一种工业制备色谱纯化长春瑞滨的方法技术

本发明专利技术公开了一种工业制备色谱纯化长春瑞滨的方法。包括（1）采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；（2）将长春瑞滨粗品有机溶剂A溶液加入上述色谱柱；（3）采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后洗下残留物；（4）减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春瑞滨。本发明专利技术所得产品纯度高，该方法可使长春瑞滨的纯度达到98%以上，收率为60～98%。固定相稳定，可重复使用。

【技术实现步骤摘要】
一种工业制备色谱纯化长春瑞滨的方法
本专利技术涉及长春瑞滨的分离纯化技术，特别是涉及一种一种工业制备色谱纯化长春瑞滨的方法，属化学制药领域。
技术介绍
长春瑞滨（英文名：vinorelbine）是上世纪90年代上市的植物类抗肿瘤药物，至今仍是美国国家综合癌症指南推荐的乳腺癌、非小细胞肺癌等常见恶性肿瘤的一线化疗药物，并被广泛用于卵巢癌、淋巴瘤等其他恶性肿瘤。它通过与微管蛋白结合，使细胞在有丝分裂过程中微管形成障碍，结构式如下：长春瑞滨国内对长春瑞滨工业级分离纯化方法研究的不多。中国专利CN10781322A公开了一种长春瑞滨粗品的分离纯化方法，粗品经碱性氧化铝柱洗脱后，得到初纯品，再经C18反相填料柱洗脱，洗脱液经二氯甲烷萃取、再用甲醇重结晶得到长春瑞滨纯品；中国专利CN102199165A公开了长春瑞滨粗品经硅胶柱层析、碱性氧化铝柱层析后得到高纯度产品的工艺，但该工艺步骤繁多，生产成本高，不适宜工业化生产。中国专利CN103788117A公开了长春瑞滨作为中间产品的小试纯化工艺，经过硅胶柱层析，产品纯度可达99%以上，但收率仅为27%左右，该工艺经济性低，不适宜工业化生产。本专利技术研究了一种工业制备色谱制备高纯度长春瑞滨的方法，产品纯度高（98%以上），且工艺收率稳定，适合工业化大生产。
技术实现思路
针对长春瑞滨纯化效率低、工艺复杂等难题，本专利技术的目的是提供一种高纯度、操作性强、适合工业化生产的长春瑞滨的纯化方法。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种长春瑞滨的纯化方法，包括如下步骤：（1）采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；（2）用有机溶剂A将长春瑞滨粗品溶解后加入上述色谱柱；（3）采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后用溶剂洗下残留物；（4）减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春瑞滨，纯度98wt%以上，收率为60～98%。在上述制备方法中：步骤（1）中，所采用硅胶为100～400目；步骤（1）中，所述有机溶剂A为二氯甲烷、正丁醇、甲基异丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氧六环中的一种；步骤（2）中，长春瑞滨上样量为1～6(w/w%)，进料量为制备色谱柱体积的1～12%；步骤（3）中，所述有机溶剂B为丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲亚砜中的一种；步骤（3）中，采用恒压恒流泵进洗脱剂，洗脱剂依次为溶剂A：B=99：1～75：1(v/v)、溶剂A：B=65：1～45：1(v/v)、溶剂A：B=45：1～15：1(v/v)，洗脱剂用量为柱体积的200～500%，洗脱流速为每分钟洗脱柱体积的1～10%；制备色谱柱运行的压力为0.1～0.7MPa；步骤（3）中，洗脱液分段收集，收集分两段，第一段收集溶剂A：B=65：1～45：1(v/v)馏分，为含量较低的长春瑞滨洗脱液；第二段收集溶剂A：B=45：1～15：1(v/v)馏分，主要为高浓度长春瑞滨洗脱液。步骤（3）中，采用溶剂A：B=15：1～5：1(v/v)洗脱残留物。本专利技术以长春瑞滨粗品为起始原料，通过硅胶工业制备色谱纯化分离，实现高纯度长春瑞滨的制备。本专利技术具有如下优点：1、产品纯度高，该方法可使长春瑞滨的纯度达到98%以上，收率为60～98%。固定相稳定，可重复使用；2、本专利技术使用的洗脱剂易回收，可反复使用，生产成本低；3、工艺过程简单，设备一次性投入小，能耗低，可操作性强，适合工业化生产。附图说明图1是本专利技术实施例1采用的长春瑞滨粗品原料的液相色谱分析图谱。图2是本专利技术实施例1得到的长春瑞滨产品的液相色谱分析图谱。具体实施方式实施例11)称取5.96kg300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；2)将270g长春瑞滨粗品（纯度为67.00%）用氯仿溶解，进料，进料量为300ml；3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇=90：1溶剂洗脱2个床层，换用氯仿：甲醇=40：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇=30：1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇=15：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；4）减压回收洗脱液b，得到长春瑞滨116g，液相色谱检测纯度为99.72%，收率为63.94%。