一种阿苯达唑及其代谢物的检测方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种检测阿苯达唑及其代谢物的检测方法，属于药物检测技术领域。所述阿苯达唑及其代谢物的检测方法是利用2，6‑二叔丁基对甲酚和NaOH提取样品中的阿苯达唑及其代谢物，之后使用高效液相色谱质谱联用仪检测；所述2，6‑二叔丁基对甲酚的浓度为1％；所述NaOH溶液的浓度为50％。本发明专利技术的有益效果是：本方法不仅仅适用于动物肌肉，还适用于肝脏等复杂基质的检测，本发明专利技术所使用的试剂毒性小，成本低，节约时间，还能有效地减少对杂质的提取，简化净化步骤；采用高效液相色谱‑串联质谱法进行检测，相比于单一的高效液相色谱，具有灵敏度高，重复性好，检测限低的优势。

Method for detecting albendazole and its metabolite and Application

The invention discloses a method for detecting albendazole and its metabolite, belonging to the technical field of drug detection. The detection method of albendazole and its metabolites is the use of 2, 6 BHT and NaOH extracted from samples of albendazole and its metabolites, after using high performance liquid chromatography mass spectrometry detection; the concentration of 2, 6 BHT was 1%; the concentration of the NaOH solution is 50%. The beneficial effect of the invention is: this method is not only suitable for the detection of animal muscle, also applies to the liver complex matrix, toxicity of reagents used by the invention is small, low cost, time saving, can effectively reduce the extraction of impurities, simplify the purification steps; using tandem mass spectrometry were detected by high performance liquid high performance liquid chromatography, compared to single phase chromatography, has the advantages of high sensitivity, good repeatability, the advantages of low detection limit.

