本发明专利技术涉及一种苯腙类化合物、其制备方法、检测方法和用途。该化合物如式(I)所示，是依达拉奉合成过程中产生的一种有关物质。将苯肼、乙酰乙酸乙酯，亚硫酸氢钠加入水或有机溶剂中反应，反应完毕后，经硅胶柱色谱分离得到该化合物。本发明专利技术还提供了一种高效液相色谱法测定该化合物、依达拉奉及其相关物质的方法，该方法操作简便，测定结果准确可靠。该化合物可作为杂质对照品用于依达拉奉原料药及其制剂的有关物质检查，控制依达拉奉产品的质量，提高安全性和可控性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，具体涉及到一种苯腙类化合物的合成、分离、检测以及在药物生产过程中的用途。此化合物是依达拉奉生产过程中产生的有关物质，将用于依达拉奉药品质量控制中。
技术介绍
依达拉奉(Edaravone)是第一个用于治疗脑梗塞的自由基清除剂，由日本三菱制药公司开发并于2001年在日本批准上市，其化学名为3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，化学结构式如下：文献报道的依达拉奉化学合成方法有多种，其中以下为主要两种合成路线：1)苯肼与丁酮酰胺在水中缩合反应可得依达拉奉(全国原料药工艺汇编，1980，737-739)，此方法产品收率较高，但丁酮酰胺价格较高。2)苯肼与乙酰乙酸乙酯在水或有机溶剂中缩合反应得依达拉奉(US4857542)，此方法中乙酰乙酸乙酯是常用的工业试剂，有利于大规模生产。在依达拉奉生产、储存、运输过程中，往往产生一些有关物质，这些有关物质影响药品的质量。现在已有报道的有关物质主要是依达拉奉二聚体、三聚体和硫化物(Eman，A等，JournaloftheChineseChemicalSociety.2004；51:859-862。Abolfath，R等，OrientalJournalofChemistry.2012；28：153-164)，然而，在专利技术人在研制过程中，又分离和鉴定出一种新的依达拉奉有关物质，即式(I)的苯腙类化合物。该化合物是在依达拉奉合成过程中产生的，专利技术人分离出该化合物，并确证了其结构，式(I)化合物为黄色油状液体物质，严重影响依达拉奉原料药的颜色，进一步，专利技术人通过动物实验发现式(I)化合物在一定浓度范围内能够导致健康小鼠的死亡。
技术实现思路
第一方面，本专利技术提供式(I)化合物，名称为N′-苯基乙烷亚肼酸乙酯，分子式是C10H14N2O，分子量为178.23的黄色油状液体物质：第二方面，本专利技术提供一种制备式(I)化合物的方法，其包括：将苯肼、乙酰乙酸乙酯、亚硫酸氢钠加入水或有机溶剂或其混合物中反应，反应完毕析出依达拉奉固体后，滤液经硅胶柱色谱法使用石油醚和乙酸乙酯的混合液作为洗脱液分离得式(I)化合物。在一个优选的实施方案中，所述反应在油浴中进行1-5小时，优选2-4小时，反应温度为70-120℃，优选80-100℃。在另一个优选的实施方案中，所述苯肼:乙酰乙酸乙酯:亚硫酸氢钠的重量比为4-10:5-12:1，优选为5:6:1或10:12:1或4:5:1。在另一个优选的实施方案中，所述有机溶剂选自乙醇、乙酸、甲醇、甲酸、丙酮、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、己烷、二甲基亚砜和乙酸乙酯，优选乙醇或乙酸；水和有机溶剂的混合物选自乙醇-水、乙酸-水、甲醇-水、甲酸-水、丙酮-水、正丙醇-水、异丙醇-水、叔丁醇-水和二甲基亚砜-水，优选乙醇-水或乙酸-水。在另一个优选的实施方案中，所述硅胶柱色谱法中洗脱液石油醚:乙酸乙酯的体积比为9:1至1:9。该制备方法重复性好，产品纯度高，易于保存。专利技术人在用高效液相色谱法(HPLC)检测依达拉奉及其有关物质时发现，由于新的有关物质(即式(I)化合物)与依达拉奉极性相差较大，多数HPLC条件并未检测到该化合物。然而，专利技术人采用梯度洗脱，能够灵敏的检测到该有关物质。第三方面，本专利技术提供一种高效液相色谱法(HPLC)测定式(I)化合物、依达拉奉及其相关物质的方法，其中：依达拉奉相关物质为依达拉奉二聚体和依达拉奉三聚体；色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，优选ZORBAXSB-C18柱，规格250×4.6mm或150×4.6mm；流动相选自甲醇-水，甲醇-缓冲盐水溶液、乙腈-水、乙腈-缓冲盐水溶液和甲醇-乙腈-缓冲盐水溶液系统，梯度洗脱，所述缓冲盐水溶液优选选自磷酸缓冲盐水溶液和醋酸缓冲盐水溶液，更优选磷酸二氢铵水溶液；流速为0.8-1.2mL/min；柱温为20-40℃；以及采用DAD检测器，检测波长为245nm。在一个优选的实施方案中，以50mmol/ml磷酸二氢铵水溶液，用20体积％磷酸水溶液调节pH至3.5为流动相A，甲醇为流动相B进行梯度洗脱：在此条件下，式(I)化合物、依达拉奉、依达拉奉二聚体和依达拉奉三聚体的相对保留时间分别为31.0min、10.1min、18.7min和27.4min。