用于核酸提取纯化的漂洗液制造技术

本发明专利技术公开了一种用于核酸提取纯化的漂洗液，其包含：缓冲试剂、聚乙二醇以及盐。使用本发明专利技术的漂洗液具有减少样本核酸提取纯化过程中交叉污染的机会、省去提取过程中的“晾干”步骤、减少核酸提取纯化的时间以及提高核酸提取纯化的效率等优点，而且对于该漂洗液，其制备方法简单和易于操作。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种漂洗液，特别是涉及一种用于核酸提取纯化的漂洗液。
技术介绍
核酸是生命的最基本物质之一，包含脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类，广泛存在于动植物细胞、细菌、病毒等一切生命体内，起着储存和传递遗传信息的作用。随着以核酸为检测对象的分子诊断技术的发展，核酸检测已经广泛应用于临床检验、出入境检验检疫、法医物证等领域。核酸检测的关键环节之一，即从各种生物样品中提取和纯化核酸，核酸提取效率和纯度对下游的核酸检测能否成功起至关重要的作用。核酸的提取纯化主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。核酸提取纯化的方法经历了一段时间发展，已经逐渐从传统的采用酚/氯仿等有机溶剂进行手工抽提法发展为采用硅胶膜吸附的离心柱法，以及采用磁珠法进行全自动核酸提取纯化的方法。磁珠法核酸提取纯化方法通常以纳米硅基磁珠为载体，通过磁珠在高盐溶液中吸附核酸而在低盐溶液中核酸从磁珠表面解吸附的原理进行核酸提取纯化。由于纳米磁珠具有大比表面积，选择性吸附核酸，超顺磁性，快速磁响应以及物化性质稳定等特点，使其非常适用于自动化。全球著名的生物技术公司，如Roche、Qiagen、Thermo、Chemagen等公司均有基于磁珠法原理的核酸提取试剂和全自动提取纯化系统在售。磁珠法核酸提取纯化的方法一般包括细胞裂解释放核酸与磁珠吸附核酸、漂洗吸附有核酸的磁珠、将核酸从磁珠上洗脱下来的几个主要步骤。根据现有公开文献资料可知，目前细胞裂解的方法一般根据样本类型的不同，可采用机械作用，化学作用以及酶处理等方式。机械作用，即包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法；化学作用，即在一定的pH环境和变性条件下，细胞破裂，蛋白质变性沉淀，核酸被释放到水相。变性条件可通过加热、加入表面活性剂(SDS、TritonX-100、Tween20、NP-40、CTAB等)或强离子剂(异硫氰酸胍、盐酸胍)而获得。而pH环境则由加入的强碱(NaOH)或缓冲液(TE、STE等)提供。在一定的pH环境下，表面活性剂或强离子剂可使细胞裂解、蛋白质和多糖沉淀，缓冲液中的一些金属离子螯合剂(EDTA等)可螯合对核酸酶活性所必须的金属离子Mg2+、Ca2+，从而抑制核酸酶的活性，保护核酸不被降解；酶作用主要是通过加入溶菌酶或蛋白酶以使细胞破裂，核酸释放，如在裂解液中加入蛋白酶可以降解蛋白质，灭活核酸酶(DNase和RNase)，加入DNase或RNase也用于去除不需要的核酸。对于磁珠吸附核酸，根据现有已知公开文献可知，在高盐溶液中，核酸吸附至纳米硅基磁珠表面，离液盐碘化钠或高氯酸钠可促进核酸与硅基磁珠的结合。中国专利《一种增强的磁珠法核酸提取方法》(专利号：201110124322.3)介绍了一种含有异丙醇的裂解与结合液，其中异丙醇起增强磁珠吸附核酸的作用。对于磁珠的漂洗，其目的是洗去磁珠上非特异结合的蛋白质和脂类等杂质，而尽量减少吸附在磁珠表面的核酸的损失，从而使后续从磁珠表面洗脱下来的核酸纯度更高。目前市售的磁珠法核酸提取试剂，多采用含有乙醇或异丙醇的漂洗液进行漂洗1～2次，不同公司试剂的配方可能有所不同，但基本含有乙醇和异丙醇等成分，尤其在进行洗脱前的一个步骤往往采用60％～75％乙醇或异丙醇进行漂洗。可参见下列中国专利申请和专利的描述：《基于纳米磁珠的核酸提取纯化方法及试剂盒》(申请号：201410062784.0)，《一种增强的磁珠法核酸提取方法》(专利号：201110124322.3)；《一种提取纯化DNA的方法》(专利号：200910090336.0)；《磁珠法提取细菌质粒DNA的试剂盒及其提取方法》(专利：201110204053.1)等。由于已知乙醇和异丙醇的残留对后续分子生物学反应(如PCR，酶切等)有显著抑制作用，所以，在采用乙醇或异丙醇为主要组分的漂洗液对磁珠进行漂洗后，需要对磁珠进行“晾干”处理2～15分钟，使磁珠表面的乙醇或异丙醇充分挥发。