一种制备纤维结合蛋白的方法技术

技术编号:1581695 阅读:211 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术属生物化学,血液学,生物制品学领域,具体涉及一种制备纯化纤维结合蛋白的方法。本发明专利技术采用酒精沉淀,PEG沉淀,阴离子层析方法联用制备纤维结合蛋白,同时制得纤维结合蛋白制剂和纤维蛋白原制剂,提高冷沉淀的利用度和最终制品的纯度及稳定性。本发明专利技术制备工艺简单,操作过程短,节约成本,适用于大生产。(*该技术在2023年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物化学,血液学,生物制品学领域,具体涉及。纤维结合蛋白的提纯开始于70年代。1970年Mosesson MW等以冷沉淀为原料,用磷酸缓冲液溶解,分别加甘氨酸和乙醇沉淀后,再溶解,通过DEAE-纤维素柱,磷酸缓冲液洗脱获得纤维结合蛋白。所得的纤维结合蛋白含有纤维蛋白原,产生白色絮状沉淀,使制品的稳定性较差,得率较低,纯度较差。1971年Axen用抗纤维结合蛋白的抗体的亲和层析柱直接从新鲜血浆中吸附纤维结合蛋白,用盐酸-甘氨酸洗脱获得。这种方法首先需要纤维结合蛋白的专一抗体,其成本非常大,不适用于大规模生产。1973年Allen等用硫酸铵沉淀血浆,分离的沉淀物溶解后进行肝素-sepharose亲和层析,用氯化钠溶液洗脱获得纤维结合蛋白,此法获得的纤维结合蛋白纯度较差,稳定性不高。1977年Eva Engvall等根据纤维结合蛋白和明胶结合的特性,发展了明胶-sepharose 4B亲和层析分离纤维结合蛋白的较简单的方法,其利用纤维结合蛋白分子中可与明胶结合的功能区域,将明胶以共价键偶联在Sepharose 4B上,血浆或冷沉淀溶解液直接过柱,进行亲和层析后,再用起始缓本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备纤维结合蛋白的方法,其特征是按下述步骤进行,1)用Tris-HCl缓冲液溶解冷沉淀,2)酒精沉淀,3)第一步PEG沉淀,4)第二步PEG沉淀,5)阴离子交换层析。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:王小倩朱威
申请(专利权)人:上海生物制品研究所
类型:发明
国别省市:31[中国|上海]

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