在另一个优选的实施方案中，以10mmol/ml磷酸二氢铵水溶液，用氨水调节pH至5.5为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱：在此条件下，式(I)化合物、依达拉奉、依达拉奉二聚体和依达拉奉三聚体的相对保留时间分别为46.6min、13.3min、21.1min和38.4min。该HPLC测定法可以在生产过程中高效、灵敏、准确地检测依达拉奉及其有关物质，确定其含量，从而保证依达拉奉产品质量。进一步，专利技术人对国内五家已上市的依达拉奉药品的进行检测，发现都不同程度的含有式(I)化合物。由于式(I)化合物含有一个苯腙活性基团，专利技术人通过动物实验结果发现式(I)化合物能够在一定浓度范围内导致健康小鼠死亡。因此专利技术人将式(I)化合物列为依达拉奉药品生产过程中质量监控的一个新的有关物质，结合依达拉奉的临床应用，应在依达拉奉的生产中加以控制。因此，第四方面，本专利技术涉及式(I)化合物作为监控依达拉奉杂质的对照品的用途。换言之，式(I)化合物可作为杂质对照品用于依达拉奉原料药及其制剂的有关物质检查，控制依达拉奉产品的质量，提高安全性和可控性。运用本专利技术的制备方法能够简单、快速分离纯化和精制出符合有关物质对照品要求的产品，满足依达拉奉药品在生产过程中有关物质检测该杂质对照品的要求。附图说明图1为适合于依达拉奉原料药中的本专利技术式(I)化合物、依达拉奉、依达拉奉二聚体和依达拉奉三聚体系统适用性HPLC色谱图。图2为适合于依达拉奉注射液中的本专利技术式(I)化合物、依达拉奉、依达拉奉二聚体和依达拉奉三聚体系统适用性HPLC色谱图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步阐述，但不对本专利技术有任何限制。化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用BrukerAVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。MS的测定用FINNIGANLCQAd(ESI)质谱仪(生产商:Thermo,型号：FinniganLCQadvantageMAX)。薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。本专利技术的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自海诺泰化工、江苏强盛功能化学、上海润捷、Sigma、中国食品药品检定研究院、默克等公司。实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。实施例1：式(I)化合物的制备分别称取乙酰乙酸乙酯30本文档来自技高网...
【技术保护点】
式(I)化合物：
【技术特征摘要】
1.式(I)化合物：2.一种制备根据权利要求1所述的式(I)化合物的方法，其包括：将苯肼、乙酰乙酸乙酯、亚硫酸氢钠加入水或有机溶剂或其混合物中反应，反应完毕析出依达拉奉固体后，滤液经硅胶柱色谱法使用石油醚和乙酸乙酯的混合液作为洗脱液分离得式(I)化合物。3.根据权利要求2所述的制备式(I)化合物的方法，其中所述反应在油浴中进行1-5小时，优选2-4小时，反应温度为70-120℃，优选80-100℃。4.根据权利要求2所述的制备式(I)化合物的方法，其中所述苯肼:乙酰乙酸乙酯:亚硫酸氢钠的重量比为4-10:5-12:1，优选为5:6:1或10:12:1或4:5:1。5.根据权利要求2所述的制备式(I)化合物的方法，其中所述有机溶剂选自乙醇、乙酸、甲醇、甲酸、丙酮、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、己烷、二甲基亚砜和乙酸乙酯，优选乙醇或乙酸；水和有机溶剂的混合物选自乙醇-水、乙酸-水、甲醇-水、甲酸-水、丙酮-水、正丙醇-水、异丙醇-水、叔丁醇-水和二甲基亚砜-水，优选乙醇-水或乙酸-水。6.根据权利要求2所述的制备式(I)化合物的方法，其中所述硅胶柱色谱法中洗脱液石油醚:乙酸乙酯的体积比为9:1至1:9。7.一种高效液相色谱法测定根据权利要求1所述的式(I)化合物、依达拉奉及其相关物质的方法，其中：依达拉奉相关物质为依达拉奉二聚体和依达拉奉三聚体；色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，优选ZORBAXSB-C18柱，规格2...
【专利技术属性】
技术研发人员：司聚同，杨志和，刘涛，
申请(专利权)人：恩瑞生物医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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