一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，采用高效液相色谱串联质谱技术检测经预处理的校正标样和经预处理的血浆样品，利用内标法定量，以福沙匹坦和阿瑞匹坦校正标样的浓度为X轴，福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标的峰面积比值为Y轴，建立标准曲线方程，将血浆样品中福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标峰面积的比值代入标准曲线方程中，计算福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度。本发明专利技术方法快速、准确、灵敏度高、特异性强、操作简便，适合于同时测定血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物分析
，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法。
技术介绍
阿瑞匹坦(Aprepitant)口服制剂是美国FDA批准的首个P物质/NK-1受体拮抗剂。在临床上，阿瑞匹坦与其他止吐药联用可以预防抗癌药及化疗药引起的急性和延迟性恶心、呕吐。但是，对于有严重呕吐症状的病人来说，连续服用阿瑞匹坦制剂难以实现。福沙匹坦双葡甲胺(Fosaprepitant dimeglumine)是阿瑞匹坦(Aprepitant)水溶性的前体药物，静滴后能在体内能迅速转化为阿瑞匹坦。因此，同时测定体内福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，评价这两个化合物在机体内的药代动力学过程，对于福沙匹坦制剂的研发、评价其质量有至关重要的作用。由于福沙匹坦和阿瑞匹坦性质差异大，且福沙匹坦中特殊的磷酸基团结构，目前测定生物样品中这两种化合物的方法为：分别用不同的方法提取分离并测定。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，采用高效液相色谱串联质谱技术检测经预处理的校正标样和经预处理的血浆样品，利用内标法定量，以福沙匹坦和阿瑞匹坦校正标样的浓度为X轴，福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标的峰面积比值为Y轴，建立标准曲线方程，将血浆样品中福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标峰面积的比值代入标准曲线方程中，计算福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，具体色谱条件为：(1)高效液相色谱条件：流动相A:10mM乙酸铵和0.02g/100mL EDTA水溶液；流动相B:乙腈；色谱柱：Waters XTerra MS C18,2.1×50mm，3.5μm；采用梯度洗脱方式，见表1；柱温：30℃；进样量5μL；表1流动相梯度洗脱参数表2福沙匹坦、阿瑞匹坦和内标的质谱参数(2)质谱条件：采用ESI离子源、正离子MRM模式检测，离子源参数如下：CAD:4；CUR:10；GS1:60；GS2:50；IS:5000；TEM:600；主要化合物其他相关参数见表2。其中，所述的血浆为人或动物的血浆。其中，所述的经预处理的血浆样品按照如下方法制备得到：取血浆样品100μL，加入甲醇和稀释液各10μL，加入内标0.999μg·mL-1格列苯脲30μL，加入乙腈300μL，涡旋1min混匀，12000rmp 10min，4℃离心，吸取上清液，即得。其中，经预处理的校正标样按如下方法制备得到：精密称取10.89mg福沙匹坦双葡甲胺对照品至10mL容量瓶中，加入稀释液定容至刻度，混匀得到0.666mg·mL-1福沙匹坦标准曲线储备液；精密量取适量储备液以稀释液稀释至浓度为100μg·mL-1福沙匹坦溶液；再以稀释液依次稀释，配成浓度分别为
0.200μg·mL-1、0.400μg·mL-1、1.00μg·mL-1、2.50μg·mL-1、5.00μg·mL-1、20.0μg·mL-1和50.0μg·mL-1的福沙匹坦标准曲线工作液，于-20℃冰箱中保存备用；精密称取12.16mg阿瑞匹坦对照品至10mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混匀得到1.216mg·mL-1阿瑞匹坦标准曲线储备液，于-20℃冰箱中保存备用；精密量取适量储备液以甲醇稀释至浓度为50.0μg·mL-1阿瑞匹坦溶液；再以甲醇液依次稀释，配成浓度分别为0.100μg·mL-1、0.200μg·mL-1、0.400μg·mL-1、1.00μg·mL-1、2.50μg·mL-1、10.0μg·mL-1和20.0μg·mL-1的阿瑞匹坦标准曲线工作液，于-20℃冰箱中保存备用；分别精密吸取10μL各浓度的福沙匹坦和阿瑞匹坦标准曲线工作液置于1.5mL EP管中，向其中分别加入100μL空白血浆，涡旋混匀，即得含福沙匹坦和阿瑞匹坦浓度分别为0.0200μg·mL-1和0.0100μg·mL-1、0.0400μg·mL-1和0.0200μg·mL-1、0.100μg·mL-1和0.0400μg·mL-1、0.250μg·mL-1和0.100μg·mL-1、0.500μg·mL-1和0.250μg·mL-1、2.00μg·mL-1和1.00μg·mL-1、5.00μg·mL-1和2.00μg·mL-1、10.0μg·mL-1和5.00μg·mL-1的校正标样。其中10.0μg·mL-1和5.00μg·mL-1的校正标样是由100μg·mL-1福沙匹坦溶液和50.0μg·mL-1阿瑞匹坦溶液配制而成。其中，所述的稀释液按如下方法制备得到：取磷酸二氢铵5.76g，加1000mL水使溶解，用氨水调节pH值至9.0得磷酸盐缓冲液，再按照8:2的体积比将磷酸盐缓冲液与乙腈混合，即得稀释液。有益效果：本专利技术建立了一种同时测定血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦浓度的方法，快速、准确、灵敏度高、操作简便。通过该方法测定人静脉滴注福沙匹坦双葡甲胺后血浆中各时点的福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，计算药代动力学参数，评价福沙匹坦和阿瑞匹坦在人体内的药代动力学特征，为福沙匹坦双葡甲胺的药物研制提供合理的依据。