核酸纯化柱系统及其在核酸提取中的应用技术方案

本发明专利技术提供了提供一种核酸纯化柱系统及该系统在核酸提取上的应用。该核酸纯化柱系统包括两个相互独立又能上下位叠加在一起的生物样品制备柱，所述生物样品制备柱包括本体，本体的上部具有加样口，本体的下部具有出样管嘴，生物样品制备柱的加样口上部设置有一保持部件，其中居于上方的制备柱下部紧密扣合在居于下方的制备柱保持部件内。本发明专利技术采用可相互叠加的纯化柱系统，满足实验的连续性操作和不同样本之间的转化作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物样品提取领域，尤其涉及一种核酸纯化柱系统及该系统在核酸提取的应用。
技术介绍
在生物学领域，经常需要对样品进行过滤和纯化。尤其是在分子生物学领域，经常需要提取生物样品中的DNA、RNA等大分子物质，并对这些大分子物质进行分离纯化。高效率地分离纯化核酸物质成为分子生物学领域的关键技术。利用制备柱从生物样品中分离和提取核酸已经成为分子生物学领域常用的手段。通常的制备柱为一个圆形的管状结构，包括圆形管柱体，柱体的一端带有密封盖，另一端填充有多孔筛板或膜，在多空筛板上添加了能吸附核酸等生物物质的材料。常采用负压法和离心法提取核酸。采用负压法时，首先将制备柱插到负压装置的插口上，用核酸结合缓冲液溶解需要分离的样品，如PCR产物、酶切、酶标或测序产物并转移至制备柱中，开启并调节负压至-25-30英寸汞柱，缓慢吸走管中溶液。保持负压，加入洗涤液对管中的残留物进行洗涤后，将制备柱置于新离心管中，在制备柱膜中央加洗脱液或去离·子水，室温静置Imin后12，OOOXg离心Imin洗脱核酸。采用离心法时，用核酸结合缓冲液溶解需要分离的样品，如PCR产物、酶切、酶标或测序产物，混匀后转移到制备柱中，将制备柱直于尚心管中，12，000X g尚心lmin，弃滤液。将制备柱直回新的离心管，加洗涤液，12，000 Xg离心lmin，弃滤液。再次将制备柱置于洁净的离心管中，在制备柱膜中央加一定量的洗脱液或去离子水，室温静置Imin后12，000Xg离心Imin洗脱得到核酸。现有的核酸提取技术中受到制备柱本身结构的影响，每经过一次洗脱或离心，制备柱都要重新置于新的离心管中，因此不同样本之间的转化步骤复杂。现有的制备柱相互之间是不能相互组合使用，因此不能满足核酸提取的连续性操作。
技术实现思路
为克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供核酸纯化柱系统，至少包括两个相互独立又能上下位叠加在一起的生物样品制备柱，所述生物样品制备柱包括本体，本体的上部具有加样口，本体的下部具有出样管嘴，生物样品制备柱的加样口上部设置有一保持部件，其中居于上方的制备柱下部紧密扣合在居于下方的制备柱保持部件内。优选的，居于下方的制备柱保持部件的内径与居于上方的制备柱下部的外径相同。优选的，居于上方的制备柱的出样管嘴的外周还包括固定框，所述固定框插入居于下方的制备柱保持部件内，该固定框的外径与居于下方的制备柱的保持部件的内径相同。优选的，制备柱出样管嘴包括出口端，所述出口端暴露在固定框外。优选的，制备柱保持部件与本体的连接处还包括支撑面。优选的，制备柱的本体内具有过滤膜或硅胶膜，或两者的组合。本专利技术还提供一种核酸纯化柱系统在核酸提取中的应用，包括以下提取步骤:I)取30ml在LB培养基中培养过夜的高拷贝数质粒菌液，或IOOml过夜培养的低拷贝质粒/Cosmid菌液至于离心管中，以大于等于3，OOOXg离心8min,弃上清,弃上清；2)加4.5ml的溶液I悬浮细菌沉淀；3)加4.5ml溶液II，温和并充分地上下翻转6_8次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液；此步骤不宜超过5min ;向透明溶液中加4.5ml4°C预冷的溶液III，温和并充分地上下翻转10次混合均匀，直至形成紧实的凝集块；室温放置5min ；4)利用本专利技术所述核酸纯化柱系统，并将居于下方的生物样品制备柱插到负压装置的插口上；将步骤3中所得溶液缓慢加入居于上方的制备柱中，开启并调节负压至-25至-30英寸汞柱，缓慢吸走制备柱中溶液；5)待步骤4中的溶液吸干后，移除居于上方的制备柱，继续保持负压，向居于下方的制备柱中加5ml溶液IV，吸尽制备柱中溶液；6)向居于下方的制备柱中加5ml溶液V，吸尽管中溶液；7)将步骤6中的制备柱置于洁净的15ml离心管中，加0.3ml溶液V，8，OOOXg离心 5min ；8)将步骤7中的制备柱置于另一洁净的15ml离心管中，加0.3ml洗脱液或去离子水，室温静置lmin，8，OOOXg离心2min收集得到质粒DNA ；其中: 溶液I 包括 2mmol/L KH2PO4,1OmmoI/L Na2HPO4,137mmol/L NaCl，2.7mmol/L KCl，1% Tween20, pH6.0-8.0，加入 RNa s e A 后，混合均匀，4°C贮存；溶液II 包括 0.1-2.5mol/L NaOH,0.05% ~1% SDS 室温密闭贮存；溶液III 包括 0.1-0.5moI/L(NH4)2HPO4.NH4H2PO4,0.5_3mol/LKCl，ρΗ4.5 ；溶液IV 包括 200m mol/L Tris, 2M EDTA, 1.5mol/L NaCl，3mol/LGuHCl，室温密闭贮存；溶液V包括50-100%无水乙醇；洗脱液包括2.5m mol/L Tris-HCl, ρΗ8.5，室温密闭贮存。本专利技术的有益效果是:本专利技术所述的核酸纯化柱系统包括两个相互独立又能上下位叠加在一起的生物样品制备柱。由于在制备柱的上部具有保持部件，并且保持部件的内部直径被设计成与相同类型制备柱的下部外径相同，或者比其大的不同类型的制备柱的固定框的外径相同。当需要进行连续性操作时，其中一个制备柱的下部或固定框就可以紧密的扣合在另一个制备柱的保持部件中，实现了将多个制备柱叠加的方式。更优的方式是制备柱还包括一个支撑面，由于支撑面对插入其中的另一个制备柱下部或制备柱固定框的抵挡作用，进一步保证了两个制备柱扣合的稳固性。从而实现同类型制备柱之间或不同类型制备柱之间的相互叠加，满足了实验的连续性操作要求。制备柱之间的相互叠加，可以减少离心管去杂质的步骤，使生物样品提取和纯化的操作连续性更强。减少中间的操作步骤，可以减少提取过程的产物对环境和操作人员的污染和危害，也可避免过多步骤的操作会增加提取样品污染的几率。另外离心管的使用量也可大大减少，节约成本。附图说明图1是第一种生物样品制备柱结构示意图。图2是第一种核酸纯化柱系统结构示意图。图3是图2A处的局部放大图。图4是第二种生物样 品制备柱结构示意图。图5是第二种核酸纯化柱系统结构示意图。图6图5B处的局部放大图。图7是生物样品制备柱俯视图，包括内部的隔板结构示意图。具体实施例方式下面结合具体附图对本专利技术进行详细的说明。这些具体的实施例仅仅是在不违背本专利技术精神下的有限列举，并不排除本领域的一般技术人员把现有技术和本专利技术结合而产生的其他具体的实施方案。如图1所示的生物样品制备柱I包括中空的本体2，所述本体2的上部具有加样口 3，本体的下部具有出样管嘴4，在加样口的上部设置有一保持部件5。保持部件用于容纳另一个制备柱插入其中，并能紧紧地卡住插入其中的另一个制备柱，从而能够将两个制备柱叠加在一起使用。保持部件5的内部直径可以根据插入其中的制备柱外径的不同而不同。若相互叠加的制备柱是同种类型的,则保持部件5的内部直径与制备柱本体的外径相同。若相互叠加的制备柱是同种类型，但该制备柱的本体是上大下小或上小下大的圆锥体，则制备柱的保持部件与该制备柱叠加部分即制备柱下部的外径相同。若相互叠加的制备柱是不同类型的，则保持部件5内部直径与插入其中的另一款不同型号的制备柱的下部外径相同。优选的方案中保持部件5与本体2的连接处还包括支撑本文档来自技高网...

