一种裂环杜松烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种裂环杜松烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用。制法：(1)取热毒宁注射液成品，经HP-20大孔吸附树脂柱色谱分离，依次以水、30％乙醇、90～100％乙醇梯度洗脱，分别收集各洗脱液，浓缩，得到90～100％乙醇洗脱部位；(2)90～100％乙醇洗脱部位，依次经硅胶柱色谱，Sephadex LH-20柱色谱，ODS柱色谱分离，半制备液相HPLC分离，得到本发明专利技术的新化合物。本发明专利技术所述化合物可用于治疗手足口病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药
，特别涉及一个从现有中成药制剂中提取的裂环杜松烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用。
技术介绍
热毒宁注射液(国药准字Z20050217)为江苏康缘药业股份有限公司自主研发的原中药二类新药，其处方为青蒿、金银花、栀子，辅料为聚山梨酯80。热毒宁注射液在外感风热所致感冒、流感、咳嗽、上呼吸道感染等疾病的临床治疗中应用广泛，其作用迅速、效果显著。研究人员在热毒宁注射液中发现了新的化学成分，并且发现此化合物在各个批次的热毒宁注射液中均稳定存在。经查阅文献可知，这是首次在热毒宁注射液中发现并鉴定出的新的化学成分，并经过Scifinderscholar检索发现该化合物为新化合物。
技术实现思路
本专利技术从热毒宁注射液中制备提取出一种具有生物活性的杜松烷型倍半萜类化合物，并提供了其在制备治疗手足口病药物中的应用。具体地说，本专利技术提供了一种杜松烷型倍半萜类化合物，其结构如式I所示：本专利技术还提供了上述化合物的制备方法，包括如下步骤：(1)取热毒宁注射液成品，经HP-20大孔吸附树脂色谱柱分离，依次以水、30％乙醇、90～100％乙醇梯度洗脱，分别收集各洗脱液，减压浓缩至无醇味，得到水洗脱部位、30％乙醇洗脱部位、90～100％乙醇洗脱部位；(2)取步骤(1)的90～100％乙醇洗脱部位，经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比为9∶1的洗脱液洗，减压浓缩的馏分B，馏分B经SephadexLH-20柱色谱分离，氯仿-甲醇等度洗脱，去除色素后收集馏分，标记为B-2，馏分B-2经ODS柱色谱分离，甲醇-水梯度洗脱收集甲醇-水体积比为3∶2的馏分B-2-2，馏分B-2-2经半制备液相HPLC分离，得到本专利技术的化合物。上述制备方法中，步骤(2)所述半制备液相色谱，以比例为55∶45∶0.5的甲醇-水-甲酸为流动相，检测波长为208与220nm，流速4mL/min，在半制备液相上的保留时间为37.4min。专利技术人通过理化性质和现代波谱学手段(UV、IR、MS、CD、1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR和单晶x射线衍射)对分离得到的化合物进行了结构鉴定，证实其为结构如式I所示的裂环杜松烷型倍半萜类化合物。本专利技术的另一个目的在于提供一种式I所示化合物在制备治疗手足口病药物中的应用。专利技术人发现本专利技术化合物对手足口病EV71病毒有一定的抑制作用。本专利技术的再一个目的在于提供一种药物组合物，包含上述式I所示化合物。本专利技术还提供了一种治疗手足口病的药物组合物，含有治疗有效量的上述式I化合物以及一种或多种药学上可接受的载体。附图说明图1为化合物的HR-ESI-Q-TOF-MS图2为化合物的1H-NMR谱图3为化合物的13C-NMR谱和DEPT-135谱图4为化合物的1H-1HCOSY谱图5为化合物的HSQC谱图6为化合物的HMBC谱图7为化合物的NOESY谱图8为化合物的单晶x射线衍射图图9为化合物结构式具体实施方式为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明。实施例1本专利技术化合物的制备(1)取热毒宁注射液成品，经HP-20大孔吸附树脂色谱柱分离，依次以水、30％乙醇、95％乙醇梯度洗脱，分别收集各洗脱液，减压浓缩至无醇味，得到水洗脱部位、30％乙醇洗脱部位、95％乙醇洗脱部位；(2)取步骤(1)的90～100％乙醇洗脱部位，经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比为9∶1的洗脱液减压浓缩得馏分B，馏分B经SephadexLH-20柱色谱分离，氯仿-甲醇等度洗脱，去除色素后收集馏分，标记为B-2，馏分B-2经ODS柱色谱分离，用甲醇-水梯度洗脱，收集甲醇-水体积比为3∶2的馏分B-2-2，总计105mg，馏分B-2-2经半制备液相HPLC分离，以比例为55∶45∶0.5的甲醇-水-甲酸为流动相，检测波长为208与220nm，流速4mL/min，在半制备液相上的保留时间为37.4min。