附图说明图1为血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的LC-MS/MS色谱图其中A为空白血浆；B为校正标样最低定量限样品(福沙匹坦：0.02μg·mL-1，阿瑞匹坦：0.01μg·mL-1)；C为校正标样BQ-4样品(福沙匹坦：0.5μg·mL-1，阿瑞匹坦：0.25μg·mL-1)；D为实际血浆样品；其中1代表福沙匹坦；2代表阿瑞匹坦；3代表内标格列苯脲。具体实施方式根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。实施例1：人血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦浓度的同时测定。一、实验材料与仪器材料：福沙匹坦双葡甲胺对照品：江苏豪森药业股份有限公司，批号：RS20140413，含量：99.8％。阿瑞匹坦对照品：江苏豪森药业股份有限公司，批号：RS20140830，含量：99.8％。格列苯脲(内标)对照品：中国药品生物制品检定所，批号：100135-200404，供含量测定用。乙腈：Merck Company，HPLC级。甲醇：Merck Company，HPLC级。氨水：上海久亿化学试剂有限公司，分析纯。乙酸铵：ROE Scientific Inc.,HPLC级。EDTA：东京化成工业株式会社。磷酸二氢铵：成都市科龙化工试剂厂，分析纯。水由Millipore Milli-Q Advantage A10超纯水机制备。仪器：API 4000LC-MS/MS液质联用仪，含：(1)Pump Agilent 1260G1312A；(2)Column Oven Agilent 1260G1316A；(3)Auto Sampler Agilent 1260G1367E；(4)Mass spectrometer API4000；(5)Value Valco 2-Position，由Analyst 1.6Software控制。WH-2微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂)。CPA225D电子天平(德国赛多利斯公司)。Millipo本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，采用高效液相色谱串联质谱技术检测经预处理的校正标样和经预处理的血浆样品，利用内标法定量，以福沙匹坦和阿瑞匹坦校正标样的浓度为X轴，福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标的峰面积比值为Y轴，建立标准曲线方程，将血浆样品中福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标峰面积的比值代入标准曲线方程中，计算福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，具体色谱条件为：(1)高效液相色谱条件：流动相A:10mM乙酸铵和0.02g/100mL EDTA水溶液；流动相B:乙腈；色谱柱：Waters XTerra MS C18,2.1×50mm，3.5μm；采用梯度洗脱方式，见表1；柱温：30℃；进样量5μL；表1流动相梯度洗脱参数表2福沙匹坦、阿瑞匹坦和内标的质谱参数(2)质谱条件：采用ESI离子源、正离子MRM模式检测，离子源参数如下：CAD:4；CUR:10；GS1:60；GS2:50；IS:5000；TEM:600；主要化合物其他相关参数见表2。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，采用高效液相色谱串联质谱技术检测经预处理的校正标样和经预处理的血浆样品，利用内标法定量，以福沙匹坦和阿瑞匹坦校正标样的浓度为X轴，福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标的峰面积比值为Y轴，建立标准曲线方程，将血浆样品中福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标峰面积的比值代入标准曲线方程中，计算福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，具体色谱条件为：(1)高效液相色谱条件：流动相A:10mM乙酸铵和0.02g/100mL EDTA水溶液；流动相B:乙腈；色谱柱：Waters XTerra MS C18,2.1×50mm，3.5μm；采用梯度洗脱方式，见表1；柱温：30℃；进样量5μL；表1流动相梯度洗脱参数表2福沙匹坦、阿瑞匹坦和内标的质谱参数(2)质谱条件：采用ESI离子源、正离子MRM模式检测，离子源参数如下：CAD:4；CUR:10；GS1:60；GS2:50；IS:5000；TEM:600；主要化合物其他相关参数见表2。2.根据权利要求1所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在
\t于，所述的血浆为人或动物的血浆。3.根据权利要求1所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，所述的经预处理的血浆样品按照如下方法制备得到：取血浆样品100μL，加入甲醇和稀释液各10μL，加入内标0.999μg·mL-1格列苯脲30μL，加入乙腈300μL，涡旋1min混匀，12000rmp 10min，4℃离心，吸取上清液，即得。4.根据权利要求1所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，经预处理的校正标样按如下方法制备得到：精密称取10.89mg福沙匹坦双葡甲胺对照品至10mL容量瓶中，加入稀释液定容至刻度，混匀得到0.666mg·mL-1福沙匹坦标准曲线储备液；精密量取适量储备液以稀释液稀释至浓度为100μg·mL-...

【专利技术属性】
技术研发人员：许美娟，储继红，吴婷，居文政，李长印，张军，刘史佳，戴国梁，
申请(专利权)人：江苏省中医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32