基于量效色卡的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法技术

基于量效色卡的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，所述质量控制方法通过气滞胃痛颗粒指纹图谱的建立、气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用药效评价，评价了气滞胃痛颗粒质量与药效相关性，建立量效关系方程，成功构建了气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用量效色卡，实现了通过检测气滞胃痛颗粒中特定成分相对峰面积，即可将其抗炎镇痛药效以“色卡”形式直观反映出来，可用于评价气滞胃痛颗粒发挥抗溃疡作用的程度及其质量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物质量控制方法，尤其涉及一种用“色卡”软件直观反映量效关系的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法。
技术介绍
中药复方制剂质量控制一直是困扰中药制剂质量监控和走向国际市场的难点和热点问题，也是中药现代化的重要基础和关键。我国中药复方制剂质量标准经历了从无到有、从简单到逐步完善的过程，现在依旧在不断探索之中。2005年版《中华人民共和国药典》中，薄层色谱法广泛用于复方制剂的鉴别；高效液相色谱法成为含量测定的主流。在量化指标方面，也由测定指标性成分向测定活性成分过渡，由测定单一成分向测定多种成分过渡。其中，指纹图谱技术的出现，为解决复方制剂成分复杂问题带来了希望。然而，脱离成分的有效活性和安全活性来考虑指标成分含量测定的指纹图谱检测方法，虽然分析方法先进，但由于其无法表达中药材及中药复方的药效信息，所以大多数研究人员仅把它作为一种简单的质量鉴别手段。气滞胃痛颗粒由柴胡、延胡索（炙）、枳壳、香附（炙）、白芍、炙甘草6味中药制成，具有舒肝理气，和胃止痛的作用。临床用于肝郁气滞，胸痞胀满，胃脘疼痛。袁荭等的临床实验表明气滞胃痛颗粒有较好的抗炎作用，张亚兵等用气滞胃痛颗粒治疗反流性胃炎，也取得了较好的治疗效果。目前，对气滞胃痛颗粒的质量控制已进行了较多的研究，申请人前期已针对气滞胃痛颗粒的质量控制方法进行了专利保护（气滞胃痛颗粒全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，专利号201210223306.4），然而单纯的质量控制方法仅从其化学成分上对其进行规范，而这些化学成分是否与其药效相关并不可知，故本专利在其基础上，针对气滞胃痛颗粒抗炎镇痛药效，建立了一种基于“量效色卡”的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，采用“色卡”这种更为直观的方式，从药效的角度评价气滞胃痛颗粒的质量。
技术实现思路
针对上述问题，基于“量效色卡”的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，通过该方法可以应用高效液相色谱法检测的结果评价气滞胃痛颗粒发挥抗炎镇痛作用的药效，为中药复方质量控制开辟新的思路。为实现本专利技术的上述目的，本专利技术采用如下技术方案。本专利技术提供一种基于“量效色卡”的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，具体步骤为：步骤一、气滞胃痛颗粒指纹图谱的建立：供试品溶液的制备：气滞胃痛颗粒中6味药材柴胡、延胡索、枳壳、香附、甘草按0～10g，白芍按0～15g对用量进行20次拉丁超立方随机抽取，得到20个不同比例的药材配伍组，将各个配伍组药材混匀，置圆底烧瓶中，20倍重量水回流提取2h，滤过，挥干，定容至250mL，取2mL供试品溶液，加入对乙酰氨基酚对照品200μL（浓度为0.1240mg/mL），作为内标液。其余供试品溶液置水浴锅中挥干，计算出膏率后，留作抗炎镇痛药效学实验用。色谱条件：色谱柱AgilentTC-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相0.2‰甲酸水（A）-乙腈（B）；流速1.0mL·min-1；柱温为25℃；检测器波长230nm，254nm，283nm，365nm；进样量15μL；流动相梯度洗脱参数为：时间0min、流动相A95%、流动相B5%；时间10min、流动相A90%、流动相B10%；时间61min、流动相A63%、流动相B27%；时间70min、流动相A60%、流动相B40%；时间90min、流动相A50%、流动相B50%。供试品全时段四波长融合图谱建立：取2mL供试品溶液，加入200μL对乙酰氨基酚作为内标液（浓度为0.1240mg/mL）。以对乙酰氨基酚为内标物，采用高效液相色谱法，利用二极管阵列（DAD）检测器，建立20个配伍组的指纹图谱，采用数据处理软件对210nm，230nm，254nm，283nm，365nm四个波长图谱数据进行处理，获得同时反映四个波长信息的全时段四波长融合图谱和一组图谱文件，并确定38个共有峰。步骤二、气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用药效评价：小鼠单核巨噬细胞RAW264.7给予含药血浆，以细胞培养液上清TNF-α、IL-6和NO含量为检测指标，计算药效综合评分。所述含药血浆的制备方法：将清洁级SD大鼠100只（200~220g），随机分为20组，每组5只。配伍组灌胃给予拉丁超立方设计20组不同配比药材的混悬溶液（灌胃量=各组生药量×出膏率×70kg×0.018/大鼠体重），每日两次，每次间隔12h，连续3d。大鼠取血前12h禁食不禁水，末次灌胃1h后，无菌摘取大鼠眼球取血适量，置2mL离心管中，静置30min，于高速离心机中，3000r·min-1离心15min，无菌分离血清，合并同组血清，混匀。经56℃、30min灭活处理后，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，置-20℃保存备用。