一种猪瘟脾淋源活疫苗用冻干保护剂，属于兽用生物制品技术领域。该冻干保护剂每1000ml磷酸缓冲液中含有中药多糖30～100g、中药黄酮20～60g、法氏囊素2～16mg，所述的中药多糖和中药黄酮从以下中药组合物中提取得到：垂盆草、金果榄、鸡矢藤、水牛角、蝼蛄、香薷、防己、半边莲和路路通。采用本发明专利技术冻干保护剂制备的疫苗免疫机体后，能促进机体B淋巴细胞前体的分化、增殖，加快B细胞内DNA转录成mRNA的速度，促进B细胞内蛋白质的生成，从而使B细胞产生和分泌抗体能力加强，从而可提高机体免疫力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种猪瘟脾淋源活疫苗用冻干保护 剂。
技术介绍
猪瘟（CSF)是国际动物卫生组织（OIE)和中国的A类法定传染病，是我国强制性免 疫的重大动物疫病之一，是危害我国养猪业的"第一杀手"。猪瘟是由猪瘟病毒引起的，无法 用药物进行控制，疫苗免疫是最有效的办法。 目前国内外市售的猪瘟疫苗主要有猪瘟脾淋苗、猪瘟细胞苗以及猪瘟亚单位疫 苗，但市场上猪瘟疫苗的主流产品仍然是猪瘟脾淋苗和猪瘟细胞苗。作为疫苗中的经 典-精制猪瘟脾淋源活疫苗仍具有不可替代的作用。 猪瘟脾淋源活疫苗选用中国猪瘟兔化弱毒株（C株)，该疫苗株能激发机体快速产 生免疫力、遗传稳定、毒力不返强，是国际上公认的目前世界上最为安全有效的弱毒疫苗 株。采用该毒株接种优良家兔，收获感染家兔的脾脏制成乳剂，与冻干保护剂混匀后经过冷 冻真空干燥制成猪瘟脾淋源活疫苗。 目前市场认为猪瘟脾淋源活疫苗免疫效果不理想，对猪瘟脾淋活疫苗的认识仍存 在误区，这主要和目前国内猪瘟脾淋源活疫苗使用方法不当、混合感染猪只免疫后应激过 大，以及质量参差不齐等情况有关。 近年来，人们针对活疫苗冻干保护剂进行了大量研宄，多为耐热保护剂，解决了疫 苗在运输使用过程中的耐热问题，但对于提高活疫苗效果方面几乎没有提升。 多糖是中药活性成分之一，大量研宄表明，多糖及糖复合物在生物体内不仅是作 为能量资源和构成材料，更重要的是它存在于一切细胞膜结构中，参与生命现象中细胞的 各种活动。多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，具有清除自由基、提高抗氧化酶 活性和抑制脂质过氧化的能力，同时多糖也具有很好的耐热效果，多种实验表明中药多糖 可作为耐热保护剂添加于活疫苗冻干保护剂中。 黄酮类化合物是自然界中存在的多元酚类物质，也是自然界药用植物中的主要活 性成分之一。它是指具有15个碳原子并以C6-C3-C6的方式构成的三环天然有机物，是植 物在长期自然选择中产生的二级代谢产物，现在已分离鉴定的有4000多种。它广泛存在于 果蔬、中草药中，无毒副作用，它具有显著的清除机体内自由基、抗老化、抗突变、调血脂降 血压等药理保健功能，是一类极具开发前景的天然有机抗氧化剂，这些抗氧化活性物质可 以减少和清除机体内自由基，具有预防疾病的作用。 法氏囊素（bursin，BS)是从禽类特有的体液免疫中枢淋巴器官法氏囊（Bursa of fabricius)中分离出来的一种活性三肽物质，其结构为L-LyS-His-Gly-NH2。研宄表明，BS 能促进禽类和哺乳动物B淋巴细胞前体的分化、增殖，能提高B细胞系Daudi细胞内第二信 使cAMP和cGMP水平，加快B细胞内DNA转录成mRNA的速度，促进B细胞内蛋白质的生成， 从而使B细胞产生和分泌抗体能力加强。 基于上述
技术介绍
，本专利技术提出一种猪瘟脾淋源活疫苗用冻干保护剂。该保护剂 主要由中药多糖、中药黄酮、法氏囊素等组成。本专利技术所制备的冻干保护剂一方面可以提供 给活疫苗耐热保护，另一方面在疫苗使用过程中大大提高了疫苗的使用效果，同时还兼具 了提高机体免疫力的功效。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供一种猪瘟脾淋源活疫苗用 冻干保护剂的技术方案，该冻干保护剂能够大幅度提高了机体的免疫力，提高体液免疫能 力，刺激机体产生高效的中和抗体，提高了机体预防疾病的能力。 所述的一种猪瘟脾淋源活疫苗用冻干保护剂，其特征在于该冻干保护剂每1000 ml 磷酸缓冲液中含有中药多糖30~100g、中药黄酮20~60g、法氏囊素2~16mg，所述的中 药多糖和中药黄酮从以下中药组合物中提取得到：垂盆草、金果榄、鸡矢藤、水牛角、蝼蛄、 香薷、防己、半边莲和路路通。 所述的一种猪瘟脾淋源活疫苗用冻干保护剂，其特征在于该冻干保护剂每1000 ml 磷酸缓冲液中含有中药多糖50~80g、中药黄酮30~50g、法氏囊素4~12mg。 