【技术保护点】
核酸纯化柱系统，至少包括两个相互独立又能上下位叠加在一起的生物样品制备柱，所述生物样品制备柱包括本体，本体的上部具有加样口，本体的下部具有出样管嘴，其特征在于，生物样品制备柱的加样口上部设置有一保持部件，其中居于上方的制备柱下部紧密扣合在居于下方的制备柱保持部件内。

【技术特征摘要】
1.酸纯化柱系统，至少包括两个相互独立又能上下位叠加在一起的生物样品制备柱，所述生物样品制备柱包括本体，本体的上部具有加样口，本体的下部具有出样管嘴，其特征在于，生物样品制备柱的加样口上部设置有一保持部件，其中居于上方的制备柱下部紧密扣合在居于下方的制备柱保持部件内。2.根据权利要求1所述的核酸纯化柱系统，其特征在于，居于下方的制备柱保持部件的内径与居于上方的制备柱下部的外径相同。3.根据权利要求1所述的核酸纯化柱系统，其特征在于，居于上方的制备柱的出样管嘴的外周还包括固定框，所述固定框插入居于下方的制备柱保持部件内，该固定框的外径与居于下方的制备柱的保持部件的内径相同。4.根据权利要求3所述的核酸纯化柱系统，其特征在于，制备柱出样管嘴包括出口端，所述出口端暴露在固定框外。5.根据权利要求1所述的核酸纯化柱系统，其特征在于，制备柱保持部件与本体的连接处还包括支撑面。6.根据权利要求1所述的核酸纯化柱系统，其特征在于，制备柱的本体内具有过滤膜或硅胶膜，或两者的组合。7.酸纯化柱系统在核酸提取中的应用，包括以下提取步骤: 1)取30ml在LB培养基中培养过夜的高拷贝数质粒菌液，或IOOml过夜培养的低拷贝质粒/Cosmid菌液至于离心管中，以大于等于3，OOOXg离心8min,弃上清； 2)加4.5ml的溶液I悬浮细菌沉淀； 3)加4.5ml溶液II，温和并充分地上下翻转6_8次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液；此步骤不宜超过5min ;向透明溶液中加4.5ml4°C预冷的溶液III，温和并充分地上下翻转10次混合均匀，直至形成紧实的凝集块，室温放置5mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：林源吉，吕航，
申请(专利权)人：杭州百迈生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：