【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于保健食品的质量标准及其检测，具体涉及灵芝孢子油中多种脂质成分含量的检测方法。
技术介绍
1、灵芝孢子油是以多孔菌科真菌赤芝(ganoderma lucidum(leyss.ex fr.)karst.)的孢子为原料，通过破壁及超临界萃取技术得到的孢子油。研究表明，灵芝孢子油具有良好抑瘤、提高免疫调节、提高记忆力、降血脂等作用，因此，随着现代人对生命健康的重视、对生活质量的追求，灵芝孢子油的保健品陆续进入市场。
2、灵芝孢子油含有甘油酯类、甾醇类、三萜类等多种化学活性成分，其中，脂质成分是灵芝孢子油的主要成分。目前，灵芝孢子油中脂质成分的含量检测大多是利用高效液相联用蒸发光检测器(hplc-elsd)进行检测，其利用浓度对数、峰面积对数拟合线性进行计算处理，较为复杂繁琐，重现性差。灵芝孢子油中脂质成分种类较多，但相关的含量检测研究较少，已知报道中有hplc-elsd对灵芝孢子油中8种甘油三酯进行测定，意味着在检测灵芝孢子油中脂质成分含量时，实验操作步骤琐碎，实验结果计算量较大。此外，甘油三酯由不同的脂肪酸与甘油骨架结合而成，由于脂肪酸的碳链长度、饱和程度不同，脂肪酸的种类十分庞大，或者还有不同类型的甾醇、三萜类成分也结合于骨架，组合在甘油三酯上有不同的几何构型，丰富了脂质成分的种类，不同结构的脂质成分其物理、化学性质不同，增加了分离难度。目前，油脂脂质成分物质含量检测常采用不同比例异丙醇-乙腈为流动相，使用elsd检测器，利用浓度对数、峰面积对数拟合线性法进行定量计算。
3、一测多评法(qams
技术实现思路
1、针对脂质成分对照品较为难得、昂贵，外标法计算繁琐等情况，本专利技术首次提供了一测多评法检测灵芝孢子油中脂质成分含量的检测方法，对几种能定位的脂质成分进行准确检测。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
3、一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，包括采用高效液相色谱法，以甘油三油酸酯为内参物，hplc-uv联用，建立甘油三油酸酯与其他脂质成分的校正因子，利用所述校正因子计算灵芝孢子油中多种待测组分的浓度，所述高效液相色谱的色谱条件包括采用乙腈-丙酮-异辛烷作为流动相。
4、作为本专利技术方法的一种优选方案，所述其他脂质成分包括1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯、顺-1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、顺-1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯、1,2-二油酰基-3-棕榈酰基-rac-甘油中的一种或多种。
5、作为本专利技术方法的一种优选方案，所述高效液相色谱的色谱条件包括：所述流动相为体积比53～57.7：32～29.1：15～13.2的乙腈-丙酮-异辛烷；固定相为c18色谱柱，柱温35～40℃。
6、作为本专利技术方法的一种优选方案，所述流动相为体积比57.7：29.1：13.2的乙腈-丙酮-异辛烷；所述固定相为ymc-triart-c18色谱柱，规格为250*4.6mm ds-3μm 12nm，柱温38℃。
7、作为本专利技术方法的一种优选方案，包括以下步骤：
8、a.供试品溶液的制备：精密称取灵芝孢子油样品，于溶剂中溶解并稀释，得到供试品溶液；
9、b.对照品储备液的制备：
10、b1)精密称取所述1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯、顺-1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、顺-1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯的标准品，分别以异丙醇溶解，稀释得到得1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯对照品储备液、顺-1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯对照品储备液、顺-1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯对照品储备液，浓度均为3mg/ml左右，备用；
11、b2)精密称取所述甘油三油酸酯、1,2-二油酰基-3-棕榈酰基-rac-甘油的标准品，分别以体积比为53：47的乙腈-异丙醇溶解，稀释得到甘油三油酸酯对照品储备液、1,2-二油酰基-3-棕榈酰基-rac-甘油对照品储备液，浓度均为2mg/ml左右，备用；
12、c.混标液的制备：精密取步骤b中所述1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯对照品储备液、所述顺-1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯对照品储备液、所述顺-1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯对照品储备液、所述甘油三油酸酯、所述1,2-二油酰基-3-棕榈酰基-rac-甘油的标准品，混合配制后得到混标液，留待检测并计算所述校正因子；
13、d.标准曲线溶液的制备：精密吸取步骤b中所述甘油三油酸酯对照品储备液，溶解配制成不同浓度的甘油三油酸酯标准曲线溶液；
14、e.检测：精密吸取步骤d中所述不同浓度的甘油三油酸酯标准曲线溶液分别进行高效液相色谱检测，制作内参物标准曲线；精密吸取步骤a中所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到供试品溶液图谱；
15、f.计算：所述供试品溶液图谱中呈现甘油三油酸酯与所述其他脂质成分的特征峰，采用内标法，通过所述校正因子与步骤e中所述内参物标准曲线，计算得到某待测组分浓度，计算方式如下：
16、f1)取所述供试品溶液，进行高效液相色谱检测，得到供试品溶液图谱，
17、f2)根据所述供试品溶液图谱，通过步骤e中所述内参物标准曲线，得到所述供试品溶液中甘油三油酸酯浓度；
18、f3)所述供试品溶液中甘油三油酸酯作为内参物，编号为4x，所述供试品溶液中所述某待测组分的编号设为ax，根据步骤f1)中所述供试品溶液图谱、f2)中所述甘油三油酸酯浓度，通过所述校正因子进行计算，所述某待测组分浓度的公式如下：
19、
20、f为某待测组分的校正因子，
21、a4x为供试品溶液中内参物峰面积，
22、w4x为供试品溶液中内参物浓度，
23、aax为供试品溶液中某待测组分峰面积，
24、wax为供试品溶液中某待测组分浓度。
25、进一步地，所述校正因子通过如下方式得到：
26、a)取所述混标液注入高效液相色谱仪，得到混标液图谱；
27、b)根据所述混标液图谱，所述混本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，包括采用高效液相色谱法与紫外检测联用，以甘油三油酸酯为内参物，建立甘油三油酸酯与其他脂质成分的校正因子，利用所述校正因子计算灵芝孢子油中多种待测组分的浓度，所述高效液相色谱法的色谱条件包括采用乙腈-丙酮-异辛烷作为流动相。
