【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及亲和材料的制备技术,主要为凝集素亲和材料的制备方法,涉及到间隔臂的合成,以及凝集素亲和材料的制备。
技术介绍
蛋白质的糖基化是蛋白质翻译后修饰中最重要的修饰之一,生物体中50%以上的蛋白质是糖基化的,糖蛋白参与了细胞免疫,信号传导,蛋白质的翻译调控、癌症等生理过程,在生命体中起着重要的作用(Syntheticglycopeptidesandglycoproteinsastoolsforbiology,Chem.Soc.Rev.,2005,34,58-68;Cancerglycanbiomarkersandtheirdetection–past,presentandfuture,Anal.Methods,2014,6,3918-3936)。正因为疾病中存在着异常的糖基化现象(ElucidationofN-GlycositesWithinHumanPlasmaGlycoproteinsforCancerBiomarkerDiscovery,MassSpectrometryofGlycoproteins,2013,951,307-322),如岩藻糖增多而唾液酸下降(Fucoseandsialicacidexpressionsinhumanseminalfibronectinandα1-acidglycoproteinassociatedwithleukocytospermiaofinfertilemen,DiseaseMarke ...
【技术保护点】
一种以硅胶为基质的凝集素高效亲和色谱材料的制备方法,步骤如下:a.硅胶预处理:用酸溶液处理硅胶,活化硅胶表面的羟基;b.含有双官能团间隔臂的制备:在惰气气氛保护下,室温,将氨丙基烷氧基硅烷溶于非质子极性溶剂中,加入双官能团试剂,电磁搅拌4~6小时,得到一端含有烷氧官能团,另一端含有羧基、醛基、异氰基或羟基等官能团的硅烷试剂中间体;非质子极性溶剂包括:二氯甲烷、四氢呋喃、二甲基甲酰胺、二噁烷、二甲亚砜、乙腈中的一种或二种以上;双官能团试剂为可以和氨基成化学键的试剂,双官能团试剂中的两个官能团可以相同也可以不同,如丁二酸酐、戊二酸酐、苯甲酸酐、戊二醛、双异氰基PEG(PEG分子量200~6,000)、单环氧基PEG试剂(PEG分子量200~6,000)、醛基PEG(PEG分子量200~6,000)、氧化葡聚糖(分子量1,000~10,000)中的一种或二种以上;c.双官能团硅烷化试剂修饰硅胶的制备:在惰气气氛保护下,将步骤a处理好的硅胶溶于有机溶剂中,加入步骤b所得到的产物溶液,加热回流,反应16~48小时;反应体系冷却至室温,减压过滤,依次用甲苯、四氢呋喃、甲醇、水、甲醇洗涤,固体产品在 ...
【技术特征摘要】
1.一种以硅胶为基质的凝集素高效亲和色谱材料的制备方法,
步骤如下:
a.硅胶预处理:用酸溶液处理硅胶,活化硅胶表面的羟基;
b.含有双官能团间隔臂的制备:在惰气气氛保护下,室温,将
氨丙基烷氧基硅烷溶于非质子极性溶剂中,加入双官能团试剂,电磁
搅拌4~6小时,得到一端含有烷氧官能团,另一端含有羧基、醛基、
异氰基或羟基等官能团的硅烷试剂中间体;
非质子极性溶剂包括:二氯甲烷、四氢呋喃、二甲基甲酰胺、二
噁烷、二甲亚砜、乙腈中的一种或二种以上;
双官能团试剂为可以和氨基成化学键的试剂,双官能团试剂中
的两个官能团可以相同也可以不同,如丁二酸酐、戊二酸酐、苯甲酸
酐、戊二醛、双异氰基PEG(PEG分子量200~6,000)、单环氧基PEG
试剂(PEG分子量200~6,000)、醛基PEG(PEG分子量200~6,000)、
氧化葡聚糖(分子量1,000~10,000)中的一种或二种以上;
c.双官能团硅烷化试剂修饰硅胶的制备:在惰气气氛保护下,
将步骤a处理好的硅胶溶于有机溶剂中,加入步骤b所得到的产物溶
液,加热回流,反应16~48小时;反应体系冷却至室温,减压过滤,
依次用甲苯、四氢呋喃、甲醇、水、甲醇洗涤,固体产品在60~100℃
下干燥12~24小时,得到间隔臂末端含有可活化官能团的硅胶固定
相;
氨丙基烷氧基硅烷的使用量与所修饰的硅胶用量的对应关系为
0.03~3mmol氨丙基烷氧基硅烷/g硅胶;
d.凝集素键合硅胶亲和材料的制备:在惰气气氛保护下,将上
述经过合成的烷氧基硅烷化试剂修饰后的硅胶固定相加入无水有机
溶剂或者不含有一级氨基的缓冲盐溶液中,加入活化官能团试剂,室
温反应2~4小时,减压抽滤,用不含有一级氨基的缓冲盐溶液洗涤
并将所得固定相重溶于不含有一级氨基的缓冲盐溶液置于玻璃容器
中;
活化官能团的试剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3乙基碳二亚胺
(EDCI)、EDCI/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、二环己基碳二亚胺(DCC)、
羰基二咪唑(CDI)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、N,N二琥珀酰亚胺碳
酸酯(DSC)中的一种或二种以上;
不含有一级氨基的缓冲盐溶液为磷酸盐(PBS)缓冲溶液、2-(N-
吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲溶液、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙基磺酸
(HEPES)缓冲溶液中的一种;
在惰气气氛保护下,将凝集素与和凝集素有特异性结合的糖溶
解于不含有一级氨基的缓冲盐溶液中,加入上述的硅胶缓冲盐溶液
中,4~25℃搅拌4~24小时,然后加入含有一级氨基的试剂,对未
\t反应完全的活化基团封尾2~4小时,离心,收集固体,得到键合有
凝集素的硅胶亲和材料;
一级氨基试剂可以为三羟甲基氨基甲烷、氨基乙醇和BSA缓冲
溶液中的一种或两种以上。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:
步骤a:硅胶加入体积浓度为1~36%的盐酸或硝酸溶液中,硅
胶与溶液的体积比1/2~1/20,加热回流搅拌1~48小时,过滤,水
洗至中性,在100~160℃干燥6~10小时,后在40~80℃干燥6~
10小时至恒重。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:
步骤b:氨丙基烷氧基硅烷是氨丙基三甲氧基硅烷或者氨丙基三...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘玉洁,梁鑫淼,于龙,付冬梅,肖远胜,
申请(专利权)人:中国科学院大连化学物理研究所,
类型:发明
国别省市:辽宁;21
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