本发明专利技术涉及猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法，耐热冻干保护剂由下述重量百分比的物质混配而成：明胶1～2％、海藻糖4～6％、胰蛋白胨1～2％、酶解酪蛋白1～2％、聚乙烯吡咯烷酮1～2％、磷酸氢二钾0.164％、磷酸二氢钾0.052％、山梨醇1％、谷氨酸钠1％、精氨酸盐1％，余量为蒸馏水。制备方法：将上述物质配制成二种混合溶液，分别通过除菌再行混配，制得耐热冻干保护剂，使用时按保护剂与病毒抗原液比为1∶1混合，分装后再进行冷冻干燥。冻干前后病毒损失率低，冻干产品耐老化程度高，产品在2～8℃保存24个月，病毒含量不发生改变。本发明专利技术解决猪繁殖与呼吸综合征活疫苗仅能在-15℃条件下保存和运输的技术瓶颈。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农业兽用生物
，涉及生物制品的冷冻干燥技术，特别涉及。
技术介绍
目前，弱毒活疫苗是预防畜禽传染病的主要疫苗之一，在我国动物用疫苗中，活疫苗占相当大的比例。国内疫苗企业常用的保护剂主要是蔗糖、牛奶、明胶等，组方简单，保护性能差。如果在2 8°C条件下，保存期只有3 6个月，多需要在-15°C以下保存。而国内传统的动物用疫苗保护剂的研制相对滞后，使疫苗的长期保存和长途运输受到很大限制， 加上基层防疫部门缺乏必要的冷冻和冷藏设施，容易造成因冷链系统不完善而导致疫苗的效价降低。发达国家在二十世纪八十年代就已开始进行耐热保护剂的研究，目前已经基本采用耐热保护剂生产活疫苗，但研制方法未见详细报道。我国在耐热保护剂方面的研究虽然起步较晚，但近年来研究非常活跃，已经取得了一定的成果。但是，产品配套还不齐全，且与国外同类产品相比较仍有一定差距，目前针对猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法未见报导。因此，本研究针对猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的特性，研制出猪繁殖与呼吸综合征耐热型活疫苗。该疫苗在2 8°C保存M个月，病毒含量不发生改变。依据本研究的工艺进行冻干试验，疫苗产品冻干前后病毒损失率仅为0.2个滴度，冻干的产品在37°C条件下分别保存IOd和30d，病毒损失率分别仅为0. 4和1. 2个滴度之内。本研究解决了猪繁殖与呼吸综合征活疫苗仅能在_15°C条件下保存和运输的技术瓶颈，使该疫苗的储存和运输更方便。
技术实现思路
本专利技术的目的是通过对多种冻干保护剂基质与猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原进行相溶性研究，找出合适的基质，并由此设计一种冻干保护剂配方，并用与此相适应的冻干曲线对病毒抗原进行冻干。用该保护剂与猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原混合，按一定的冻干曲线冻干后所成的活疫苗可在2 8°C条件下长期保存，有望解决我国目前猪繁殖与呼吸综合征活疫苗需在_15°C条件下保存的问题。本专利技术的技术方案为一种猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂，其特征是由下述重量百分比的物质混配而成明胶1 2%、海藻糖4 6%、胰蛋白胨1 2%、酶解酪蛋白1 2%、聚乙二烯吡咯烷酮1 2%、磷酸氢二钾0. 164%、磷酸二氢钾0. 052%,山梨醇1 %、谷氨酸钠 1%、精氨酸盐1%，余量为蒸馏水。猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法，各组分按重量百分比计，其特征在于按以下几个步骤进行(1)将ι 2%明胶、4 6%海藻糖、1 2%胰蛋白胨、1 2%酶解酪蛋白、1 2%聚乙烯吡咯烷酮、0. 164%磷酸氢二钾、0. 052%磷酸二氢钾溶于部分蒸馏水中，在110 116 °C灭菌30分钟；( 将！^山梨醇^^谷氨酸钠^^精氨酸盐溶于剩余的蒸馏水中，并用孔径0. 22 μ m滤膜过滤除菌；C3)将上述第(1)步、第(2)步制得的两种溶液混合，制得耐热冻干保护剂；使用时，按耐热冻干保护剂与病毒抗原液比为 1 1充分混勻，定量分装后立即进行冷冻干燥。冻干曲线设计首先将冻干机预冷至_5°C，将分装好的疫苗装入冻干机箱体内， 再以rC/min的速度降温至-45°C，在此温度下维持3 4个小时后，抽真空至1 后，再开始缓慢升温，14 18小时内升至0°C，之后以每小时5 8°C的速度升温至25°C，维持4 6小时加塞出箱；冻干全程为25 32小时。