2.如权利要求1所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，所述其他脂质成分包括1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯、顺-1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、顺-1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯、1,2-二油酰基-3-棕榈酰基-rac-甘油中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件包括：所述流动相为体积比53～57.7：32～29.1：15～13.2的乙腈-丙酮-异辛烷；固定相为C18色谱柱，柱温35～40℃。
4.如权利要求3所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件包括：所述流动相为体积比57
5.如权利要求1～4任一项所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.如权利要求5所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，步骤F中某待测组分浓度计算方式如下：
7.如权利要求5所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，步骤A中所述供试品溶液的制备包括以下步骤：精密称取所述灵芝孢子油样品，用体积比为53：47的乙腈-异丙醇溶解并稀释至4.5mg/mL，得到所述供试品溶液；步骤B1)中所述1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯对照品储备液、顺-1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯对照品储备液、顺-1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯对照品储备液浓度均为3mg/mL；步骤B2)中所述甘油三油酸酯对照品储备液、1,2-二油酰基-3-棕榈酰基-rac-甘油对照品储备液浓度均为2mg/mL。
8.如权利要求5所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，步骤C中所述混标液的制备包括以下步骤：精密吸取步骤B中所述1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯对照品储备液、所述顺-1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯对照品储备液、所述顺-1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯对照品储备液，及所述甘油三油酸酯对照品储备液、所述1,2-二油酰基-3-棕榈酰基-rac-甘油对照品储备液，以体积比为53：47的乙腈-异丙醇稀释，配制成1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯浓度为0.12mg/mL、顺-1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯浓度为0.12mg/mL、顺-1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯浓度为0.12mg/mL、甘油三油酸酯浓度为0.4mg/mL、1,2-二油酰基-3-棕榈酰基-rac-甘油浓度为0.4mg/mL的所述混标液。
9.如权利要求5所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，步骤D中所述标准曲线溶液的制备包括以下步骤：精密吸取步骤B中所述甘油三油酸酯对照品储备液，以体积比为53：47的乙腈-异丙醇稀释，配制成浓度分别为0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.2mg/mL的所述甘油三油酸酯标准曲线溶液。
10.如权利要求1～4任一项所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件包括如下：所述高效液相色谱法采用的色谱仪包括赛默飞U3000高效液相色谱仪，进样量为20μL，流动相衡流速为1.0mL/min，流动相保持至60分钟；所述紫外检测的波长选择205～206nm。
...【技术特征摘要】
1.一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，包括采用高效液相色谱法与紫外检测联用，以甘油三油酸酯为内参物，建立甘油三油酸酯与其他脂质成分的校正因子，利用所述校正因子计算灵芝孢子油中多种待测组分的浓度，所述高效液相色谱法的色谱条件包括采用乙腈-丙酮-异辛烷作为流动相。
2.如权利要求1所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，所述其他脂质成分包括1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯、顺-1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、顺-1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯、1,2-二油酰基-3-棕榈酰基-rac-甘油中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件包括：所述流动相为体积比53～57.7：32～29.1：15～13.2的乙腈-丙酮-异辛烷；固定相为c18色谱柱，柱温35～40℃。
4.如权利要求3所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件包括：所述流动相为体积比57.7：29.1：13.2的乙腈-丙酮-异辛烷；所述固定相为ymc-triart-c18色谱柱，规格为250*4.6mm ds-3μm 12nm，柱温38℃。
5.如权利要求1～4任一项所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.如权利要求5所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，步骤f中某待测组分浓度计算方式如下：
7.如权利要求5所述的一测多评法检测灵芝孢子油中多种脂质成分含量的方法，其特征在于，步骤a中所述供试品溶液的制备包括以下步骤：精密称取所述灵芝孢子油样品，用体积比为53：47的乙腈-异丙醇溶解并稀释至4.5mg/ml，得到所述供试品溶液；步骤b1)中所述1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯对照...
【专利技术属性】
技术研发人员：文舒琪，梁北梅，唐顺之，许文东，韩亚明，袁诚，王小妹，温恺嘉，祝芷琦，白柏，李遥，宋晓燕，
申请(专利权)人：广州白云山汉方现代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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