一种2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)的制备方法，所述方法包括步骤：将含有AA-2G的溶液与阴离子交换树脂接触并被吸附，用0.01-0.1mol/L的酸进行洗脱，收集洗脱液得到2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分离纯化，尤其涉及一种2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)的制备方法。
技术介绍
AA-2G是一种维生素C的衍生物，具有美白、抗氧化、促进胶原蛋白合成的作用。目前在化妆品、食品和保健品等行业有广泛的应用。在化妆品行业中，AA-2G可以作为美白剂，还原表皮中黑色素；促进胶原蛋白合成，延缓衰老；抗色斑，防止皮肤脂肪过氧化。目前已报道的AA-2G的分离纯化方法，主要有CN201280010888.6和EP03105024.0。中国专利(CN201280010888.6)公开的方法共有七个操作单元，较为繁琐，而且精制步骤用到柱色谱的操作方法，对设备要求高。欧洲专利(EP03105024.0)公开的洗脱液酸度较高，解吸液pH较低，一方面调节pH会重新引入无机盐杂质(过低的pH会使AA-2G在浓缩过程中降解)，不利于后续的浓缩，结晶操作；另一方面产生的废水也不利于环境。此外，这两个专利都使用了阴、阳两种离子交换树脂，树脂再生较繁琐。因此本领域迫切需要提供一种操作步骤少、离子交换树脂种类少、柱分离洗脱液有利于后续浓缩的AA-2G的制备方法。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种从酶转化液中制备高纯度AA-2G的纯化方法。在本专利技术中，提供了一种2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)的制备方法，所述方法包括步骤：将含有AA-2G的溶液与阴离子交换树脂接触并被吸附，用0.01-0.1mol/L的盐酸进行洗脱，收集洗脱液得到2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)。在另一优选例中，用于洗脱的酸的浓度为0.01-0.09mol/L；更优选地，酸浓度为0.03-0.08mol/L。在另一优选例中，含有AA-2G的溶液是将AA-2G的酶转化液经固液分离而得到的澄清液。在另一优选例中，澄清液中含有的AA-2G经高效液相检测色谱峰纯度为40-60％，更优选为45-55％。在另一优选例中，所述阴离子交换树脂为大孔强碱型阴离子交换树脂。在另一优选例中，所述大孔强碱型阴离子交换树脂是中极性的；所述中极性的大孔型阴离子交换树脂的骨架为丙烯酸，主要成分为聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)。在另一优选例中，用酸洗脱前先用去离子水洗使洗涤液中不含糖。在另一优选例中，收集AA-2G色谱峰纯度在87％或以上的洗脱液。在另一优选例中，将收集的AA-2G色谱峰纯度在87％或以上的洗脱液浓缩、降温结晶得到AA-2G晶体。在另一优选例中，所述方法由下述步骤构成：(1)将AA-2G的酶转化液经固液分离得到含有AA-2G的澄清液；(2)将澄清液与阴离子交换树脂接触并被吸附，用去离子水洗涤直至洗涤液中不含糖，再用0.01-0.1N的酸进行洗脱，收集AA-2G色谱峰纯度在87％或以上的洗脱液；和(3)将收集的AA-2G峰纯度在87％或以上的洗脱液浓缩、降温结晶得到AA-2G晶体。据此，本专利技术提供了一种操作步骤少、离子交换树脂种类少、柱分离洗脱液有利于后续浓缩的AA-2G的制备方法。附图说明图1显示了本专利技术实施例获得的AA-2G晶体的质谱图，图谱中有M+23(361)峰和M+1(339)峰说明物质分子量为338与AA-2G的分子量符合。图2显示了本专利技术实施例获得的AA-2G晶体在显微镜下的样貌。具体实施方式专利技术人经过广泛深入的研究，发现可以不必使用阳离子交换树脂，并使用低浓度的酸作为洗脱液可以达到从AA-2G酶转化液中纯化AA-2G的目的。在此基础上，完成了本专利技术。本专利技术提供了一种AA-2G的制备方法，即从AA-2G的酶转化液中得到高纯度AA-2G的方法，所述方法不使用阳离子交换树脂(例如将AA-2G的酶转化液或将AA-2G的酶转化液进行固液分离得到的澄清液用阳离子树脂除盐等)，采用固液分离、中极性的大孔强碱型阴离子交换树脂(骨架为丙烯酸类，主要成分为聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA))吸附解吸、浓缩、降温结晶的分离纯化方法，从AA-2G的酶转化液中制备高纯度的AA-2G。