一株有效去除胆固醇和自由基的植物乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物筛选与应用技术领域，具体提供了一株新型植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）及其应用。所述植物乳杆菌已于2016年3月22日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2016137。该菌株对胃酸和胆汁盐具有很强的耐受性，其在胃酸中的存活率高达165.41%，而且能有效去除胆固醇和自由基，抗氧化能力强。通过该菌株发酵制备得到的乳酸菌饮料不仅能大幅增加肠道中益生菌的数量，改善胃肠道的消化与吸收功能，还能有效降低人体血液中胆固醇的含量，清除自由基，增强机体的免疫力，市场前景广阔。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物筛选与应用
，具体涉及一株有效去除胆固醇和自由基的植物乳杆菌及其应用。
技术介绍
乳酸菌（lacticacidbacteria，LAB）是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称，在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性。乳酸菌也广泛存在于人体和动物肠道、许多食品、物料及少数临床样品中，不仅可以提高食品的营养价值，改善食品风味，提高食品保藏性和附加值，而且乳酸菌的特殊生理活性和营养功能，正日益引起人们的重视。大量研究表明，乳酸菌能够调节机体胃肠道正常菌群、保持微生态平衡，提高食物消化率和生物价，降低血清胆固醇，控制内毒素，抑制肠道内腐败菌生长繁殖和腐败产物的产生，制造营养物质，刺激组织发育，从而对机体的营养状态、生理功能、细胞感染、药物效应、毒性反应、免疫反应、肿瘤发生、衰老过程和突然的应急反应等产生作用。由此可见，乳酸菌的生理功能与机体的生命活动息息相关。乳酸菌主要应用于发酵型酸奶、乳酸菌饮料、发酵型肉制品、医药保健品等领域。乳酸菌产业已成为保健食品和医药领域发展最快的行业之一，全球市场规模已超过3000亿美元。我国乳酸菌产业的总规模已经超过了160亿元，平均年增长幅度为20%左右。随着市场的进一步成熟和益生菌概念的普及，同发达国家一样，我国的益生菌发酵乳制品将会成为乳品行业中增长速度最快的产品。目前我国益生菌乳产品年销售总额已超过10亿元人民币，酸奶的产量以40%的速度增长，益生菌酸奶和乳酸菌饮料的增长幅度高于酸奶的增长。乳酸菌的性能直接决定了其发酵制品的品质，因此，建立乳酸菌菌种资源库，并在此基础上筛选和开发益生乳酸菌菌种显得尤为重要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株新型植物乳杆菌及包含该菌株的益生菌制剂。申请人从健康成年人粪便中分离获得一株性能优良的植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum），该菌株对胃酸和胆汁盐具有很强的耐受性，且能有效去除胆固醇和自由基，抗氧化能力强，应用前景广阔。本专利技术一方面提供了一株植物乳杆菌DY-1（LactobacillusplantarumDY-1），已于2016年3月22日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2016137。所述植物乳杆菌在药品、食品或保健品制备中的应用。本专利技术还提供了一种乳酸菌饮料，是通过将上述植物乳杆菌进行发酵制备得到的。所述乳酸菌饮料中植物乳杆菌的活菌数为10～30亿/mL。本专利技术还提供了上述乳酸菌饮料的制备方法，具体包括：按发酵量的3-10%将上述植物乳杆菌接种至液体发酵培养基中；37℃发酵6～10小时；将发酵液进行无菌灌装、包装，即得乳酸菌饮料。所述液体发酵培养基的各组分及其质量比分别为：红糖6.1%、葡萄糖5.5%、乳清粉0.07%、土豆泥0.04%、K2HPO40.03%、KH2PO40.02%和MgSO40.03%。所述液体发酵培养基的初始pH值为5.5-6.5。本专利技术提供的植物乳杆菌具有非常强的耐胃酸、耐胆汁盐能力，尤其是其在胃酸中的存活率高达165.41%，明显高于对照菌株，说明该菌株在胃酸中不但能够存活，还有一定程度的繁殖。