【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，尤其是涉及一种卵磷脂中相关组分的检测方法及其应用。
技术介绍
1、卵磷脂是一含磷的极性脂类物质，其广义是各种磷脂的总称，包括磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰肌醇(pi)、溶血磷脂酰胆碱(lpc)、溶血磷脂酰乙醇胺(lpe)、鞘磷脂(sm)等。
2、目前卵磷脂的来源主要为大豆和蛋黄。卵磷脂是一种重要的药用辅料，广泛应用于脂质体、纳米乳、固体脂质纳米粒、药质体等现代药物制剂中。蛋黄卵磷脂是一种从鸡蛋黄中精制而得的天然磷脂混合物，被广泛应用于脂肪乳、脂质体等特殊注射剂中。
3、研究表明，蛋黄卵磷脂除了含有磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰乙醇胺(pe)和鞘磷脂(sm)、磷脂酰肌醇(pi)外，还含有两种微量的溶血磷脂，即溶血磷脂酰胆碱(lpc)和溶血磷脂酰乙醇胺(lpe)，磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰乙醇胺(pe)在蛋黄卵磷脂纯化、贮藏过程中易发生水解失去一分子脂肪酸后生成溶血磷脂酰胆碱(lpc)、溶血磷脂酰乙醇胺(lpe)，lpc和lpe具有较强的表面活性，在浓度较高时能够使红细胞膜破裂，引起溶血或细胞坏死。因此，中/长链脂肪乳注射液、丙泊酚注射液等脂肪乳制剂均将lpc、lpe作为影响其质量的主要杂质来控制。
4、磷脂酰胆碱(pc)是蛋黄卵磷脂的主要成分，应用于注射剂的辅料蛋黄卵磷脂，其组成及各成分含量的比例，尤其是除磷脂酰胆碱(pc)外的磷脂酰乙醇胺(pe)和鞘磷脂(sm)、磷脂酰肌醇(pi)、溶血磷脂酰乙醇胺(lpe)、溶血磷脂酰胆碱(lpc)对制剂的质量、稳定性及
5、现常用对卵磷脂中不同组分的定量、定性分析的检测方法有薄层色谱法(tlc)、高效液相色谱法(hplc)，由于薄层色谱法需要较高的点样技术，干扰因素多，使结果重现性差。高效液相色谱法通常联合紫外检测器(uv)、示差折光检测器(ri)、蒸发光散射检测器(elsd)。
6、示差折光检测器在定量分析卵磷脂时有一定的优势，但该检测器对温度敏感且灵敏度低，仪器平衡时间长，基线不容易稳定，限制了示差折光检测器的使用。
7、紫外检测器利用最大吸收波长对卵磷脂进行定量分析，由于卵磷脂组分无紫外吸收或紫外吸收波长较弱，处于紫外吸收波长的末端，容易受到其他溶剂的干扰，而且紫外检测器是一种选择型检测器，只对具有π键和孤电子的物质有响应，其响应值随物质所含官能团及官能团连接的方式的不同有着显著性差异，而蛋黄卵磷脂的脂肪酸组成常因鸡种和饲料内的脂肪酸组成变化而异，从而不同产地、不同鸡种的鸡蛋所含的紫外响应值相差较大，因此蛋黄卵磷脂的组分较少有研究者使用紫外检测器进行检测。
8、蒸发光散射检测器是通用检测器，现有技术多采用正相高效液相色谱法联合蒸发光散射检测器检测蛋黄卵磷脂的不同组分，但定量限浓度几乎都在10μg/ml以上，蛋黄卵磷脂种含量较低的pi、lpe、sm、lpc等成分需要供试品较高浓度才能检出，但高浓度的pc、pe与相邻的有关物质分离度容易受影响，从而影响测定的准确性，普遍存在灵敏度差、分离度差、重复性差缺点。
9、在目前相关的研究中正相高效液相色谱法多采用正相硅胶柱进行分离分析，硅胶柱存在非特异性吸附再生困难，对于卵磷脂这样组成复杂的样品，易损伤色谱柱，而且硅胶柱进行吸附色谱分析时必须使用不含水的流动相，分析时间长，洗脱程序复杂，应用于蛋黄卵磷脂中各组分测定时重复性、耐用性差。正相高效液相色谱法流动相体系多采用正己烷-异丙醇-水-酸流动相体系，流动相组成复杂，正己烷、异丙醇等有机溶剂对环境产生危害风险较高。
10、蛋黄卵磷脂为药典收载品种，在中国药典、欧洲药典及美国药典中均有收载，在现行版中国药典、欧洲药典及美国药典的蛋黄卵磷脂(供注射用)标准中的有关物质测定项均采用正相液相色谱法进行测定，中国药典采用的色谱柱以硅胶为填充剂的色谱柱，美国药典与欧洲药典均采用二醇基团键合硅胶为填充剂的色谱柱。检测器均为蒸发光散射检测器，中国药典采用甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(流动相a)与正己烷-异丙醇-流动相a(流动相b)复杂的体系进行梯度洗脱，该测定方法pe、pi、lpe分离度较差，洗脱时间长，由于硅胶色谱柱的不稳定性，常常导致pe、pi、lpe无法达到基线分离，因而不能准确测定蛋黄卵磷脂中各组分的含量。在现行版美国药典和欧洲药典蛋黄卵磷脂质量标准中只对pe、pc、lpc进行测定，不含pi、lpe、sm检查项，通过方法对比，在美国药典与欧洲药典的色谱条件无法对pi、lpe进行有效的分离，其他专利和文献中尚未发现有效的利用反相高效液相色谱法同时分离检测蛋黄卵磷脂中5种组分的方法。因此，研究一种能准确、快速测定分离检测蛋黄卵磷脂中组分的检测方法，对企业药物研发和生产来说显得尤为迫切，对药品质量可控存在着很大意义。
