一种植物乳杆菌及其在制备预防便秘的食品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了保藏编号为CCTCC NO：M2016747的植物乳杆菌YS1(Lactobacillus plantarum YS1)及其在制备预防便秘的食品中的应用，不仅扩大了植物乳杆菌YS1的应用范围，提高了其应用价值，而且给便秘的预防带来了新的希望。

Lactobacillus plantarum and its application in preparing food for preventing constipation

The invention discloses a preservation number of Lactobacillus plantarum YS1 CCTCC NO:M2016747 (Lactobacillus plantarum YS1) and its application in the preparation of constipation in food, not only to expand the scope of application of Lactobacillus plantarum YS1, improves the application value, but also for the prevention of constipation brings new hope.

【技术实现步骤摘要】
一种植物乳杆菌及其在制备预防便秘的食品中的应用
本专利技术属于微生物
，涉及一种植物乳杆菌及其在制备食品中的应用。
技术介绍
牦牛酸乳是青藏高原藏族地区的一种自然发酵乳制品，含有丰富的营养成分，具有抗氧化、降低胆固醇、调节免疫力的作用。由于特殊的自然发酵条件，包括发酵原料乳、发酵温度、发酵时间、发酵器皿，特别是特殊的发酵微生物组成，造成牦牛酸乳具有特殊风味及品质。当每周排便次数低于3次的时候会被视为处于便秘状态，当次数低于1次视为严重的便秘状态，是一种威胁人体健康，特别是对结肠健康具有较大影响的复杂症状。便秘通常不被视为疾病，大多数情况可以通过日常饮食和习惯的调节预防便秘。
技术实现思路
本专利技术的目的在于对牦牛酸乳中的微生物进行分离鉴定，并对其活性和应用进行研究。经研究，本专利技术提供如下技术方案：1.植物乳杆菌YS1(LactobacillusplantarumYS1)，保藏编号为CCTCCNO：M2016747。2.植物乳杆菌YS1在制备预防便秘的食品中的应用。本专利技术对青海玉树藏族自治州的牦牛酸乳中的微生物进行了分离鉴定，将其中一株植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)命名为YS1，于2016年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学)，保藏编号为CCTCCNO：M2016747。活性炭诱导便秘模型小鼠研究结果显示，植物乳杆菌YS1的抗胃酸和胆盐能力强于保加利亚乳杆菌，能够抑制便秘造成的小鼠体重下降，粪便重量、颗粒数和含水量下降，同时可以提高活性炭在小肠中的推进率，减少排出首粒黑便的时间，还能使便秘小鼠的血清胃动素(MTL)、胃泌素(Gas)、内皮素(ET)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、P物质(SP)和血管活性肠肽(VIP)血清水平提高，生长抑素(SS)水平下降。RT-PCR实验结果进一步显示，植物乳杆菌YS1可以上调便秘小鼠小肠组织中c-Kit、SCF、GDNFmRNA表达，下调TRPV1、NOSmRNA表达。高浓度的植物乳杆菌YS1显示出更好的作用，且显著优于同浓度的保加利亚乳杆菌。这些实验结果证明，植物乳杆菌YS1可以有效的抑制便秘，能够用于制备预防便秘的食品。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种植物乳杆菌YS1，其可以有效的抑制便秘，且效果显著优于常用的保加利亚乳杆菌，能够用于制备预防便秘的食品，不仅扩大了植物乳杆菌YS1的应用范围，提高了其应用价值，而且给便秘的预防带来了新的希望。附图说明图1为植物乳杆菌YS1的基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图，其中M为λDNA/HindⅢMarker，1为植物乳杆菌YS1的基因组DNA。图2为植物乳杆菌YS1的16SrDNA基因片段PCR扩增结果，其中M为DNAMarker，C为阴性对照，1为植物乳杆菌YS1的16SrDNA基因片段PCR扩增产物。图3为植物乳杆菌YS1对活性炭诱导便秘小鼠体重的影响。图4为植物乳杆菌YS1对活性炭诱导便秘小鼠首粒黑便排出时间的影响。