分离所得溶液干燥，得到本专利技术的化合物35.7mg。实施例2本专利技术化合物的结构鉴定本化合物为白色针状结晶。ESI-MS(positive)给出m/z587[2M+Na]+；ESI-MS(negative)给出281[M-H]-，提示化合物分子量为282。HR-ESI-Q/TOF-MS给出m/z305.1365[M+Na]+(计算值为305.1365)(见图1)，确定化合物分子式为C15H22O5，计算不饱和度为5。本化合物的1H-NMR(400MHz，inCD3OD)(见图2)谱共显示了20个氢信号，低场区显示了2个烯氢质子信号[δ6.19(1H，brs)，5.68(1H，brs)]，高场区可见1个单峰甲基信号[δ2.12(3H，s)]，表明其与季碳直接相连，1个d峰甲基信号δ0.93(3H，d，J＝6.4Hz)，表明其与叔碳直接相连。本化合物的13C-NMR(100MHz，inCD3OD)结合DEPT-135谱(见图3)共显示15根碳信号，其中包括4个季碳信号(3个羰基δ211.9，178.4及169.73，1个SP2杂化的季碳信号(δ144.7)，2个甲基碳信号(δ29.9，20.0)，5个亚甲基碳信号(δ125.8，38.7，36.3，33.6，24.7)，其中亚甲基碳信号δ125.8为一个末端双键的碳信号。综合以上信息，推测化合物为一个具有15个碳原子骨架的倍半萜类化合物，结构中含有1个环，1个双键，3个羰基。本化合物的1H-1HCOSY谱中(见图4)，观察到H-1/H-6/H-7/H-8/H-9/H-10(H-14)和H-1/H-2/H-3之间存在明显的相关信号，结合HSQC谱(见图5)，推出结构中存在一个饱和六元环的结构A。在HMBC谱中(见图6)，相关峰H-13/C-7，C-11，C-12；H-7/C-11，C-12，C-13；H-15/C-3，C-4以及H-6/C-5构建了结构片段B。结合分子式和分子量，可知15位和9位上连接羟基。由此将化合物15的平面结构确定为2-carboxy-4-methyl-α-methylene-3-(3-oxobutyl)-cyclohexaneaceticacid。该化合物的相对构型是通过NOESY(见图7)实验确定的，在NOE谱中可以看到1-H/7-H和6-H/10-H相关，表明H-6和H-10处于分子的同一侧(β)，同时化合物的绝对构型是通过单晶x射线衍射(见图8)技术确定的。综合以上分析，将化合物的结构鉴定为(1S，6R，7R，10R)-6-carboxy-10-methyl-α-methylene-1-(1-oxobutyl)-cyclohexaneaceticacid。所有的碳氢信号归属参见表1。经SciFinderScholar网络检索，发现化合物1未本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种裂环杜松烷型倍半萜类化合物，其结构如式I所示：

【技术特征摘要】
1.一种裂环杜松烷型倍半萜类化合物，其结构如式I所示：
2.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于，包括以下
步骤：
(1)取热毒宁注射液成品，经HP-20大孔吸附树脂柱色谱分离，
依次以水、30％乙醇、90～100％乙醇梯度洗脱，分别收集各洗脱液，
减压浓缩至无醇味，得到水洗脱部位、30％乙醇洗脱部位、90～100％
乙醇洗脱部位；
(2)取步骤(1)的90～100％乙醇洗脱部位，经硅胶柱色谱分
离，氯仿-甲醇梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比为9∶1的洗脱液减压浓
缩得馏分B，馏分B经SephadexLH-20柱色谱分离，氯仿-甲醇等度
洗脱，去除色素后收集馏分，标记为B-2，馏分B-2经ODS...

【专利技术属性】
技术研发人员：萧伟，姚新生，李海波，于洋，王振中，姚志红，戴毅，高昊，
申请(专利权)人：江苏康缘药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32