11、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种卵磷脂中相关组分的检测方法，具体包括磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺和溶血磷脂酰胆碱。该方法具有专属性强、分离度好、精密度好、准确度高、耐用性好、操作安全快捷等特点，可有效用于卵磷脂生产工艺的过程、终产品质量控制。
2、为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
3、第一方面，提供了一种卵磷脂中相关组分的检测方法，所述相关组分包括磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺和溶血磷脂酰胆碱；
4、所述检测方法包括采用反相高效液相色谱法对所述相关组分进行分离测定，获取色谱图并计算得到所述相关组分的含量；
5、所述反相高效液相色谱法的色谱条件包括：
6、色谱柱采用亲水作用色谱柱；
7、流动相系统包括流动相a、流动相b和流动相c；流动相a为甲醇；流动相b由乙腈、水和乙酸铵组成；流动相c为乙腈；
8、洗脱采用梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：
9、 时间/min 流动相a/％v/v 流动相b/％v/v 流动相c/％v/v 0 32 8 60 0.1 32 8 60 3.5 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种卵磷脂中相关组分的检测方法，其特征在于，所述相关组分包括磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺和溶血磷脂酰胆碱；
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，流动相B中乙腈和水的体积比为10:90，乙酸铵的浓度为0.04M。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱为Waters Xbridge Hilic色谱柱；
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱柱温为30℃～40℃，优选为35℃；
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述卵磷脂包括蛋黄卵磷脂。
6.根据权利要求1～5任一项所述的检测方法，其特征在于，待测样本包括供试品溶液，所述供试品溶液中待测的卵磷脂样品的浓度为1～5mg/mL；
7.根据权利要求1～5任一项所述的检测方法，其特征在于，待测样本包括对照品溶液，所述对照品溶液中含有已知含量的磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂和溶血磷脂酰胆碱中的至少一种；
8.根据权利要求1～5任一项所述的检测方法，其特征在于，以外标
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：
10.权利要求1～9任一项所述的卵磷脂中相关组分的检测方法在如下任一项中的应用：
...【技术特征摘要】
1.一种卵磷脂中相关组分的检测方法，其特征在于，所述相关组分包括磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺和溶血磷脂酰胆碱；
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，流动相b中乙腈和水的体积比为10:90，乙酸铵的浓度为0.04m。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱为waters xbridge hilic色谱柱；
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱柱温为30℃～40℃，优选为35℃；
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述卵磷脂包括蛋黄卵磷脂。
6.根据权利要求1～5任一项...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁北梅，宋晓燕，朱映萍，温恺嘉，许文东，李咏华，王小妹，巫建新，唐顺之，文舒琪，祝芷琦，牟肖男，
申请(专利权)人：广州白云山汉方现代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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