培氟沙星、环丙沙星和诺
氟沙星。
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述内标溶
液为环丙沙星-D8内标溶液，内标溶液的浓度为1.0μg/mL。
4.根据权利要求1所述的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述酸化乙
腈中的含3％甲酸。
5.根据权利要求1所述的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述蔬菜样
品、酸化乙腈和氯化钠的用量比例为0.5-1.5g：4.5-5.5ml：1.5-2.5g。
6.根据权利要求1所述的高效液相色谱-...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓利，赵汝松，苑金鹏，王珊珊，陈相峰，陈跃，宁凡盛，李磊，赵金，
申请(专利权)人：山东省分析测试中心，
类型：发明
国别省市：山东;37