由于晾干过程增加了磁珠的暴露时间，可能会影响提取的核酸的稳定性，另外，一些市售的自动化提取仪为了加快乙醇或异丙醇的挥发，设置带加热功能的风扇，使磁珠周围空气加速流通，这增加了提取的核酸产物形成气溶胶并产生样本间交叉污染的风险。对于核酸从磁珠上洗脱，一般采用不含或者含有很低浓度盐分的缓冲液，例如TE(pH8.0)或者Tris-HCl(pH8.0)等，也有直接采用纯水作为洗脱液的试剂盒。为了提高洗脱效率，往往采用加热洗脱方式，一般加热至50～60℃洗脱效果为佳。洗脱的核酸提取纯化产物可直接用于后续分子生物学实验分析，如PCR、RT-PCR、酶切、测序等。如果提取产物不立即使用，应置于-20℃条件下储存，长期保存应置于-70℃条件下。然而，为了减少样本核酸提取纯化过程中交叉污染的机会、省去提取过程中的“晾干”步骤、减少核酸提取纯化的时间以及提高核酸提取纯化的效率等，还需要对用于核酸提取纯化的漂洗液进行进一步研究的必要。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种用于核酸提取纯化的漂洗液。该漂洗液不含乙醇或者异丙醇，因而是一种在核酸提取纯化中无需进行“晾干”处理步骤的漂洗液。因而，使用本专利技术的漂洗液具有减少样本核酸提取纯化过程中交叉污染的机会、省去提取过程中的“晾干”步骤、减少核酸提取纯化的时间以及提高核酸提取纯化的效率等优点，而且对于该漂洗液，其制备方法简单和易于操作。为解决上述技术问题，本专利技术的用于核酸提取纯化的漂洗液，其包含：缓冲试剂、聚乙二醇以及盐。所述漂洗液的pH优选为6.0～7.0。所述缓冲试剂包括：HEPES缓冲液或Tris-HCl缓冲液。优选地，所述HEPES缓冲液是10mM～200mM的HEPES缓冲液，其pH为6.0～7.0；Tris-HCl缓冲液是10mM～200mM的Tris-HCl缓冲液，其pH为6.0～7.0。所述聚乙二醇是由环氧乙烷与水或乙二醇逐步加成聚合而成，聚乙二醇产品无毒、无刺激性，味微苦，具有良好的水溶性，并与许多有机物组份有良好的相溶性。在本专利技术中，优选分子量为6000或8000的聚乙二醇，且聚乙二醇在漂洗液中的浓度范围优选为5g/100mL～20g/100mL。所述盐优选为无机盐，包括：氯化钠或氯化钾。该无机盐在漂洗液中的浓度优选为0.1M～0.5M。本专利技术的漂洗液，是磁珠法核酸提取纯化试剂中的一个重要组成部分，它能与核酸提取纯化试剂中的其他试剂配合使用，以发挥核酸提取纯化的作用。因此，本专利技术还提供一种用于核酸提取纯化的试剂盒，其包括：(1)核酸的裂解与结合液，其包括：离液盐、强变性剂、去污剂以及增强磁珠吸附核酸能力的试剂等；其中，离液盐包括：0.5M～3.0M的氯化钠、高氯酸钠或碘化钠等；强变性剂包括：胍盐等；去污剂包括：SDS或Triton-X100等；增强磁珠吸附核酸能力的试剂包括：乙醇或异丙醇等。此处的裂解与结合液，如同
技术介绍
中所述，其用于裂解生物样本中的组织、细胞、细菌、病毒等，并释放核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于核酸提取纯化的漂洗液，其特征在于，包含：缓冲试剂、聚乙二醇以及盐。

【技术特征摘要】
1.一种用于核酸提取纯化的漂洗液，其特征在于，包含：缓冲试剂、聚乙二醇以及盐。
2.如权利要求1所述的漂洗液，其特征在于：所述漂洗液的pH为6.0～7.0。
3.如权利要求1所述的漂洗液，其特征在于：所述缓冲试剂包括：HEPES缓冲液或Tris-HCl
缓冲液。
4.如权利要求3所述的漂洗液，其特征在于：所述HEPES缓冲液是10mM～200mM的
HEPES缓冲液，其pH为6.0～7.0；
Tris-HCl缓冲液是10mM～200mM的Tris-HCl缓冲液，其pH为6.0～7.0。
5.如权利要求1所述的漂洗液，其特征在于：所述聚乙二醇为6000或8000的聚乙二醇。
6.如权利要求1所述的漂洗液，其特征在于：所述聚乙二醇在漂洗液中的浓度范围为
5g/100mL～20g/100mL。
7.如权利要求1所述的漂洗液，其特征在于：所述盐为无机盐；
该无机盐在漂洗液中的浓度为0.1M～0.5M。
8....

【专利技术属性】
技术研发人员：何晓辉，张健，
申请(专利权)人：苏州新波生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32