【技术实现步骤摘要】
一种阿苯达唑及其代谢物的检测方法及应用
本专利技术属于药物检测
，具体涉及一种阿苯达唑及其代谢物的检测方法及应用。
技术介绍
目前，检测阿苯达唑的方法中使用乙醚、乙腈等毒性大的溶剂，或者直接使用乙腈提取，这些方法不仅使样品提取不充分，而且目标化合物在提取过程中极易遭到破坏，从而影响定量结果。
技术实现思路
为了解决现有技术中的问题，本专利技术采取的技术方案是：一种阿苯达唑及其代谢物的检测方法，利用2，6-二叔丁基对甲酚和NaOH提取样品中的阿苯达唑及其代谢物，之后使用高效液相色谱质谱联用仪检测；所述2，6-二叔丁基对甲酚的浓度为1％；所述NaOH溶液的浓度为50％。在上述方案的基础上，所述阿苯达唑及其代谢物的检测方法步骤如下：1)提取纯化称取样品5.00g，加入5mL水、150μL50％NaOH溶液和1mL1％2，6-二叔丁基对甲酚，涡旋混合，再加入20mL乙酸乙酯，振荡1min超声提取20min，4000r/min离心5min，取上清液，向残渣中加入10mL乙酸乙酯重复提取一次，合并两次上清液于梨形瓶中，40℃旋蒸至干；向旋干后的梨形瓶中加入6mL乙腈饱和正己烷，振荡混匀，倒入离心管中，再向梨形瓶中加入2mL乙腈，涡旋超声1min后一并倒入离心管中，向离心管中加入6mL0.1mol/L的盐酸溶液，涡旋2min，4000r/min离心5min，除去正己烷层，备用；若乳化，超声并用吸管搅拌后离心；2)净化柱净化用5mL甲醇和5mL水平衡活化PCX固相萃取柱后，取提取液过PCX净化柱，分别用3mL水和3mL甲醇淋洗，然后用15mL体积浓度为5％氨水甲醇溶液洗脱，接收的洗脱液于40℃旋蒸至干后；分别加入1mL甲醇和1mL水，涡旋，过0.22μm尼龙滤膜，待测；3)高效液相色谱质谱联用仪检测质谱参数：离子源AJSESI源；GasTemp：325℃；GasFlow：10L/min；SheathGasTemp350℃；SheathGasflow：11L/min；液相参数：A为0.1％甲酸水溶液，B为甲醇。在上述方案的基础上，所述阿苯达唑及其代谢物的检测方法应用于检测动物源性食品中的阿苯达唑及其代谢物。在上述方案的基础上，所述动物源性食品为肌肉、蛋类、乳类、肝脏和肾脏。本专利技术的有益效果：本专利技术方法中用2，6-二叔丁基对甲酚和NaOH提取阿苯达唑及其代谢物，毒性较小；此外，阿苯达唑及其代谢物在水溶液中呈碱性，加入质量浓度为50％NaOH水溶液可使阿苯达唑及其代谢物成分子状态，利于有机试剂提取；加入质量浓度为1％2，6-二叔丁基对甲酚可以保护阿苯达唑不被氧化；乙酸乙酯为弱极性的有机试剂，其加入有利于阿苯达唑的提取且杂质提取的少；乙腈饱和正己烷用来去除样品中的油脂类杂质，加入盐酸可使阿苯达唑成离子状态有利于PCX净化柱净化；5％氨水甲醇呈强碱性，洗脱时可将PCX净化柱吸附的阿苯达唑置换下来。本专利技术的方法检测范围较广，相比于其他方法的单一基质，本方法不仅仅适用于动物肌肉而且也适用于肝脏等复杂基质的检测，众所周知，动物肝脏含有很多蛋白、脂肪、糖类、维生素和矿物质，净化不干净对目标化合物回收影响很大；本专利技术的方法使用2，6-二叔丁基对甲酚、NaOH和乙酸乙酯作为提取液，毒性小，成本低，节约时间，又能有效地减少对杂质的提取，简化净化步骤；本方法采用安捷伦PCX固相萃取小柱，也可用国产PCX小柱代替，有效降低检测成本；采用高效液相色谱-串联质谱法进行检测，相比于单一的高效液相色谱，具有灵敏度高，重复性好，检测限低的优势。附图说明图1阿苯达唑-2-氨基砜保留时间的测定，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图2阿苯达唑-2-氨基砜定量定性离子明细，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图3阿苯达唑-2-氨基砜质谱图，其中纵坐标为响应，横坐标为m/z。图4阿苯达唑亚砜保留时间的测定，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图5阿苯达唑亚砜定量定性离子明细，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图6阿苯达唑亚砜质谱图，其中纵坐标为响应，横坐标为m/z。图7阿苯达唑砜保留时间的测定，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图8阿苯达唑砜定量定性离子明细，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图9阿苯达唑砜质谱图，其中纵坐标为响应，横坐标为m/z。图10阿苯达唑保留时间的测定，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图11阿苯达唑定量定性离子明细，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间。图12阿苯达唑质谱图，其中纵坐标为响应，横坐标为m/z。图13阿苯达唑-2-氨基砜的标准曲线，其中纵坐标为峰面积响应，横坐标为阿苯达唑-2-氨基砜浓度。图14阿苯达唑亚砜的标准曲线，其中纵坐标为峰面积响应，横坐标为阿苯达唑亚砜浓度。图15阿苯达唑砜的标准曲线，其中纵坐标为峰面积响应，横坐标为阿苯达唑砜浓度。图16阿苯达唑的标准曲线，其中纵坐标为峰面积响应，横坐标为阿苯达唑浓度。图17阿苯达唑及其代谢物定量离子S/N图，其中纵坐标为响应，横坐标为保留时间，从上到下依次为阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、阿苯达唑。具体实施方式在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本专利技术。以下实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。实施例1.标准溶液的配制1.1储备液的配制分别称量10.00mg阿苯达唑、阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜的标准品，溶解到甲醇中，定容到10mL，作为1000mg/L的储备液(置于-18℃冷藏保存)。1.2标准中间液的配制分别准确量取1mL阿苯达唑、阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜标准品的储备液，溶解到甲醇中，定容到10mL，作为100mg/L的标准中间液(置于-18℃冷藏保存)。1.3标准工作曲线的配制用标准中间液配制成1、5、10、20、50、100μg/L的标液(用甲醇+水(v/v＝1:1)定容)，作为工作曲线用的标准溶液。2.样品处理2.1提取纯化称取样品5.00g，加入5mL水、150μL50％NaOH溶液和1mL1％2，6-二叔丁基对甲酚，涡旋混合，再加入20mL乙酸乙酯，振荡1min超声提取20min，4000r/min离心5min，取上清液，向残渣中加入10mL乙酸乙酯重复提取一次，合并两次上清液于梨形瓶中，40℃旋蒸至干；向旋干后的梨形瓶中加入6mL乙腈饱和正己烷，振荡混匀，倒入离心管中，再向梨形瓶中加入2mL乙腈，涡旋超声1min后一并倒入离心管中，向离心管中加入6mL0.1mol/L的盐酸溶液，涡旋2min，4000r/min离心5min，除去正己烷层，备用；若乳化，超声并用吸管搅拌后离心；2.2净化柱净化用5mL甲醇和5mL水平衡活化PCX固相萃取柱后，取提取液过PCX净化柱，分别用3mL水和3mL甲醇淋洗，然后用15mL体积浓度为5％氨水甲醇溶液洗脱，接收的洗脱液于40℃旋蒸至干后；分别加入1mL甲醇和1mL水，涡旋，过0.22μm尼龙滤膜，待测；3.高效液相色谱质谱联用仪检测使用的高效液相色谱质谱联用仪为AgilentLC-MSMS1290/6460；质谱参数：离子源AJSESI源；Gas本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种阿苯达唑及其代谢物的检测方法，其特征在于：利用2，6‑二叔丁基对甲酚和NaOH提取样品中的阿苯达唑及其代谢物，之后使用高效液相色谱质谱联用仪检测；所述2，6‑二叔丁基对甲酚的浓度为1％；所述NaOH溶液的浓度为50％。

【技术特征摘要】
1.一种阿苯达唑及其代谢物的检测方法，其特征在于：利用2，6-二叔丁基对甲酚和NaOH提取样品中的阿苯达唑及其代谢物，之后使用高效液相色谱质谱联用仪检测；所述2，6-二叔丁基对甲酚的浓度为1％；所述NaOH溶液的浓度为50％。2.根据权利要求1所述阿苯达唑及其代谢物的检测方法，其特征在于：步骤如下：1)提取纯化称取样品5.00g，加入5mL水、150μL50％NaOH溶液和1mL1％2，6-二叔丁基对甲酚，涡旋混合，再加入20mL乙酸乙酯，振荡1min超声提取20min，4000r/min离心5min，取上清液，向残渣中加入10mL乙酸乙酯重复提取一次，合并两次上清液于梨形瓶中，40℃旋蒸至干；向旋干后的梨形瓶中加入6mL乙腈饱和正己烷，振荡混匀，倒入离心管中，再向梨形瓶中加入2mL乙腈，涡旋超声1min后一并倒入离心管中，向离心管中加入6mL0.1mol/L的盐酸溶液，涡旋2min，4000r/m...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘刚，韩肖，周凯，陈雷，
申请(专利权)人：潍坊海润华辰检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37