所述植物乳杆菌能有效去除胆固醇，对MRS培养基中胆固醇的去除率达到88.5%，其发酵液上清液和无细胞提取物均具有较强的抗氧化能力，能有效清除自由基，对DPPH·的清除率分别高达96.9%和84.4%，取得了意料不到的技术效果。此外，本专利技术提供的乳酸菌饮料不仅能大幅增加肠道中益生菌的数量，改善胃肠道的消化与吸收功能，还能有效降低人体血液中胆固醇的含量，清除自由基，增强机体的免疫力，市场前景广阔。具体实施方式除了本专利技术筛选出的菌株外，实施本专利技术所用的各种原料、生产设备均可选自市售的任意一种，并没有特殊的限定。以下实施例是为了更好地说明阐述本
技术实现思路
，本领域相关的技术人员可以借助实施例更好地理解和掌握本专利技术。但是，本专利技术的保护和权利要求范围不限于所提供的案例。实施例1植物乳杆菌的筛选与鉴定1、筛选（1）取多名健康成年人新鲜粪便于内置有玻璃珠的灭菌三角瓶中，加入10倍重量PBS缓冲液置于摇床中震荡30min，然后收集到离心管中2000g离心5min收集上清；（2）将上述上清5000g离心10min收集沉淀，用PBS缓冲液反复洗涤两次收集沉淀；（3）向上述收集沉淀的离心管中加入原上清等体积的人工胃液充分悬浮沉淀，37℃水浴30min；（4）将上述悬液5000g离心10min收集沉淀，用PBS缓冲液反复洗涤两次收集沉淀；（5）向上述收集沉淀的离心管中加入原上清等体积的人工肠液充分悬浮沉淀，37℃水浴30min；（6）将上述悬液5000g离心10min收集沉淀，用PBS缓冲液反复洗涤两次收集沉淀，最后用少量PBS缓冲液充分悬浮沉淀；（7）将上述悬液后涂布于MRS培养基上（葡萄糖20g，牛肉膏10g，酵母浸膏5g，蛋白胨10g，无水醋酸钠5g，碳酸钙1g，吐温-801mL，K2HPO42g，琼脂15-20g，盐液A5mL，蒸馏水1000mL，pH6.5），37℃培养24～48小时，挑取平板上带有透明圈的菌落分别划线接种到MRS培养基上，37℃培养24～48小时，重复操作几次得到的纯菌种进行保存。2、鉴定对上述筛选的乳酸菌分别进行耐胃酸、耐胆汁盐能力检测，对胃酸、胆汁盐耐受性都相对较强的菌株进行分子生物学方法鉴定，测得其16SrDNA序列。然后将对胃酸和胆汁盐耐受性最强的菌株DY-1的16SrDNA序列通过NCBIBLAST进行比对分析，结果显示该序列与植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）的16SrDNA序列同源性超过99%，因此本专利技术筛选到的DY-1菌株为植物乳杆菌。申请人将该菌株命名为植物乳杆菌DY-1（LactobacillusplantarumDY-1）。并已于2016年3月22日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2016137。实施例2植物乳杆菌DY-1对胃酸和胆汁盐的耐受性1、耐胃酸性能检测方法：取活化后的植物乳杆菌DY-1菌悬液40ml加入50ml离心管中，离心（5000g、5min）收集菌体，用PBS缓冲液洗涤两次后向离心管中加入40ml人工胃液（配制方法借鉴中华人民共和国兽药典的方法，取稀盐酸16.4ml加水摇匀稀释至1000ml，用浓盐酸或10%的NaOH调整pH为3.0，于121℃灭菌30m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株植物乳杆菌，其特征在于，所述植物乳杆菌的保藏号为CCTCC NO:M 2016137。

【技术特征摘要】
1.一株植物乳杆菌，其特征在于，所述植物乳杆菌的保藏号为CCTCCNO:M2016137。
2.权利要求1所述的植物乳杆菌在药品、食品或保健品制备中的应用。
3.一种乳酸菌饮料，其特征在于，所述的乳酸菌饮料是通过将权利要求1所述的植物乳
杆菌进行发酵制备得到的。
4.如权利要求3所述的乳酸菌饮料，其特征在于，所述乳酸菌饮料中植物乳杆菌的活菌
数为10～30亿/mL。
5.权利要求3或4所述乳酸菌饮料的制备方法，其特征在于，所述制备方法的具体步骤
包括：按...

【专利技术属性】
技术研发人员：尤升波，
申请(专利权)人：济南康多宝生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37