本专利技术制备的冻干保护剂，冻干前后病毒损失率低，损失率仅为0.2个滴度，冻干产品耐老化程度高，冻干的产品在37°C条件下分别保存IOd和30d，病毒损失率分别仅为 0. 4和1. 2个滴度之内，产品在2 8°C保存M个月，病毒含量不发生改变。本专利技术解决了猪繁殖与呼吸综合征活疫苗仅能在_15°C条件下保存和运输的技术瓶颈，使该疫苗的储存和运输更方便。具体实施例方式下面结合实施例子对本专利技术进行详细的说明1、疫苗抗原的制备生产用毒种为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒JXAl-R株，由中国动物疫病控制中心鉴定、保管和提供。选取所需数量的细胞(已长成单层的细胞转瓶)，弃去生长液，按 1% (V/V)接种生产用毒种病毒，加入含2%胎牛血清的DMEM细胞培养液，37°C旋转(9 12转/小时)培养。在显微镜下观察由病毒引起的CPE，当CPE达到70%以上时收获细胞培养物，冻融1次，经离心或过滤除去细胞碎片，冻存-40°C以下。按《中国兽药典》附录对疫苗抗原进行无菌支原体及外源病毒检验，应符合规定。2、冻干保护剂的配制附表1.是本专利技术实施例1 4所用原料及配比。表1各实施例所用原料及配比重量百分比％权利要求1.一种猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂，其特征是由下述重量百分比的物质混配而成明胶1 2%、海藻糖4 6%、胰蛋白胨1 2%、酶解酪蛋白1 2%、聚乙烯吡咯烷酮1 2%、磷酸氢二钾0. 164%、磷酸二氢钾0. 052%,山梨醇1 %、谷氨酸钠1 %、 精氨酸盐1%，余量为蒸馏水。2.根据权利要求1所述的猪繁殖与呼吸综合征疫苗耐热冻干保护剂的制备方法，各组分按重量百分比计，其特征是按以下几个步骤进行(1)将1 2%明胶、4 6%海藻糖、1 2%胰蛋白胨、1 2%酶解酪蛋白、1 2%聚乙烯吡咯烷酮、0. 164%磷酸氢二钾、 0. 052%磷酸二氢钾溶于部分蒸馏水中，在110 116 °C灭菌30分钟；( 将1 %山梨醇、1 % 谷氨酸钠、精氨酸盐溶于剩余的蒸馏水中，并用孔径0. 22 μ m滤膜过滤除菌；(3)将上述第(1)步、第( 步制得的两种溶液混合，制得耐热冻干保护剂；使用时按耐热冻干保护剂与病毒抗原液比为1 1混合，分装后再进行冷冻干燥。3.根据权利要求2的制备方法，其特征是配制好疫苗后，根据以下要求进行冻干首先将冻干机预冷至-5°C，将分装好的疫苗装入冻干机箱体内，再以1°C /min的速度降温至_45°C，在此温度下维持3 4个小时后，开始抽真空至1 后，再开始缓慢升温，14 18 小时内升至0°C，之后以每小时5 8°C的速度升温至25°C，维持4 6小时加塞出箱；冻干全程为25 32小时。全文摘要本专利技术涉及，耐热冻干保护剂由下述重量百分比的物质混配而成明胶1～2％、海藻糖4～6％、胰蛋白胨1～2％、酶解酪蛋白1～2％、聚乙烯吡咯烷酮1～2％、磷酸氢二钾0.164％、磷酸二氢钾0.052％、山梨醇1％、谷氨酸钠1％、精氨酸盐1％，余量为蒸馏水。制备方法将上述物质配制成二种混合溶液，分别通过除菌再行混配，制得耐热冻干保护剂，使用时按保护剂与病毒抗原液比为1∶1混合，分装后再进行冷冻干燥。冻干前后病毒损失率低，冻干产品耐老化程度高，产品在2～8℃保存24个月，病毒含量不发生改变。本专利技术解决猪繁殖与呼吸综合征活疫苗仅能在-15℃条件下保存和运输的技术瓶颈。文档编号A61K47/42GK102166362SQ20111009198公开日2011年8月31日 申请日期2011年4月13日 优先权日2011年4月13日专利技术者刘汉平, 李伟, 杨雷, 温文生, 漆世华, 祝春花, 秦洪刚, 肖敏, 舒银辉 申请人:武汉中博生物股份有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂，其特征是由下述重量百分比的物质混配而成：明胶１～２％、海藻糖４～６％、胰蛋白胨１～２％、酶解酪蛋白１～２％、聚乙烯吡咯烷酮１～２％、磷酸氢二钾０．１６４％、磷酸二氢钾０．０５２％、山梨醇１％、谷氨酸钠１％、精氨酸盐１％，余量为蒸馏水。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨雷，漆世华，舒银辉，刘汉平，祝春花，温文生，李伟，秦洪刚，肖敏，
申请(专利权)人：武汉中博生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：83
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。