长春瑞滨粗品原料的液相色谱分析图谱如图1所示，长春瑞滨产品的液相色谱分析图谱如图2所示。实施例21)称取6.05kg400目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；2)将268g长春瑞滨粗品（纯度为67%）用氯仿溶解，进料，进料量为280ml；3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇=95：1溶剂洗脱2个床层，换用氯仿：甲醇=45：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇=35：1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇=15：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；4）减压回收洗脱液b，得到长春瑞滨178g，液相色谱检测纯度为99.1%，收率为98.24%。实施例31)称取5.98kg200目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；2)将290g长春瑞滨粗品（纯度为79.21%）用氯仿溶解，进料，进料量为320ml；3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇=90：1溶剂洗脱3个床层，换用氯仿：甲醇=40：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇=30：1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇=10：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；4）减压回收洗脱液b，得到长春瑞滨187g，液相色谱检测纯度为98.31%，收率为80.03%。实施例41)称取5.96kg300目硅胶，添加二氯甲烷并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；2)将290g长春瑞滨粗品（纯度为79.21%）用二氯甲烷溶解，进料，进料量为320ml；3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用二氯甲烷：乙腈=80：1溶剂洗脱2个床层，换用二氯甲烷：乙腈=35：1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用二氯甲烷：乙腈=25：1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用二氯甲烷：乙腈=5：1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；4）减压回收洗脱液b，得到长春瑞滨212g，液相色谱检测纯度为98.18%，收率为90.62%。实施例51)称取5.97kg400目硅胶，添加二氯甲烷并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；2)将255g长春瑞滨粗品（纯度为79.65%）用二氯甲烷溶解，进料，进料量为290ml；3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用二氯甲烷：乙腈=85：1溶剂洗脱3个床层，换用二氯甲烷：乙腈=45：1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种长春瑞滨的纯化方法，其特征在于包括如下步骤：（1）采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；（2）用有机溶剂A将长春瑞滨粗品溶解后加入上述色谱柱；（3）采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后用溶剂洗下残留物；（4）减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春瑞滨，纯度98 wt%以上，收率为60～98%。

【技术特征摘要】
1.一种长春瑞滨的纯化方法，其特征在于包括如下步骤：1)称取6.05kg400目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；2)将268g纯度为67%的长春瑞滨粗品，用氯仿溶解，进料，进料量为280ml；3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇=95：1(v/v)溶剂洗脱2个床层，换用氯仿：甲醇=45：1(v/v)溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇=35：1(v/v)溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇=15：1(v/v)的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；4）减压回收洗脱液b，得到长春瑞滨178g，液相色谱检测纯度为99.1%，收率为98.24%。2.一种长春瑞滨...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁诚，傅玉萍，李金华，颜景胡，林秀仙，潘振华，李咏华，朱映萍，
申请(专利权)人：广州白云山汉方现代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44