本发明专利技术公开了一种耐辐射奇球菌转录抑制因子。所述转录抑制因子可以在体外结合耐辐射奇球菌内含RDRM位点的DNA损伤应急响应与修复基因启动子。结合反应缓冲液成分为100-200mMNaCl、10-50mMTris-HCl8.0、5-10mMMgCl2,反应温度为30℃。该转录抑制因子可以在体内抑制DNA损伤应急响应与修复基因的转录表达。本发明专利技术发现了一种迄今为止未曾被报道过的转录抑制因子，对DNA损伤修复的研究具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种耐辐射奇球菌转录抑制因子。所述转录抑制因子可以在体外结合耐辐射奇球菌内含位点的DNA损伤应急响应与修复基因启动子。结合反应缓冲液成分为100-200mMNaCl、10-50mMTris-HC18.0、5-10mMMgCl2,反应温度为30°C。该转录抑制因子可以在体内抑制DNA损伤应急响应与修复基因的转录表达。本专利技术发现了一种迄今为止未曾被报道过的转录抑制因子，对DNA损伤修复的研究具有重要意义。【专利说明】一种耐辐射奇球菌转录抑制因子
本专利技术涉及一种耐福射奇球菌转录抑制因子DdrO,涉及与DdrO能特异性结合的 DNA序列及其序列特征，体内行使抑制因子的功能。
技术介绍
在分子生物学中，转录因子是指能够与基因上游特异性DNA序列相结合的蛋白 质，并能调控该基因的转录。它可以调控RNA聚合酶与DNA模板的结合，也可以调节RNA聚 合酶在DNA模板上行使RNA转录功能。转录因子不仅与基因上游的启动子区域结合，也可 以和其它转录因子形成转录因子复合体来影响基因的转录。 转录因子及其系统已广泛应用分子生物学，分子医学等领域。利用转录因子系统， 可以建立生物或医学模型。另外，人工转录因子的构建已用于转录因子的生物学功能研究 中起到重要作用。它是将不同的DNA结合结构域与效应结构域组合在一起，人为地构建具 有新的序列特异性与作用效果的转录因子，在基础研究、药物设计以及基因治疗等领域得 到了广泛研究。 耐辐射奇球菌是一种极端环境微生物，以对电离辐射、紫外射线、干燥和氧化胁迫 等极端条件表现极强抗性而著称。体内基因(基因名NCBI-GeneID: 1798752) 表达的产物DdrO蛋白由131个氨基酸组成，属于XRE蛋白家族，仅包含简单的HTH结构域。 但是至今为止，DdrO的具体功能和调控模式及对象从未被研究报道过。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种耐辐射奇球菌转录抑制因子及其结合的特征DNA序列、 以及其体内行使抑制因子的功能。 耐辐射奇球菌转录抑制因子DdrO,所述的转录抑制因子可以在体内外结合耐辐射 奇球菌内含RDRM位点的DNA损伤应急响应与修复基因启动子，抑制DNA损伤应急响应与修 复基因的表达。 所述的DNA损伤应急响应与修复基因启动子，包括i/r洲9、 dr0219、dr0326、dra0346、dr0423、dr0596、dr0906、dr1039、dr 1143、dr1289、dr1696、 drl771、drl775、drl913、drl921、dr2256、dr2275、dr2336Mdr2574 等基满。 所述的转录抑制因子DdrO,其与DNA序列的结合反应缓冲液为100-200 mM NaCl、 10-50 mM Tris-HCl 8. 0、5-10 mM MgCl2，反应温度为 30°C。 所述的转录抑制因子DdrO,其结合最小序列为耐辐射奇球菌内的RDRM位点。 所述的转录抑制因子DdrO,与其蛋白序列同源性高于50%以上的同源蛋白，均具 有相同的生物学功能。 本专利技术的有益效果： 本专利技术提供了一种未被研究报道过的转录抑制因子，可用于体外转录系统研究，对DNA 损伤修复的研究以及转基因工程具有重要意义。 【专利附图】【附图说明】 图1是DdrO在体外结合含RDRM位点的基因启动子； 其中，从左至右，CK为不加 DdrO蛋白的对照；其他为含RDRM位点的基因 启动子，而现PoWJ似未出现DNA条带迁移，原因是其RDRM位点的比 对信任度比较低下。 图2是基因启动子的RDRM位点为体外DdrO结合所必需。 