具体包括步骤：第一步，AA-2G的酶转化液经过固液分离后获得含AA-2G的澄清液；第二步，将获取的澄清液用中极性的大孔强碱型阴离子交换树脂吸附，去离子水洗后用低浓度的酸脱，洗脱液用HPLC检测后收集AA-2G色谱峰纯度在87％以上部分，得到AA-2G的纯化液备用；和第三步，收集的AA-2G的纯化液浓缩后降温结晶，获得AA-2G的晶体。上述第一步中涉及的酶转化液可来自本领域常规的通过酶触反应获得AA-2G的反应液，例如但不限于，反应底物溶液经环糊精葡萄糖基转移酶和葡萄糖淀粉酶依次作用催化后生成的含有AA-2G的混合溶液，其中包含反应底物Vc和淀粉等糖基供体、酶、产物等。上述第一步中经过固液分离得到的澄清液中含有AA-2G和杂质；所述杂质包括维生素C、糖、酶转化的副产物，例如但不限于，AA-5G、AA-6G等。澄清液经HPLC检测AA-2G的色谱峰纯度为40-60％，优选为45-55％。所述固液分离可以使用本领域的常规方法进行，例如但不限于，膜滤、抽滤、离心等。在本专利技术的一种优选方式中，为了提高收率，在第二步之前可先对澄清液初步分离去除杂质。具体操作是将第一步中获取的澄清液过中极性的大孔强碱型阴离子交换树脂吸附，用去离子水洗至流出液不含糖，再用低浓度的酸进行洗脱，收集AA-2G色谱峰纯度在80％上的洗脱液，与上柱的流出液合并，进行第二步操作。上述提供的方法中所用的中极性的大孔强碱型阴离子交换树脂，其骨架为丙烯酸类，主要成分为聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)；优选使用FPA98(OH)、FPA53(OH)和IRA67(OH)等。本专利技术提供的方法中所述用于洗脱的酸优选为无机酸，更优选为盐酸。本专利技术提供的方法中所述用于洗脱的酸的浓度范围在0.01mol/L-0.1mol/L，优选0.01mol/L-0.09mol/L，更优选0.03mol/L-0.08mol/L，最优选0.04mol/L-0.06mol/L。上述提供的方法中，将获取的澄清液用中极性的大孔强碱型阴离子交换树脂吸附后，先用离子水洗至洗涤液不含糖，再用低浓度的酸行洗脱。上述第二步中，优选收集AA-2G色谱峰纯度在87％以上洗脱液作为纯化液备用。上述第三步中，可以采用膜浓缩(反渗透膜、纳滤膜)，或减压浓缩等方式进行浓缩。采用减压浓缩方法温度在30℃—50℃，优选3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种2‑O‑α‑D‑葡萄糖基‑L‑抗坏血酸(AA‑2G)的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将含有AA‑2G的溶液与阴离子交换树脂接触并被吸附，用0.01‑0.1mol/L的盐酸进行洗脱，收集洗脱液得到2‑O‑α‑D‑葡萄糖基‑L‑抗坏血酸(AA‑2G)。

【技术特征摘要】
1.一种2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)的制备方法，其特征在于，
所述方法包括步骤：
将含有AA-2G的溶液与阴离子交换树脂接触并被吸附，用0.01-0.1mol/L的
盐酸进行洗脱，收集洗脱液得到2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，用于洗脱的酸的浓度为
0.01-0.09mol/L。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，酸浓度为0.03-0.08mol/L。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，含有AA-2G的溶液是将AA-2G
的酶转化液经固液分离而得到的澄清液。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，澄清液中含有的AA-2G经高
效液相检测色谱峰纯度为40-60％，优选为45-55％。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述阴离子交换树脂为大孔
强碱型阴离子交换树脂。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述大孔强碱型阴离子交换
树脂是中极性的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张守雨，那可，赵文杰，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，中国医药工业研究总院，
类型：发明
国别省市：上海;31