图5为植物乳杆菌YS1对活性炭诱导便秘小鼠小肠组织中c-Kit和SCFmRNA表达的影响。图6为植物乳杆菌YS1对活性炭诱导便秘小鼠小肠组织中TRPV1、GDNF和NOSmRNA表达的影响。图3至图6中，LB表示保加利亚乳杆菌，LP-YS1表示植物乳杆菌YS1。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例1、植物乳杆菌YS1的分离和鉴定一、乳酸菌的分离纯化采自青海玉树藏族自治州牧民家庭的自然发酵牦牛酸乳样品10份，每份样品用无菌玻棒充分搅匀后，吸取50mL放入无菌离心管中，置于食品采样箱内带回实验室，4℃冰箱保存。每份牦牛酸乳样品取1mL，用灭菌生理盐水作10倍梯度稀释至10-7。取10-5、10-6、10-7三个稀释度各1mL稀释液分别于装有15mLMRS培养基(含质量比为5％的CaCO3)的平皿中，混匀，置30℃恒温箱培养72±3h。每个稀释度作三个平行。菌落形成后，观察其形态特征，挑取有溶钙圈的不同菌落分别接种于脱脂乳培养基中，置30℃培养24～48h，待菌株生长良好后，划线接种于MRS琼脂培养基，置30℃培养48h；重复以上步骤至少三次，直至得到纯菌落。二、乳酸杆菌的鉴定将纯菌株在MRS固体培养基上划线，置30℃培养48h，用10倍放大镜观察菌落大小、形状等表观特征，进行革兰氏染色，挑取形态典型的菌株进行过氧化氢酶试验。将革兰氏阳性、过氧化氢酶试验阴性的球菌菌株和杆菌菌株，暂定为乳酸菌。将乳酸杆菌菌株分别进行生长温度试验(10℃、45℃、60℃，30min)、pH值梯度试验、运动性试验、接触酶试验、氧化酶试验、硫化氢试验、明胶液化实验、硝酸盐还原试验、吲哚试验、葡萄糖产气试验、联苯胺试验、石蕊牛乳试验、精氨酸产氨试验、酪素分解试验以及各种糖醇发酵试验等。结果从10份牦牛酸乳样品中共分离纯化出20株乳酸杆菌，均为革兰氏染色阳性、过氧化氢酶试验阴性。通过形态学观察和生理生化试验，将这20株菌株初步鉴定为7种乳酸杆菌，依次编号为Lb1～Lb7，其中，编号为Lb4的乳酸杆菌初步鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)(表1)。表1编号为Lb4的乳酸杆菌的形态学特征和生理生化试验结果注：+，阳性；－，阴性；+w，弱阳性。三、植物乳杆菌的鉴定取编号为Lb4的乳酸杆菌液体培养的菌悬液，离心弃上清，收集菌体，按照细菌基因组DNA提取试剂盒(北京索莱宝科技公司)所述方法提取基因组DNA，进行琼脂糖凝胶电泳(凝胶质量比浓度0.8％，电压80V，电泳80min)，用GelRed核酸染料染色后，在凝胶成像系统中观察(图1)。将提取的基因组DNA稀释200倍，用紫外分光光度计进行浓度纯度测定。采用引物27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’(SEQIDNo.1)和1492R：5’-GGCTACCTTGTTACGACTT-3’(SEQIDNo.2)对16SrDNA基因片段进行PCR扩增(图2)，扩增产物由生工生物工程(上海)有限公司和北京六合华大基因科技股份有限公司进行测序，并将测序结果(SEQIDNo.3)与Genbank中相关序列进行比对。结果显示，编号为Lb4的乳酸杆菌的16SrDNA基因片段序列与LactobacillusplantarumstrainNBRC15891的相似性达到99％。因此，编号为Lb4的乳酸杆菌鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，将其命名为YS1，并于2016年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学)，保藏编号为CCTCCNO：M2016747。实施例2、植物乳杆菌YS1对活性炭诱导小鼠便秘的预防作用通过给小鼠灌胃活性炭使胃肠道粘膜表面被活性炭附着，导致消化道中含水量下降，消化液减少，引发胃肠运动减慢形成便秘。在对乳酸菌便秘预防效果的前期研究中，专利技术人证实首粒黑便排便时间、MTL、Gas、ET、SS、AChE、SP、VIP的水平等都可作为评价乳酸菌便秘预防作用的指标；通过进一步的分子生物学本文档来自技高网...

【技术保护点】
植物乳杆菌YS1(Lactobacillus plantarum YS1)，保藏编号为CCTCC NO：M2016747。

【技术特征摘要】
1.植物乳杆菌YS1(LactobacillusplantarumYS1)，保藏编号为CCT...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵欣，骞宇，谭芳，
申请(专利权)人：重庆第二师范学院，谭芳，
类型：发明
国别省市：重庆,50