本发明专利技术涉及一种裸地胆草素的提取纯化方法，其特征是：以裸地胆草为原料，采用亚临界流体萃取，控制萃取压力为7-9MPa，萃取温度为42-55℃，通入丙烷，静态萃取22min后动态萃取30-60min，所得萃取物进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层层析，收集含裸地胆草素的组分，浓缩成浸膏后用甲醇溶解，经制备型液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩相应组分，放置结晶，结晶干燥即得裸地胆草素。本发明专利技术生产周期短，制备量大、收率高、产品纯度好，适合工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药制药领域，涉及。
技术介绍
裸地胆草素(Nudaphantin)分子式为C21H26O7,分子量为390.43,是从菊科植物裸地胆草nudatus Grey全植物中提取分离得到的一种倍半職内酯类化合物。药理研究表明，裸地胆草素对KB细胞具有细胞毒活性，其ED5tl为0.31 μ g/mL。徐峰对裸地胆草分别采用己烷、氯仿和甲醇提取，发现氯仿提取物所得产物为深绿色糖浆，具有极强的细胞毒活性，再经硅胶柱层析和制备TLC分离得到Nudaphantin，并视其为新细胞毒成分。目前，国内尚未见裸地胆草素的亚临界萃取方法方面的专利报道。
技术实现思路
本专利技术旨在克服上述技术缺陷，提供一种分离效果好、收率高、产品纯度好，适合工业化生产的裸地胆草素的提取纯化方法。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案: ，其特征是:以裸地胆草为原料，采用亚临界流体萃取，控制萃取压力为7-9MPa，萃取温度为42-55 °C，通入丙烷，静态萃取22min后动态萃取30-60min,所得萃取物进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层层析，收集含裸地胆草素的组分，浓缩成浸膏后用甲醇溶解，经制备型液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩相应组分，放置结晶，结晶干燥即得裸地胆草素。所述丙烷的流量为5-7.5g/min。所述高压硅胶柱的柱压为2.5-3.1MPa，柱内径为150_250mm，层析柱径高比为1:12-20，硅胶目数为200-300目，石油醚-丙酮体积比为100:9-28。所述甲醇水溶液的体积百分比浓度为70%。本专利技术的有益效果是: 1、本专利技术方法通过亚临界流体萃取、柱层析及制备型液相色谱分离、结晶等步骤制备裸地胆草素，耗时短，得率高，操作简单，易于工业化生产。2、使用特制高压柱层析，上样量大，周期短，分离度好，产品纯度高。3、本专利技术为裸地胆草素的进一步开发利用提供药理原料、理论和实践支持。本
技术实现思路
通过以下的实施例作进一步的阐述，但并不限制本专利技术的范围。具体实施方式: 实施例1: 取干燥裸地胆草粗粉5kg，装入萃取釜中，通入丙烷流体，控制丙烷流量为7.5g/min,萃取压力为8MPa，萃取温度为48°C，静态萃取22min后动态萃取60min，溶于丙烷的裸地胆草素在分离釜中减压析出，所得萃取物用甲醇溶解湿法上样至填料为300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压 为2.5MPa，柱内径为150mm，层析柱径高比为1:18，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:10、100:15、100:20、100:28洗脱，分段收集各流分，将含裸地胆草素流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，注入制备型液相色谱中，以70%的甲醇水溶液为流动相，流速为15ml/min，紫外检测器在线监测，收集高纯度裸地胆草素流分，浓缩，放置结晶，滤出结晶，干燥即得裸地胆草素，HPLC检测，含量为95.7%。实施例2: 取干燥裸地胆草粗粉5kg，装入萃取釜中，通入丙烷流体，控制丙烷流量为7g/min，萃取压力为7MPa，萃取温度为55°C，静态萃取22min后动态萃取30min，溶于丙烷的裸地胆草素在分离釜中减压析出，所得萃取物用甲醇溶解湿法上样至填料为200目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为3.1MPa，柱内径为200mm，层析柱径高比为1:12，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:9、100:15、100:20、100:27洗脱，分段收集各流分，将含裸地胆草素流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，注入制备型液相色谱中，以70%的甲醇水溶液为流动相，流速为25ml/min，紫外检测器在线监测，收集高纯度裸地胆草素流分，浓缩，放置结晶，滤出结晶，干燥即得裸地胆草素，HPLC检测，含量为96.4%。