一种冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种国产化、价格低、减少针次、一针防二病，用于儿童预防麻疹和腮腺炎的冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗及其制备方法。采用１０日龄的无特定病原体（ＳＰＦ）鸡胚制成原代鸡胚细胞，１０Ｌ瓶旋转培养成单层细胞，分别接种沪１９１株麻疹病毒和Ｓ７９株腮腺炎病毒，经培养收集麻疹病毒液和腮腺炎病毒液，再经外源因子等检定合格，通过澄清过滤合并成单价病毒原液，将合格的麻疹和腮腺炎单价病毒原液按一定比例配制，加入冻干保护剂制成半成品，最后分装冻干制成最终成品。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物制品领域，具体涉及一种冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗及其制备方法。麻疹是儿童最常见的急性传染病。世界卫生组织(WHO)报道全球每年麻疹发病3000-4000万例，死亡70多万。上海生物制品研究所自上世纪60年代研究成功沪191株麻疹活疫苗以来，对预防和控制麻疹的发病和流行发挥了十分有效的作用。WHO也将麻疹疫苗列为全球六种EPI(全球儿童扩大计划免疫)制品之一。我国目前仍以使用单价麻疹疫苗为主。流行性腮腺炎(简称腮腺炎)是小儿最常见的疾病之一，近几年的发病呈上升趋势。上海生物制品研究所自上世纪80年代初研究成功S79株腮腺炎活疫苗，90年代中开始推广使用以来，对预防和控制腮腺炎的发病作用明显。WHO倡导“全球儿童疫苗计划”，将开发联合疫苗作为其中一项内容。联合疫苗的优越性在于将多种单价疫苗的功能集于一个制品，发挥出一针防多病，减少针次，便于临床上推广使用，进一步提高计划免疫工作的实施，还可节约预防工作的间接成本。国际上早已制备出麻疹、腮腺炎、风疹三联活疫苗，国内近几年才开始研究病毒类联合疫苗。本专利技术的目的是提供一种国产化、价格低、减少针次、一针防二病，用于儿童预防麻疹和腮腺炎的活疫苗及其制备方法。本专利技术用10日龄的无特定病原体(SPF)鸡胚制成原代鸡胚细胞，采用10L瓶旋转培养成单层细胞，分别接种沪191株麻疹病毒和S79株腮腺炎病毒，经培养收集麻疹病毒液和腮腺炎病毒液，再经外源因子等检定合格，通过澄清过滤合并成单价病毒原液。将合格的麻疹和腮腺炎单价病毒原液按一定比例配制，加入冻干保护剂制成半成品，最后分装冻干制成最终成品。本专利技术所采用的沪191株麻疹病毒和S79株腮腺炎病毒，分别是用于生产沪191株麻疹活疫苗和S79株腮腺炎活疫苗的病毒毒株，以上两种疫苗已分别通过国家食品药品监督管理局的新药审评，获得新药证书和生产文号。为制备高滴度的麻疹疫苗病毒原液，本专利技术采用10L瓶细胞旋转培养取代静止培养的方法，增加单层细胞贴壁面积，以细胞数量的增加提高病毒滴度；并改进细胞培养和病毒培养的pH和营养成分等条件，以改善细胞质量提高病毒滴度；同时减少病毒培养的最终加液量，以增加单位体积中的病毒量提高病毒滴度。为制备高滴度的腮腺炎疫苗病毒原液，本专利技术采用3L瓶细胞旋转培养取代10L瓶旋转培养，进一步控制瓶内空间和pH变化，以改善细胞质量提高病毒滴度；严格控制腮腺炎病毒繁殖的收获时间，掌握细胞病变的最佳程度(细胞病变达80-90％)，以获得高滴度病毒原液；减少病毒培养的最终加液量，以增加单位体积中的病毒量提高病毒滴度。本专利技术进一步研究了两种疫苗病毒原液联合配制的最佳比例。根据WHO规程要求联合疫苗中腮腺炎病毒量至少比麻疹病毒高5倍，并兼顾二者相互的稀释作用，最后确定二联疫苗适宜的配比为1份麻疹病毒原液+2～3份腮腺炎病毒原液+0.5～1份保护剂。在本专利技术的实施过程中，疫苗的冻干保护剂由蔗糖、乳糖、山梨醇、味精、明胶、尿素、人白蛋白等成分，按不同种类和浓度配制而成。当冻干保护剂中含有3-8％蔗糖、0.5-1.5％明胶、0.5-1.5％谷氨酸钠、0.3-0.8％尿素、0.3-0.8％人白蛋白时，效果最好。本专利技术所提供的冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗，产品质量超过两种单价疫苗的国家标准，并达到世界卫生组织(WHO)对麻疹、腮腺炎和风疹联合疫苗的质量标准。 本专利技术所提供的冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗，与国外麻疹、腮腺炎和风疹联合疫苗同步进行的临床安全性和有效性比较观察安全性均无明显的局部反应和全身反应；观察有效性的免疫后抗体阳转率，麻疹100％(进口疫苗88.9％)，腮腺炎87.8％(进口疫苗86.7％)；观察3年的免疫持久性的抗体阳性率，麻疹100％(进口疫苗100％)，腮腺炎77.8％(进口疫苗75.0％)。经统计学处理均无显著性差异，说明该产品达到国际同类产品的质量。