所述MTT药效检测方法：将实验细胞分为：阴性对照组（不造模，不给药）、模型组（造模，不给药）、气滞胃痛颗粒组、20个配伍组（造模，给含药血清）和空白孔（调零孔），每组设5个复孔。处理过程如下：取对数生长期、生长状态良好的细胞1瓶，调整细胞浓度为1×105个·mL-1，接种于96孔培养板，每孔100μL，继续培养约24h，待细胞贴壁完全。对照组和模型组加入10%空白血清100μL培养，20个配伍组分别加入各自的10%含药血清100μL。给药2h后模型组和配伍组加LPS(终浓度为1mg·L-1)构建炎症模型，各组细胞经分别处理后于37℃、5%CO2培养箱中继续培养24h，收集上清液，-20℃冰箱保存备用。细胞采用MTT法，酶标仪492nm处扫描，测定吸光值（OD）。步骤三、气滞胃痛颗粒质量与药效相关性评价。利用灰色关联分析方法，对20个药材配伍组38个共有峰的量化峰面积与抗炎镇痛药效进行关联度分析，得到17个色谱峰，排除色谱峰峰面积低于100的色谱峰，筛选出11个与药效相关的共有峰。步骤四、气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用“量效色卡”的构建。计算筛选出的11个与药效相关共有峰的相对保留时间、相对峰面积，确定峰归属，计算与药效相关的各色谱峰的相对峰面积与关联度的乘积，并加和，以最大值为10换算至百分内，建立量效关系方程为：Y药效评分=（0.9951X1+0.9872X2+0.9823X3+0.9756X4+0.9722X5+0.9612X6+0.9530X7+0.9432X8+0.9387X9+0.9375X10+0.9168X11）/10×100。其中Y药效评分为气滞胃痛颗粒抗炎镇痛的药效评分，X1-11分别为11个色谱峰的相对峰面积。应用VisualBasic（VB）编程语言对以上过程进行程序设计，编制“量效色本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于量效色卡的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，其特征在于该方法按如下步骤进行：（1）气滞胃痛颗粒指纹图谱的建立：对气滞胃痛颗粒中六味中药的用量进行随机抽样，共得20组混合药材，对其进行提取，采用高效液相色谱法检测；（2）气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用药效评价：小鼠单核巨噬细胞RAW264.7给予含药血浆，以细胞培养液上清TNF‑α、IL‑6和NO含量为检测指标，计算药效综合评分；（3）气滞胃痛颗粒质量与药效相关性评价：对20个不同比例药材组共有峰的量化峰面积与气滞胃痛颗粒抗炎镇痛药效进行关联度分析，得到气滞胃痛颗粒中不同化合物与其抗炎镇痛作用的相关系数；（4）气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用“量效色卡”的构建：筛选与气滞胃痛颗粒发挥抗炎镇痛作用相关的化合物，应用编程语言对色卡软件进行程序设计，构建气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用量效色卡。

【技术特征摘要】
1.基于量效色卡的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，其特征在于该方法按如下步
骤进行：
（1）气滞胃痛颗粒指纹图谱的建立：对气滞胃痛颗粒中六味中药的用量进行随机抽样，
共得20组混合药材，对其进行提取，采用高效液相色谱法检测；
（2）气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用药效评价：小鼠单核巨噬细胞RAW264.7给予含药血浆，
以细胞培养液上清TNF-α、IL-6和NO含量为检测指标，计算药效综合评分；
（3）气滞胃痛颗粒质量与药效相关性评价：对20个不同比例药材组共有峰的量化峰面
积与气滞胃痛颗粒抗炎镇痛药效进行关联度分析，得到气滞胃痛颗粒中不同化合物与其抗
炎镇痛作用的相关系数；
（4）气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用“量效色卡”的构建：筛选与气滞胃痛颗粒发挥抗炎镇
痛作用相关的化合物，应用编程语言对色卡软件进行程序设计，构建气滞胃痛颗粒抗炎镇
痛作用量效色卡。
2.如权利要求1所述的基于量效色卡的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，其特征
在于，供试品溶液的制备方法如下：气滞胃痛颗粒中6味药材柴胡、延胡索、枳壳、香附、甘草
按0～10g，白芍按0～15g对用量进行20次拉丁超立方随机抽取，得到20个不同比例的药材
配伍组，将各个配伍组药材混匀，置圆底烧瓶中，20倍量水回流提取2h，滤过，挥干，定容至
250mL，即得。
3.如权利要求1所述的基于量效色卡的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，其特征
在于，色谱柱为AgilentTC-C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；流动相：0.2‰甲酸水
（A）-乙腈（B）；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；检测器波长：230nm，254nm，283nm，365
nm；进样量：15μL；
流动相梯度洗脱参数为：
时间0min、流动相A95%、流动相B5%；
时间10min、流动相A90%、流动相B10%；
时间61min、流动相A63%、流动相B27%；
时间70min、流动相A60%、流动相B40%；
时间90min、流动相A50%、流动相B50%。
4.如权利要求1所述的基于量...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟宪生，王帅，常馨，包永睿，张跃飞，李天娇，
申请(专利权)人：辽宁中医药大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21