实施例3: 取干燥裸地胆草粗粉5kg，装入萃取釜中，通入丙烷流体，控制丙烷流量为5g/min，萃取压力为7MPa，萃取温度为42°C，静态萃取22min后动态萃取50min，溶于丙烷的裸地胆草素在分离釜中减压析出，所得萃取物用甲醇溶解湿法上样至填料为200目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2.8MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1:20，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:9、100:12、100:18、100:28洗脱，分段收集各流分，将含裸地胆草素流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，注入制备型液相色谱中，以70%的甲醇水溶液为流动相，流速为20ml/min，紫外检测器在线监测，收集高纯度裸地胆草素流分，浓缩，放置结晶，滤出结晶，干燥即得裸地胆草素，HPLC检测，含量为95.2%。实施例4:取干燥裸地胆草粗粉5kg，装入萃取釜中，通入丙烷流体，控制丙烷流量为6g/min，萃取压力为9MPa，萃取温度为45°C，静态萃取22min后动态萃取60min，溶于丙烷的裸地胆草素在分离釜中减压析出，所得萃取物用甲醇溶解湿法上样至填料为300目硅胶高压柱，其中高压柱的柱压为2.5MPa，柱内径为180mm，层析柱径高比为1:18，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比100:9、100:17、100:21、100:28洗脱，分段收集各流分，将含裸地胆草素流分合并，减压回收溶剂，加甲醇溶解，注入制备型液相色谱中，以70%的甲醇水溶液为流动相，流速为25ml/min，紫外检测器在线监测，收集高纯度裸地胆草素流分，浓缩，放置结晶，滤出结晶，干燥即得裸地胆草素，HPLC检测，含量为96.1%。权利要求1.，其特征是:以裸地胆草为原料，采用亚临界流体萃取，控制萃取压力为7-9MPa，萃取温度为42-55°C，通入丙烷，静态萃取22min后动态萃取30-60min,所得萃取物进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层层析，收集含裸地胆草素的组分，浓缩成浸膏后用甲醇溶解，经制备型液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩相应组分，放置结晶，结晶干燥即得裸地胆草素。2.根据权利要求1所述的，其特征在于所述丙烷的流量为 5-7.5g/min。3.根据权利要求1所述的，其特征在于所述高压硅胶柱的柱压为2.5-3.1MPa，柱内径为150_250mm，层析柱径高比为1:12-20，硅胶目数为200-300目，石油醚-丙酮体积比为100:9-28。4.根据权利要求1所述的，其特征在于所述甲醇水溶液的体积百分比浓度 为70%。全文摘要本专利技术涉及，其特征是以裸地胆草为原料，采用亚临界流体萃取，控制萃取压力为7-9MPa，萃取温度为42-55℃，通入丙烷，静态萃取22min后动态萃取30-60min，所得萃取物进行高压硅胶柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层层析，收集含裸地胆草素的组分，浓缩成浸膏后用甲醇溶解，经制备型液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩相应组分，放置结晶，结晶干燥即得裸地胆草素。本专利技术生产周期短，制备量大、收率高、产品纯度好，适合工业化生产。文档编号C07D493/18GK103242334SQ20131018871公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月21日 优先权日2013年5月21日专利技术者刘东锋, 万冬梅 申请人:南京泽朗医药科技有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种裸地胆草素的提取纯化方法，其特征是：以裸地胆草为原料，采用亚临界流体萃取，控制萃取压力为7?9MPa，萃取温度为42?55℃，通入丙烷，静态萃取22min后动态萃取30?60min，所得萃取物进行高压硅胶柱层析，用石油醚?丙酮梯度洗脱，薄层层析，收集含裸地胆草素的组分，浓缩成浸膏后用甲醇溶解，经制备型液相色谱进行纯化，甲醇水溶液进行洗脱，浓缩相应组分，放置结晶，结晶干燥即得裸地胆草素。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，万冬梅，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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