本专利技术所述之冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗及其制备方法，所采用的病毒毒株为国内所特有，其他原料和试剂亦为国产，生产成本低，一针疫苗可以同时预防麻疹和腮腺炎二种传染病，可广泛应用于儿童免疫接种。以下结合具体的实施例，对本专利技术做进一步的阐述。这些实施例仅用于对本专利技术做说明而不是对本专利技术的限制。实施例1高滴度麻疹疫苗病毒原液的生产采用10L瓶细胞旋转培养取代静止培养的方法，增加单层细胞贴壁面积，以细胞数量的增加提高病毒滴度；改进细胞培养和病毒培养的pH和营养成分等条件，以改善细胞质量提高病毒滴度；减少病毒培养的最终加液量，以增加单位体积中的病毒量提高病毒滴度。具体参数和比较结果列表如下 实施例2高滴度腮腺炎疫苗病毒原液的生产采用3L瓶细胞旋转培养取代10L瓶旋转培养，进一步控制瓶内空间和pH变化，以改善细胞质量提高病毒滴度；严格控制腮腺炎病毒繁殖的收获时间，掌握细胞病变的最佳程度(细胞病变达80-90％)，以获得高滴度病毒原液；减少病毒培养的最终加液量，以增加单位体积中的病毒量提高病毒滴度。具体参数和比较结果列表如下 以3L转瓶培养观察不同细胞病变程度时收获的病毒原液滴度(lgCCID50/ml) 实施例3麻疹、腮腺炎疫苗病毒原液联合配制的最佳比例和避免两种病毒的相互干扰作用根据稀释倍数确定单价病毒原液的最低病毒滴度将单价麻疹、腮腺炎两种病毒原液分别用不同体积的M199维持液做配制比例试验，并进行病毒滴度测定，以了解病毒滴度下降幅度，确定两种病毒原液的最低滴度。结果如下 可见两种疫苗原液1∶1配比病毒滴度下降0.4-0.61gCCID50/ml，1∶2配比病毒滴度下降0.7-0.91gCCID50/ml，1∶3配比病毒滴度下降0.9-1.11gCCID50/ml，1∶4配比病毒滴度下降1.4-1.61gCCID50/ml。考虑二联疫苗最低免疫的病毒含量(麻疹3.31gCCID50/ml，腮腺炎4.01gCCID50/ml)，以及加冻干保护剂的稀释和热稳定性的病毒损失等因素，确定两种疫苗原液的最低病毒滴度为麻疹≥5.21gCCID50/ml，腮腺炎≥5.71gCCID50/ml。观察两种病毒之间的干扰现象及确定两种病毒原液的配比麻疹、腮腺炎两种病毒混合前后的滴度比较(lgCCID50/ml) 可见两种疫苗原液配比后相互之间稀释倍数的病毒滴度下降，1.3-4倍稀释分别为0.31g-1.01g，而相应稀释倍数的对照病毒滴度下降与二联疫苗配比时基本一致，说明滴度下降由相互稀释造成，两种病毒之间无明显干扰现象。根据WHO规程要求联合疫苗中腮腺炎病毒量至少比麻疹病毒高5倍，并兼顾二者相互的稀释作用，最后确定二联疫苗适宜的配比为1份麻疹原液+2～3份腮腺炎原液+0.5～1份保护剂二联活疫苗与同批单价疫苗冻干后的病毒干扰比较用配制二联苗的同一批麻疹和腮腺炎原液，以M199液稀释，即麻疹原液1份+2.5份M199液，腮腺炎原液2.5份+1份M199液，然后加同样比例的保护剂平行冻干。检定结果显示，二联疫苗的麻疹和腮腺炎与单价麻疹和腮腺炎疫苗的滴度、热稳定性差异无显著意义(麻疹t＝0.443，P＞0.05，腮腺炎t＝0.168，P＞0.05)，说明两种病毒混合相互间无明显干扰作用。3批麻腮二联疫苗与单价疫苗的比较 实施例4冻干保护剂及冷冻干燥技术疫苗的冻干保护剂及冻干本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗，其特征在于同时含有麻疹病毒和腮腺炎病毒。

【技术特征摘要】
1.一种冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗，其特征在于同时含有麻疹病毒和腮腺炎病毒。2.根据权利要求1所述的冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗，其特征在于其所含的麻疹病毒为沪191株麻疹病毒。3.根据权利要求1所述的冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗，其特征在于其所含的腮腺炎病毒为S79株腮腺炎病毒。4.一种冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗的制备方法，其特征在于采用无特定病原体(SPF)鸡胚制成原代鸡胚细胞，分别接种沪191株麻疹病毒和S79株腮腺炎病毒，经培养收集麻疹病毒液和腮腺炎病毒液，检定合格后通过澄清过滤合并成单价病毒原液，再将合格的麻疹和腮腺炎单价病毒原液按一定比例配制，加入冻干保护剂制成半成品，最后分装冻干制成最终成品。5.根据权利要求4所述的冻干麻疹、腮腺炎二联活疫苗制备方法，其特征在于麻疹病毒原液、腮腺炎病毒原液和冻干保护剂的配比比例为1份麻疹病毒原液+2～3...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐闻青，王兵，陈志慧，
申请(专利权)人：上海生物制品研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]