所述的一种猪瘟脾淋源活疫苗用冻干保护剂，其特征在于所述的中药多糖和中药 黄酮通过以下步骤制得： a、 按垂盆草10~30份、金果榄20~40份、鸡矢藤10~20份、水牛角10~30份、 蝼蛄10~30份、香薷10~20份、防己10~30份、半边莲10~30份和路路通10~20 份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量15倍的纯化水，水浴至 90°C，并保持在90°C，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次； b、 弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经1000 Orpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上 清； c、 将b中上清进行醇沉，沉淀即为粗制中药多糖，上清即为粗制中药黄酮； d、 用灭菌纯化水洗涤c中粗制中药多糖，洗涤后用20倍量的42°C灭菌纯化水进行溶 解，溶解后，按通过活性炭柱进行内毒素吸附，收集滤出液； e、 将d中上滤出液通过sevag法除去蛋白； f、 将e中中药多糖进行真空冷冻干燥制得中药多糖； g、 将c中粗制中药黄酮进行减压真空浓缩，浓缩物用灭菌注射用水稀释清洗，再次进 行减压真空浓缩，如此三次后经冷冻真空干燥制成中药黄酮。 所述的一种猪瘟脾淋源活疫苗用冻干保护剂，其特征在于所述的法氏囊素通过以 下步骤制得：取健康法氏囊组织，将法氏囊组织剔除筋膜和脂肪组织，PH7. 2灭菌冷PBS洗 净；按1 :1比例加入pH 7. 2灭菌冷PBS，在组织匀浆机中进行高速匀浆；匀浆液中加入2. 5% 的胰蛋白酶，反复冻融3次，12000rpm离心20min，弃沉淀；上清用1000 da截留分子量的超 滤膜进行超滤，膜下液经〇. 22um滤膜过滤除菌，滤过液即为法氏囊素粗提液；粗提液经冷 冻真空干燥制得法氏囊素。 上述的一种猪瘟脾淋源活疫苗用冻干保护剂，设计合理，与传统的冻干保护剂相 比其具有以下优点： 1.本专利技术所制备的冻干保护剂，具有耐热效果，可提高疫苗运输、储藏等便利性。 2.采用本专利技术冻干保护剂所制备的疫苗在免疫注射时可以减少猪只疼痛感，降低 猪只的应激反应。 3.采用本专利技术冻干保护剂制备疫苗，可以大大提高活疫苗的使用效果，快速的产 生中和抗体，减少免疫空档期，降低猪只发病几率，提高机体抵御疾病的能力。 4.采用本专利技术冻干保护剂制备的疫苗免疫机体后，能促进机体B淋巴细胞前体的 分化、增殖，加快B细胞内DNA转录成mRNA的速度，促进B细胞内蛋白质的生成，从而使B 细胞产生和分泌抗体能力加强，从而可提高机体免疫力。【具体实施方式】 为了使本专利技术更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解， 这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限止本专利技术的范围，下列实施例中未提及的具体实 验方法，通常按常规实验方法进行。 实施例1 :中药多糖和中药黄酮的制备 a、 按垂盆草30份、金果榄20份、鸡矢藤20份、水牛角30份、蝼蛄30份、香薷10份、防 己10份、半边莲10份和路路通10份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加 入原料重量15倍的纯化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬制2小时，熬制过程中每10分 钟搅拌一次； b、 弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经1000 Orpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上 清； c、 将b中上清本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种猪瘟脾淋源活疫苗用冻干保护剂，其特征在于该冻干保护剂每1000ml磷酸缓冲液中含有中药多糖30～100g、中药黄酮20～60g、法氏囊素2～16mg，所述的中药多糖和中药黄酮从以下中药组合物中提取得到：垂盆草、金果榄、鸡矢藤、水牛角、蝼蛄、香薷、防己、半边莲和路路通。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：沈建军，张秀文，李阳，
申请(专利权)人：浙江美保龙生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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