选取含RDRM位点的七个基因启动子作为研究。其中是基因的 全启动子，也包含RDRM位点；而必-则是不包含RDRM位点的办力必基因启动 子。其他基因启动子依次类推。 图3是DdrO在体内能结合DNA损伤响应与修复基因启动子。 其中，办洲滞基因作为阴性对照，因为它是看家基因，在处理前后表达、 量恒定。用特异性的DdrO蛋白兔抗富集所选基因启动子的数量比非特异性的抗体多 三到六倍。 图4是在辐照处理前后野生菌株Rl体内DdrO蛋白对DNA损伤应急响应与修 复基因转录的影响。BeforeIR,指福照前的样品；35min after IR,指福照后恢 复培养35分钟的样品；90min after IR，指辐照后恢复培养90分钟的样品。 图5是在辐照处理前后ftor/缺失菌株YRl体内DdrO蛋白对DNA损伤应急响应 与修复基因转录的影响。BeforeIR,指福照前的样品；35min after IR,指福照 后恢复培养35分钟的样品；90min after IR，指辐照后恢复培养90分钟的样品。 【具体实施方式】 本专利技术所用的基因及各个基因启动子均来自耐福射奇球菌 No. 13939)。耐福射奇球菌是一种极端环境微生物，对电离福射、紫外射 线、干燥和氧化胁迫等极端条件表现极强抗性。转录抑制因子DdrO可以在体外结合耐辐射 奇球菌内含RDRM位点的DNA损伤应急响应与修复基因启动子，抑制DNA损伤应急响应与 修复基因的表达。 实施例1 (I) DdrO在体外结合含RDRM位点的基因启动子 DAyQ 与 dr0070、dr0099、dra0151、dr0219、dr0326、dra0346、dr0423、dr0596、dr0906 和等基因的全启动子在结合缓冲液（100 mM NaCl、20 mM Tris-HCl 8. 0、5 mM MgCl2) 中反应40分钟。用12% TB-PAGE胶检测DNA条带的迁移情况。实验表明，上述基因启动子 均能结合DdrO,发生条带的迁移（图1)。 (2)基因启动子的RDRM位点为体外DdrO结合所必需 DdrO与不含RDRM位点的Ρ?/r㈨㈨你和等基因启动子在 结合缓冲液（100 mM NaCl、20 mM Tris-HCl 8. 0、5 mM MgCl2)中反应 40 分钟。用 12% TB-PAGE 胶检测DNA条带的迁移情况。实验表明，上述不含RDRM位点的基因启动子均不能结合DdrO， 未发生条带迁移（图2)。 (3) DdrO在体内结合含RDRM位点的基因启动子 运用染色质免疫共沉淀技术，用DdrO抗体纯化在体内与DdrO蛋白结合的DNA序列，再 由RT-PCR定量检测和你等的丰度。结果表明，特异性的DdrO抗体能富集 所选基因启动子的数量比非特异性的抗体多三到六倍（图3)。 (4)辐照处理前，野生菌株Rl相对于ftor/突变株YRl胞内DNA损伤应急响应与修 复基因转录水平不变 在辐照处理前，离心收集野生菌株Rl与AorJ缺失菌株YR1，提取RNA，反转录后用 叹览魏你私 dr0089、dr2340、dr2574、dr0070、dra0346、dr0423、dr0090 M drl289 等 基因的转录水平，其中作为阴性基因，基因突变前后表达量恒定。结果表明，在未辐 照处理前，野生菌株Rl与ftorJ缺失菌株YRl体内DNA损伤应急响应与修复基因转录水平 均未发生变化（图4,图5)。 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种耐辐射奇球菌转录抑制因子，其特征在于，所述的转录抑制因子DdrO,NCBI‑GeneID:1798752,可以在体内外结合耐辐射奇球菌的DNA损伤应急响应与修复基因启动子，抑制体内DNA损伤应急响应与修复基因的转录表达。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：华跃进，王云光，王梁燕，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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